結(jié)締組織生長因子在顱內(nèi)動脈瘤壁上的表達(dá)及術(shù)中熒光造影的應(yīng)用.pdf

1、顱內(nèi)動脈瘤(Intracranial Aneurysm,IA)的發(fā)病率約為2.3-6％,多見于青壯年(平均年齡約為50歲),致殘率及死亡率高。由該病引發(fā)蛛網(wǎng)膜下腔出血的死亡率為30％-40％,大于1/3的患者遺留有嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙,IA是一種嚴(yán)重危害人類生存健康的復(fù)雜疾病。目前IA的病因?qū)W說主要由先天性血管壁發(fā)育不良和顱內(nèi)動脈獲得性退行性病變等理論構(gòu)成。
　　 現(xiàn)有的研究表明:IA是由多種基因和多種環(huán)境因素相互作用進(jìn)而導(dǎo)致多種

2、基因表達(dá)調(diào)控失衡的復(fù)雜疾病。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),部分顱內(nèi)動脈瘤患者呈家族性發(fā)病傾向,IA患者的一級親屬發(fā)病的風(fēng)險明顯增高,而且動脈瘤破裂機(jī)率是二級親屬的7倍。顱內(nèi)動脈瘤可與馬凡綜合征、常染色體顯性遺傳性多囊腎、埃勒斯-當(dāng)洛綜合征等遺傳性疾病并發(fā),因此顯示遺傳學(xué)因素在IA的發(fā)病機(jī)理上有重要意義。
　　 我們運(yùn)用高通量的基因芯片技術(shù)對7例顱內(nèi)動脈瘤組織的基因表達(dá)譜進(jìn)行初步分析。顱內(nèi)動脈瘤組織總mRNA表達(dá)譜與正常血管組織有明顯差異,一

3、系列已知以及未知的基因均在顱內(nèi)動脈瘤組織中高表達(dá)。發(fā)現(xiàn)其中結(jié)締組織生長因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)在顱內(nèi)動脈瘤上高表達(dá)7.073倍,并且在顱內(nèi)動脈瘤標(biāo)本的RNA和蛋白水平得到證實(shí)。
　　 顱內(nèi)動脈瘤手術(shù)中存在載瘤動脈及其分支血管、穿通支血管狹窄或痙攣以及動脈瘤頸殘留等并發(fā)癥,如何術(shù)中評價動脈瘤夾閉的效果一直是神經(jīng)外科醫(yī)生思考的問題。吲哚菁綠(Indocyanine Green,

4、ICG)熒光血管造影是近年來出現(xiàn)的術(shù)中評價血管通暢性的簡便易行的方法,相對與其他的術(shù)中檢查技術(shù),ICG造影費(fèi)用低廉,操作簡便,耗時短,精確度也較高。早期應(yīng)用于肝纖維化診斷和眼科手術(shù)中,而且ICG排泄試驗(yàn)與肝纖維化的細(xì)胞因子TGF-β1表達(dá)具有良好相關(guān)性,ICG可以作為診斷早期肝纖維化的敏感指標(biāo)。我們通過近期97例顱內(nèi)動脈瘤手術(shù)患者術(shù)中使用ICG的經(jīng)驗(yàn)得出結(jié)論:ICG熒光造影是一種術(shù)中監(jiān)測顱內(nèi)動脈瘤頸是否殘留、載瘤動脈是否狹窄及穿通支血管

5、是否閉塞的重要檢查手段,有望將來成為顱內(nèi)動脈瘤手術(shù)中的常規(guī)檢查手段。
　　 第一部分、利用基因芯片技術(shù)篩選顱內(nèi)動脈瘤的特異性基因
　　 目的:收集顱內(nèi)動脈瘤組織標(biāo)本以及正常血管組織標(biāo)本,提取總mRNA,利用總mRNA基因表達(dá)芯片,篩選顱內(nèi)動脈瘤的特異性表達(dá)的候選基因。
　　 方法:
　　 1.收集7例顱內(nèi)動脈瘤患者的手術(shù)組織樣本以及正常血管的手術(shù)組織樣本。提取組織總mRNA,鑒定mRNA質(zhì)量。通過mRNA

6、表達(dá)芯片,篩選在顱內(nèi)動脈瘤中表達(dá)增高的候選癌基因。
　　 2.采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。通過統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn),去除微陣列的假陽性結(jié)果,檢驗(yàn)過程均以P≤0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.顱內(nèi)動脈瘤組織mRNA表達(dá)譜與正常血管組織mRNA表達(dá)譜具有明顯差異。
　　 2.顱內(nèi)動脈瘤組織mRNA表達(dá)譜中,CTGF,GAB1,PTX3以及CTSL表達(dá)相對正常血管組織mRNA表達(dá)譜明顯

7、升高(p＜0.001),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:顱內(nèi)動脈瘤組織總mRNA表達(dá)譜與正常血管組織有明顯差異,一系列已知以及未知的基因均在顱內(nèi)動脈瘤組織中高表達(dá)。
　　 第二部分、結(jié)締組織生長因子在人顱內(nèi)動脈瘤標(biāo)本中表達(dá)
　　 目的:我們的前期基因芯片數(shù)據(jù)證實(shí)CTGF在顱內(nèi)動脈瘤組織中高表達(dá),我們在RNA和蛋白水平探討CTGF在顱內(nèi)動脈瘤組織中的表達(dá)情況,為顱內(nèi)動脈瘤的病因研究提供線索。
　　 方法:

8、r>　　 1.顱內(nèi)動脈瘤標(biāo)本16例,取同期急診顱腦外傷病人手術(shù)中的無法保留的顳淺動脈及術(shù)中減壓的腦組織動脈血管作為對照。運(yùn)用半定量RT-PCR和Western Blot及免疫組化染色分析CTGF在顱內(nèi)動脈瘤上的表達(dá)。
　　 2.對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.動脈瘤壁中膜和外膜CTGF表達(dá)陽性率較內(nèi)膜高(X2=9.94,P＜0.05)。
　　 2.Western Blot檢測顱內(nèi)動脈瘤(

9、IA)及腦外傷減壓手術(shù)的正常血管(NA)及RT-PCR檢測顱內(nèi)動脈瘤(IA)及顳淺動脈(STA)表達(dá)CTGF水平。與對照組(NA/STA)比較試驗(yàn)組(IA)CTGF表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:CTGF可能與顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)生和基質(zhì)重塑有關(guān)。顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)生,生長和破裂是個復(fù)雜的過程,CTGF可能是影響因素之一。
　　 第三部分、吲哚菁綠熒光造影在顱內(nèi)動脈瘤手術(shù)中的應(yīng)用
　　 目的:

10、探討吲哚菁綠(ICG)腦血管造影在顱內(nèi)動脈瘤手術(shù)中的作用。
　　 方法:2007年3月至2011年3月開顱手術(shù)治療的顱內(nèi)動脈瘤患者97例,帶有熒光功能的手術(shù)顯微鏡下觀察術(shù)野中血管,指導(dǎo)手術(shù)操作。術(shù)后行3DCTA或DSA檢查,評估術(shù)中ICG熒光造影對開顱手術(shù)治療顱內(nèi)動脈瘤的作用。
　　 結(jié)果:術(shù)中確認(rèn)動脈瘤頸殘留5例,載瘤動脈分支血管閉塞2例,穿通血管誤夾7例,重新調(diào)整動脈瘤夾位置后,再次熒光血管造影,證實(shí)動脈瘤頸夾閉滿意