唐氏綜合征產(chǎn)前快速診斷方法研究.pdf

1、唐氏綜合征(Downsyndrome，DS)又稱21三體綜合征和先天愚型，是常見的出生缺陷。以嚴重先天性智力低下為主要表型特征，迄今缺乏有效的治療手段。因此，對該病進行產(chǎn)前診斷、預防其活產(chǎn)兒出生有重要意義。 傳統(tǒng)的產(chǎn)前診斷方法是妊娠中期羊膜腔穿刺，取羊水培養(yǎng)，中期染色體G顯帶核型分析。但羊水培養(yǎng)實驗周期長，花費人力多，技術(shù)要求和失敗風險均較高。隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，開始了以DNA為基礎(chǔ)的快速產(chǎn)前診斷方法的探索。實時熒光定量P

2、CR技術(shù)是高通量、自動化程度高的檢測技術(shù)，為研究基因表達量(mRNA)的首選方法；比較基因組雜交技術(shù)能通過少量DNA提供完整的核型分析。這兩種方法均能在2-4天內(nèi)完成實驗。本研究在妊娠不同時期(早期、中期)，以不同妊娠產(chǎn)物為實驗材料(絨毛、羊水)，探討實時熒光定量PCR產(chǎn)前診斷21-三體的可行性；探討比較基因組雜交技術(shù)用于產(chǎn)前診斷胎兒染色體異常的優(yōu)缺點。 第一部分實時熒光定量PCR技術(shù)用于產(chǎn)前羊水診斷DS的可行性研究 目

3、的：探討實時熒光定量PCR技術(shù)用于產(chǎn)前診斷DS的可行性。 方法：選取21號染色體長臂唐氏綜合征關(guān)鍵區(qū)域3(DownSyndromecriticalregion3DSCR3)的基因片斷，利用高通量實時熒光定量PCR技術(shù)，檢測未經(jīng)培養(yǎng)羊水中g(shù)DNA的DSCR3的基因量，并以看家基因GAPDH片斷作校正，以DS患者淋巴細胞gDNA檢測結(jié)果為陽性對照；正常人gDNA檢測結(jié)果為陰性對照；檢測結(jié)果與羊水細胞培養(yǎng)，中期染色體G顯帶核型分析進行

4、比較。 結(jié)果：DS胎兒羊水中，DSCR3/GAPDH比值為1.69+-0.17，而正常胎兒該比值為1.06+-0.14，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.001)，DS患者與正常人相比，DSCR3/GAPDH比值分別為1.67+-0.13、0.99+-0.10，差異亦有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。實時熒光定量PCR方法診斷結(jié)果與常規(guī)細胞培養(yǎng)染色體核型分析結(jié)果一致。前者一天可完成實驗，后者需要14-20天。 結(jié)論：實時熒

5、光定量PCR方法能快速、靈敏、準確地區(qū)分出DS患者與正常人；能用于未培養(yǎng)羊水檢測DS，使實驗周期大大縮短，該方法有望用于DS的產(chǎn)前快速診斷。 第二部分比較基因組雜交技術(shù)在早孕絨毛組織遺傳學診斷中的應(yīng)用 目的：探討比較基因組雜交技術(shù)用于早孕絨毛遺傳學診斷的優(yōu)缺點。 方法：選擇自然流產(chǎn)患者在無菌條件下經(jīng)宮頸取絨毛，其中包括難免流產(chǎn)的新鮮組織標本和過期流產(chǎn)的陳舊組織標本。每份組織標本中一部分進行絨毛細胞培養(yǎng)、染色體核型

6、分析，另一部分用于提取gDNA，進行CGH實驗研究，用CGH分析軟件計算待測gDNA和對照gDNA的熒光強度比值，根據(jù)比值高低確定待測gDNA片段缺失或片斷擴增。 結(jié)果：共分析了38例自然流產(chǎn)組織標本，CGH實驗成功率達100﹪，而常規(guī)絨毛細胞培養(yǎng)染色體核型分析成功率為82﹪(31/38)。兩種方法的診斷符合率為90﹪(28/31)。在3例出現(xiàn)不同診斷結(jié)果的病例中，1例絨毛細胞培養(yǎng)顯示染色體核型正常，而CGH顯示3q(22-24