小鼠鼠痘診斷方法的研究及其綜合防制.pdf

1、運(yùn)用電鏡技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)某實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心發(fā)生的小鼠鼠痘進(jìn)行診斷，為實(shí)驗(yàn)小鼠鼠痘的診斷以及制定綜合防制措施提供理論依據(jù)和參考。 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明：因運(yùn)輸和氣候變化引起鼠群突然發(fā)病，幼齡鼠及繁育高峰種鼠易感染發(fā)病，雄性鼠較雌性鼠易感，而老齡鼠不易感。且外觀(guān)癥狀不典型，病期極少見(jiàn)小鼠頭部、四肢和尾部潰瘍。肝、脾、十二指腸和小腸出血、腫脹和壞死等病變較為典型。 動(dòng)物感染性試驗(yàn)：分別將發(fā)病即將死亡的小鼠肝、肺、

2、脾、腎臟等病理組織經(jīng)碾磨制成細(xì)胞懸液，以腹腔注射的方式將病毒接種到BALB/c小鼠和KM小鼠、Wistar大鼠和家兔體內(nèi)，接種后第五天，感染小鼠全部死亡。接種后2周，大鼠和兔未表現(xiàn)出異常。結(jié)果表明：鼠痘病毒感染并致死BALB/c小鼠和KM小鼠，且BALB/c小鼠感染后的病理變化比KM小鼠更為典型。而鼠痘病毒不感染W(wǎng)istar大鼠和家兔。 將病死鼠肝、肺、腎、脾和腸等內(nèi)臟組織，經(jīng)戊二醛固定、制片，透射電鏡觀(guān)察。結(jié)果顯示在肝、肺、腎

3、、脾和腸的組織細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均有大量的卵圓形病毒顆粒，其核心呈啞鈴狀。 將收集的病變肝、脾組織分別放入勻漿器中反復(fù)碾磨、離心分離提純，進(jìn)行負(fù)染后電鏡觀(guān)察，結(jié)果觀(guān)察到大量的病毒顆粒，形狀為卵圓形或磚形，其大小為160-190×250-300nm。 自然感染和人工感染發(fā)病的小鼠肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胰、腸等組織常規(guī)H．E染色，光鏡可觀(guān)察到自然感染和人工感染鼠痘小鼠主要組織病理變化均表現(xiàn)為脾臟淤血，局灶性壞死和紅髓中多核巨細(xì)胞顯著

4、增多；肝臟局灶性壞死，門(mén)管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)多核巨細(xì)胞；腸表現(xiàn)為出血性壞死性腸炎特征：大腦可見(jiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)節(jié)；心臟、肺臟、腎臟和胰臟表現(xiàn)局部的淤血、出血和細(xì)胞壞死。 采集發(fā)病后47天存活小鼠的血清20份，用ELISA試驗(yàn)方法進(jìn)行抗體檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性率達(dá)到100％。 從感染鼠的不同組織中提取病毒核酸，用痘病毒基因組中A－型包涵體蛋白基因作為靶基因，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，PCR檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果表明該DNA片段的核苷酸序列與

5、鼠脫腳病病毒的A一型包涵體蛋白基因序列同源性高達(dá)98.6％。 經(jīng)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、動(dòng)物感染試驗(yàn)、電鏡觀(guān)察、組織病理學(xué)觀(guān)察、血清學(xué)試驗(yàn)以及PCR技術(shù)檢測(cè)分析進(jìn)一步鑒定表明，該鼠群發(fā)病為急性型流行性鼠痘。 根據(jù)鼠痘的流行特點(diǎn)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷方法，提出鼠痘診斷要點(diǎn)：對(duì)于急性型鼠痘建議采取臨床病變和電鏡檢查病原的診斷方法；對(duì)于典型鼠痘（亞急性型）應(yīng)根據(jù)臨床癥狀和病理學(xué)變化可以做出診斷；對(duì)于流行后期的慢性型則采用ELI