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文檔簡介
1、目的:(1)克隆人癌胚抗原(carcinoembryonic antigen)基因片段,構建pcDNA3.1-CEA基因疫苗。(2)檢測其在人舌癌Tca8113細胞株(human tongue squamous cell carcinoma cell line8113,Tca8113)中的表達。 方法:(1)采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)技術,從人結腸癌組織中擴增出人CEA基因片段,通過DNA重組技術將該基因片段重組于
2、pcDNA3.1真核表達載體上,構建成pcDNA3.1-CEA基因疫苗。(2)通過用酶切、PCR擴增電泳分析及DNA測序的方法對重組DNA進行鑒定。(3)轉染人舌癌Tca8113細胞,以轉染空載體組做實驗對照組,以未轉染的舌癌細胞作空白對照組,通過RT-PCR和免疫組化檢測其在人舌癌Tca8113細胞中的表達。 結果:(1)經(jīng)酶切、PCR擴增電泳分析和DNA測序證實,本實驗構建的重組質粒目的基因片段為人CEA-cDNA。(2)經(jīng)
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