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1、目的： 建立檢測(cè)GITRmRNA的SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)方法，并通過(guò)檢測(cè)AR病患者外周血中GITRmRNA的表達(dá)水平以探討GITR分子在該疾病中的意義。 方法： (1)制備含GITR基因的重組質(zhì)粒，并以此重組質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品，建立檢測(cè)該基因的SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，并評(píng)價(jià)該方法的線(xiàn)性范圍、特異性及精密度水平。 (2)運(yùn)用上述方法檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)變應(yīng)
2、性鼻炎患者組(n=23)、臨床緩解組(n=17)及正常對(duì)照組(n=24)外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)中GITRmRNA的相對(duì)表達(dá)水平，來(lái)評(píng)價(jià)GITR與AR的相關(guān)性。 結(jié)果： (1)重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、限制性?xún)?nèi)切酶酶切及測(cè)序鑒定為含GITR目的片段103個(gè)堿基對(duì)，未突變。該方法標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)r2為0.999，線(xiàn)性范圍為(101～106)copies/μ1，最低
3、檢出限達(dá)101copies/μ1，批內(nèi)CV為6.8％，批間CV為12.9％和9.2％。 (2)AR未治療組(n=23)外周血中GITRmRNA相對(duì)表達(dá)水平明顯高于AR臨床緩解組(n=17)和正常對(duì)照組(n=24)(x2=7.80，P＜0.05；x2=1.2.43，P＜0.01)，而AR臨床緩解組外周血中GITRmRNA相對(duì)表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.056，P＞0.05)。 結(jié)論： (1)本
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