GnRHⅠ及GnRH受體在卵巢腫瘤中的表達(dá)及GnRH激動(dòng)劑對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用.pdf

1、卵巢癌在婦科惡性腫瘤中死亡率最高，但其病因目前尚不明確。大量流行病學(xué)調(diào)查證明，卵巢癌的發(fā)生與高促性腺激素水平刺激和過(guò)度排卵有關(guān)。GnRH存在多種亞型，主要調(diào)節(jié)性腺內(nèi)受體形成和激素功能，在哺乳動(dòng)物目前發(fā)現(xiàn)的主要是GnRHⅠ和GnRHⅡ。GnRH及其受體高表達(dá)于激素依賴性腫瘤，并對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)揮重要的調(diào)控作用，如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、肝癌等。有關(guān)靶向應(yīng)用激素相關(guān)試劑的研究顯示，人工合成GnRH類似物是一種高效低毒的腫瘤殺傷劑，目

2、前已應(yīng)用于卵巢癌的臨床治療。因此，對(duì)GnRH及其受體功能和作用機(jī)制的深入研究將為開(kāi)發(fā)卵巢癌靶向治療藥物提供理論依據(jù)。
　　 本研究通過(guò)系統(tǒng)地觀察GnRHⅠ及GnRH受體在上皮性卵巢良性和惡性腫瘤組織中的表達(dá)差異，揭示了兩者與卵巢癌的病理分化級(jí)別的關(guān)系；并進(jìn)一步通過(guò)觀察GnRH類似物對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，闡明了GnRH激動(dòng)劑增加化療效果的機(jī)制，為在分子水平靶向治療卵巢癌提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 第一部分 GnRHⅠ和G

3、nRH受體在卵巢腫瘤中的表達(dá)及意義
　　 目的：觀察GnRHⅠ和GnRH受體在上皮性卵巢良性和惡性腫瘤組織中的表達(dá)差異，揭示兩者與卵巢癌病理分化級(jí)別的關(guān)系。
　　 方法：采用免疫組化SP法，檢測(cè)22例卵巢良性上皮性腫瘤以及39例卵巢癌中GnRHⅠ和GnRH受體的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.GnRHⅠ和GnRH受體的定位及分布：卵巢上皮性腫瘤組織免疫組織化學(xué)SP染色特異性良好。卵巢上皮性腫瘤組織中GnR

4、HⅠ陽(yáng)性產(chǎn)物大多位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，胞核內(nèi)無(wú)陽(yáng)性產(chǎn)物；卵巢上皮性腫瘤組織中GnRH受體陽(yáng)性產(chǎn)物也大多位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，胞核內(nèi)無(wú)陽(yáng)性產(chǎn)物。
　　 2.卵巢上皮性腫瘤中GnRHⅠ的表達(dá)狀況及其與組織分化的關(guān)系：卵巢良性上皮性腫瘤GnRHⅠ陽(yáng)性表達(dá)率（54.5％）低于卵巢癌中GnRHⅠ的表達(dá)（79.5％），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=4.21，P<0.05）；病理分級(jí)中G1級(jí)卵巢癌組織GnRHⅠ的陽(yáng)性率（50％）低于G2級(jí)卵巢癌組織Gn

5、RHⅠ的陽(yáng)性率（91.7％），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=5.04，P<0.05）；G3級(jí)卵巢癌組織中GnRHⅠ陽(yáng)性表達(dá)率為（93.3％），與G2級(jí)卵巢癌組織表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=0.03，P>0.05）。
　　 3.卵巢上皮性腫瘤中GnRH受體的表達(dá)狀況及其與組織分化的關(guān)系：卵巢良性上皮性腫瘤中GnRH受體陽(yáng)性表達(dá)率（81.8％）高于卵巢癌（53.8％），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=4.77，P<0.05）；病理分級(jí)中G1級(jí)卵巢癌

6、組織GnRH受體的陽(yáng)性率（16.7％）低于G2級(jí)卵巢癌組織GnRH受體的陽(yáng)性率（58.3％），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=4.44，P<0.05）；G3級(jí)卵巢癌組織中GnRH受體陽(yáng)性表達(dá)率為（80.0％），與G2級(jí)卵巢癌組織表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=1.50，P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.GnRHⅠ及GnRH受體在卵巢良性及惡性上皮性腫瘤組織中均有表達(dá)，說(shuō)明卵巢上皮性腫瘤組織中存在GnRH自/旁分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng)。

7、>　　 2.GnRHⅠ及GnRH受體表達(dá)與卵巢癌的病理組織學(xué)分級(jí)有關(guān)。隨分化級(jí)別的增高，GnRHⅠ及GnRH受體的表達(dá)水平增高，提示卵巢癌中GnRHⅠ、GnRH受體與卵巢癌增殖、侵襲力及不良預(yù)后有關(guān)。
　　 第二部分 GnRH激動(dòng)劑曲普瑞林對(duì)卵巢癌細(xì)胞OVCAR3生長(zhǎng)的抑制作用
　　 目的：觀察GnRH激動(dòng)劑曲普瑞林對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用并探討誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.選用不同濃

8、度曲普瑞林刺激卵巢癌細(xì)胞OVCAR3后，采用MTT方法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞的增殖活性的影響。
　　 2.運(yùn)用RT-PCR的方法，檢測(cè)曲普瑞林對(duì)卵巢癌細(xì)胞OVCAR3中凋亡相關(guān)因子Caspase-3的表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.曲普瑞林對(duì)卵巢癌細(xì)胞OVCAR3增殖活性的影響：MTT結(jié)果顯示，10-7mol/l濃度的曲普瑞林作用細(xì)胞24h后，其增殖抑制率為（41.07±0.43）％，隨著藥物濃度的增加（10-6mo

9、l/l，10-5mol/l，10-4mol/l，10-3mol/l，10-2mol/l），抑制率逐漸增加，分別為（50.56±0.76）％，（69.86±1.05）％，（65.43±0.87）％，（62.09±1.24）％，（58.69±0.87）％；以10-5mol/l濃度的曲普瑞林抑制率最高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；用10-5mol/l濃度的曲普瑞林作用于細(xì)胞24h，48h，72h后，增殖抑制率分別是（69.86±1.08）％

10、，（58.69±0.98）％，（48.56±1.02）％，作用時(shí)間在24h時(shí)，抑制率最高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 2.曲普瑞林對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Caspase-3表達(dá)的影響①10-4mol/l，10-5mol/l，10-6mol/l濃度的曲普瑞林作用于OVCAR3細(xì)胞24h后，Caspase-3的OD值分別是（0.51±0.04），（0.71±0.07），（0.41±0.04），與對(duì)照組細(xì)胞的OD值（0.33

11、±0.02）相比，Caspase-3于曲普瑞林在10-5mol/l濃度時(shí)，表達(dá)量最高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=42.028，P<0.05）；②10-4mol/l，10-5mol/l，10-6mol/l濃度的曲普瑞林作用于OVCAR3細(xì)胞48h后，Caspase-3的OD值分別是（0.69±0.07），（1.01±0.08），（0.64±0.08），與對(duì)照組細(xì)胞的OD值（0.48±0.04）相比，Caspase-3于曲普瑞林在10-5mol/l

12、濃度時(shí)，表達(dá)量最高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=107.595，P<0.05）；③10-4mol/l濃度的曲普瑞林作用于OVCAR3細(xì)胞24h，48h后，Caspase-3的OD值分別是（0.85±0.09），（0.62±0.06），與對(duì)照組細(xì)胞的OD值（0.34±0.04）相比，Caspase-3在10-4mol/l濃度的曲普瑞林作用24h時(shí)表達(dá)量最高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=47.164，P<0.05）；④10-5mol/l濃度的曲普瑞林作用于OV

13、CAR3細(xì)胞24h，48h后，Caspase-3的OD值分別是（0.85±0.09），（0.64±0.05），與對(duì)照組細(xì)胞的OD值（0.40±0.06）相比，Caspase-3在10-5mol/l濃度的曲普瑞林作用24h時(shí)表達(dá)量最高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=29.647，P<0.05）；⑤10-6mol/l濃度的曲普瑞林作用于OVCAR3細(xì)胞24h，48h后，Caspase-3的OD值分別是（0.96±0.08），（0.68±0.04），與對(duì)