一種引起肉仔雞免疫和生長抑制病的新病毒的初步鑒定及免疫檢測方法的建立.pdf

1、雞免疫和生長抑制病病毒是近年來嚴重危害養(yǎng)雞業(yè)的一種新的疾病。我們從發(fā)生免疫和生長抑制病的肉仔雞中分離到了一種新的病毒，對其生物學特性、理化特性、形態(tài)特性等方面進行了初步鑒定，并建立了間接ELISA和間接IFA檢測方法。 1.負染法電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，人工感染的SPF雞胚尿囊液中有直徑為40-70nm的病毒粒子存在，呈不規(guī)則的六邊形，近似圓形或橢圓形，有3～5nm纖突。人工感染的SPF雞胚和雞的腺胃、小腸、肝臟和腎臟超薄切片電鏡也發(fā)現(xiàn)組

2、織細胞的細胞核內(nèi)有類似病毒粒子。 2.病毒生物學特性試驗表明，該病毒為RNA病毒，通過尿囊腔接種，可在10日齡SPF雞胚上生長，接種后3-5天可引起雞胚規(guī)律性死亡，病毒在10日齡SPF雞胚上增殖的高峰為接種后72h。用Vero細胞、PK15和雞胚成纖維細胞(CEF)進行適應(yīng)性培養(yǎng)，未能成功。3.理化特性試驗結(jié)果表明，該病毒對20％乙醚有較強的耐受性，對4.8％氯仿有一定的耐受性，初步說明該病毒無囊摸。在pH4～10范圍內(nèi)37℃2

3、h病毒完全耐受。在酸性(pH3.0)環(huán)境中37℃2h，仍有病毒能存活；在堿性(pH11.0)環(huán)境中37℃2h病毒完全滅活；在60℃下30min病毒完全滅活，而56℃下30min病毒仍有耐受性。 4.制備出了兔抗雞免疫和生長抑制病毒免疫血清。經(jīng)病毒中和試驗和瓊脂擴散試驗，表明該病毒存在中和抗原，而無瓊擴抗原。制備的兔抗雞免疫和生長抑制病病毒免疫血清的中和效價PD50為1/104。 5.利用自制的陽性兔抗雞免疫和生長抑制病病

4、毒免疫血清，在實驗室條件下建立起了間接酶聯(lián)免疫吸附試驗法(間接ELISA)和間接免疫熒光法(IFA)兩種免疫檢測方法。間接ELISA法的最佳反應(yīng)條件為包被抗原的最佳稀釋度為1：100，酶標二抗的最佳稀釋度為1:1000，底物最佳反應(yīng)時間為30分鐘。間接免疫熒光(IFA)的最佳反應(yīng)條件為兔抗該病毒免疫血清的最佳稀釋度為1：10，羊抗兔IgG-FITC熒光二抗最佳稀釋度為1：100，感作時間為45min。經(jīng)特異性和重復(fù)性試驗，表明兩種方法均