人腺上皮腫瘤患者術(shù)期化療后腫瘤組織中Syk表達(dá)變化及其臨床意義研究.pdf

1、第一部分 Syk在人腺上皮惡性腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)一、Syk在人不同腺上皮組織來(lái)源腫瘤細(xì)胞株中的表達(dá) 目的：探討不同組織來(lái)源的人腺上皮腫瘤細(xì)胞中Syk的表達(dá)。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)7種人腺上皮腫瘤細(xì)胞株中Syk蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：人乳腺癌細(xì)胞MCF-7中Syk蛋白表達(dá)陽(yáng)性，而MDA-MB-231則表達(dá)陰性；人胰腺癌細(xì)胞PANC-1、SW1990和Capanc-2中Syk蛋白均表達(dá)陽(yáng)性；人肺腺癌細(xì)胞株GLC

2、-82和肝癌細(xì)胞株SMMC-7721中Syk蛋白均表達(dá)陽(yáng)性。 結(jié)論：Syk在絕大部分人腺上皮惡性腫瘤細(xì)胞株中呈陽(yáng)性表達(dá)，提示Syk有可能成為腺上皮來(lái)源惡性腫瘤患者的診斷等臨床應(yīng)用的生物學(xué)指標(biāo)。 二、乳腺癌、胰腺癌組織中 syk 的表達(dá)及其臨床意義 目的：探討 syk 基因及其蛋白在人乳腺癌及其胰腺癌組織中的定量表達(dá)及其臨床意義。 方法：采用免疫組織化學(xué)法和熒光定量PCR法分別檢測(cè)30例人乳腺癌及其22例胰

3、腺癌癌組織、對(duì)應(yīng)正常乳腺組織中sykmRNA 和蛋白的表達(dá)變化，探討syk與臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果：30例乳腺癌組織和對(duì)應(yīng)正常乳腺組織中sykmRNA 陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.3％(19/30)、93.3％(28/30)；癌組織中 sykmRNA 的平均表達(dá)水平(6.17±0.0.65)×10<'4>明顯低于對(duì)應(yīng)的正常乳腺組織(80.37±0.125)×10<'4>，兩者之間有顯著性差異(P<0.001)。Syk 蛋白在乳腺癌

4、癌組織和正常乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為60％和90％，兩者之間有顯著性差異(P<0.01)。sykmRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床TNM分期顯著相關(guān)(P<0.05)，而與腫瘤的大小、病理分級(jí)、ER和PR狀況無(wú)關(guān)(P>0.05)。22例胰腺癌患者的癌組織和正常胰腺組織中 sykmRNA 陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.6％和90.9％。胰腺癌組織sykmRNA 平均表達(dá)水平為(4.45±0.225)×10<'4>，明顯低于對(duì)應(yīng)的正常胰

5、腺組織(52.9±0.026)×10<'4>，兩者之間有顯著性差異(P<0.001)；Syk蛋白在胰腺癌和正常胰腺組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為54.5％(12/22)，86.3％(19/22)，兩者之間有顯著性差異(P<0.01)；syk mRNA 和蛋白表達(dá)率/水平的下調(diào)與胰腺癌臨床 TNM 分期、腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，而與腫瘤的大小、病理分級(jí)無(wú)關(guān)(P>0.05)；胰腺癌患者Syk蛋白與sykmRNA表達(dá)一致率為87.5％

6、；22例胰腺癌組織有13例p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為59.1％，16例有腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌組織有8例p53表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為50.0％，無(wú)腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的6例胰腺癌組織有5例p53表達(dá)陽(yáng)性，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胰腺組p53蛋白表達(dá)差異有顯著性，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組p53蛋白陽(yáng)性率低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；p53 蛋白表達(dá)陽(yáng)性的13例胰腺癌瘤體中，10例檢出.sykmRNA的表達(dá)，p53蛋白陰性6例胰腺癌組織中只有

7、2例檢出syk mRNA的表達(dá)，p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性的胰腺癌組織中，Syk的表達(dá)檢測(cè)值高于p53 表達(dá)陰性的胰腺癌組織(P<0.05)，Syk的表達(dá)與p53表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.8531)。22例胰腺癌組織中，Syk<'+++>、Syk<'++>、Syk<'+>、Syk<'->患者的平均生存時(shí)間分別為12、10.3、5.6、1.8個(gè)月，各組之間有顯著差異(P<0.01、)，Syk陽(yáng)性表達(dá)越強(qiáng)，患者的平均生存時(shí)間越長(zhǎng)。 結(jié)論：syk

8、mRNA 和蛋白表達(dá)率/水平降低或缺失可能與乳腺癌及其胰腺癌發(fā)生、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。 第二部分人腺上皮腫瘤患者術(shù)前化療后腫瘤組織 syk 的表達(dá)變化及其臨床意義 一、洛鉑術(shù)前化療后乳腺癌組織 Syk 的表達(dá)及其臨床意義 (一)注射用洛鉑在乳腺癌患者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究 目的：探討注射用洛鉑在乳腺癌患者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究 方法：應(yīng)用高效液相色譜法檢測(cè)8例乳腺癌患者血漿及乳腺癌組織中洛鉑的藥物濃度及其

9、分別檢測(cè)40例乳腺癌患者應(yīng)用洛鉑化療前、后第1、3、5、21天的血常規(guī)、生化全項(xiàng)、出凝血時(shí)間、免疫功能等指標(biāo)的變化。應(yīng)用高效液相色譜法檢測(cè)患者化療前、化療后第24小時(shí)，血漿中和乳腺癌組織中的洛鉑藥物濃度；應(yīng)用HE染色，顯微鏡觀察術(shù)前化療后乳腺癌腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：洛鉑在乳腺癌患者血漿中藥代動(dòng)力學(xué)符合二室模型擬合，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：將洛鉑按照50mg/m<'2>體表面積給藥，輸注完畢后0、0.2、0.5、1、2、4、6、

10、8、12、24小時(shí)的平均血藥濃度分別為26.26±3.10、16.83±2.00、11.24±1.63、6.43±1.45、4.45±1.57、2.19±0.26、1.53±0.25、0.79±0.18、0.47±0.11、0.02±0.01mg.L<'-1>；最大血藥濃度(C<,max>)為25.56±3.04mg.L<'-1>；分布半衰期(T<,1/2α>)為15±2.4min；消除半衰期(T<,1/2β>)為162±15min；藥

11、物由周邊室至中央室的轉(zhuǎn)運(yùn)速率常數(shù)(K<,21>)為1.00±0.28/小時(shí)；藥物自中央室消除速率常數(shù)(K<,10>)為0.74+0.11/小時(shí)；藥物自中央室至周邊室的轉(zhuǎn)運(yùn)速率常數(shù)(K<,12>)為1-31±0.27/小時(shí)；藥時(shí)曲線(xiàn)下面積(AUC)為35.20±5.47g·h·L<'-1>；血漿清除率(CL)為8.73±1.51L·h<'-1>。 結(jié)論：將洛鉑按照50mg/m<'2>體表面積給藥，在輸注洛鉑24小時(shí)后，腫瘤組織中洛

12、鉑藥物濃度明顯高于同時(shí)間點(diǎn)血漿中藥物濃度。洛鉑可用于乳腺癌患者術(shù)前化療。 (二)乳腺癌患者經(jīng)洛鉑術(shù)前化療后腫瘤組織中syk的表達(dá)變化及其臨床意義 目的：探討乳腺癌患者洛鉑術(shù)前化療后腫瘤組織中Syk表達(dá)變化及其臨床意義。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法和熒光PCR法分別檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231經(jīng)洛鉑作用24小時(shí)及其30例初治且術(shù)前無(wú)化療史的乳腺癌患者和30例乳腺癌患者經(jīng)洛鉑術(shù)前24小時(shí)，腫瘤

13、細(xì)胞或組織中syk和p53的表達(dá)變化及其乳腺癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)論：乳腺癌患者經(jīng)洛鉑術(shù)前化療后，腫瘤組織syk mRNA 和蛋白表達(dá)水平明顯增強(qiáng)。 二、術(shù)前吉西他濱化療后胰腺癌組織syk的表達(dá)變化及其臨床意義 目的：探討術(shù)前化療吉西他濱化療后胰腺癌組織syk的表達(dá)、組織病理學(xué)變化及其臨床意義。 方法：應(yīng)用 HE 染色和免疫組化法分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組(術(shù)前24小時(shí)術(shù)前吉西他濱化療)及對(duì)照組(未行任何化療的)胰

14、腺癌患者正常胰腺組織及其癌組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、Syk和p53表達(dá)變化及其相互關(guān)系。 結(jié)論：胰腺癌患者術(shù)前吉西他濱化療可明顯提高Syk的陽(yáng)性表達(dá)率，可改善患者預(yù)后。 第三部分術(shù)前化療影響人腺上皮腫瘤組織中Syk表達(dá)的機(jī)制研究 一、 syk 在乳腺癌組織中失活的甲基化機(jī)制探討 目的：探討syk mRNA 在乳腺癌中失活的甲基化機(jī)制。 方法：應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)方法檢測(cè) 30 例乳腺癌癌組織

15、中syk基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化改變的特點(diǎn)與臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果：30例正常乳腺腺組織中均未發(fā)現(xiàn)甲基化，而在30例乳腺癌組織中17例發(fā)生甲基化，正常乳腺組織、癌組織甲基化發(fā)生率(0：56.7％)之間有顯著性差異(P<0.001)。Ⅲ期患者 syk 基因啟動(dòng)子甲基化率41.6％明顯高于Ⅱ期患者的22.2％(P<0.001)。syk基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化與臨床TNM分期正相關(guān)，而與患者腫瘤分化程度、腫瘤大小和腫瘤部位無(wú)明顯相關(guān)性

16、。 結(jié)論：?jiǎn)?dòng)子區(qū)甲基化可能是導(dǎo)致乳腺癌組織中 syk 失活的原因之 二、乳腺癌患者洛鉑術(shù)前化療后術(shù)前化療后 syk 在乳腺癌組織中表達(dá)增強(qiáng)的機(jī)制探討 目的：探討 sykmRNA 在乳腺癌患者洛鉑術(shù)前化療后，腫瘤組織Syk表達(dá)增強(qiáng)的分子機(jī)制。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法分別檢測(cè)30例未行化療乳腺癌患者、20例術(shù)前化療后乳腺癌患者癌組織標(biāo)本中和Syk、IL-2Rβ、CD<,4>和c-myc的表達(dá)及其相互之

17、間的關(guān)系。 結(jié)果：20例乳腺癌患者術(shù)前化療后腫瘤組織中Syk、IL-2Rβ、CD<,4>和c-myc均表達(dá)增強(qiáng)，Syk和c-myc陽(yáng)性表達(dá)率分別為86.7％、70％，較對(duì)照組的陽(yáng)性表達(dá)率(63.3％、52.8％)明顯增高(P<0.05)；而IL-2Rβ和CD<,4>在兩組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論：syk基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化可能是導(dǎo)致乳腺癌組織中 syk 失活的原因之一。術(shù)前化療后可增強(qiáng)腫瘤組織中Syk和c-