TRAIL及其受體在卵巢癌細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：TRAIL是一個(gè)重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白，它能夠選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而對正常細(xì)胞不產(chǎn)生明顯毒副作用，因此TRAIL在腫瘤治療中具有良好的前景。為探討TRAIL以及化療藥物(DDP)與TRAIL聯(lián)合作用對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響，化療藥物對TRAIL受體表達(dá)的影響，本研究檢測TRAIL及其受體在正常卵巢和上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)情況；行體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討TRAIL對卵巢癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞凋亡的影響，化療藥物(DDP)對TRAIL促凋亡作

2、用的影響及對TRAIL促凋亡受體DR4、DR5表達(dá)的影響。旨在研究TRAIL在卵巢癌細(xì)胞凋亡中的作用，以及研究TRAIL與DDP等化療藥物協(xié)同作用對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響。方法：采用(1)免疫組化LSAB法分別對21例正常卵巢和37例上皮性卵巢癌組織中TRAIL和受體DR4、DcR1的表達(dá)進(jìn)行檢測。(2)MTT法檢測TRAIL及化療藥物對SKOV3細(xì)胞生長抑制的影響，用流式細(xì)胞儀檢測TRAIL促SKOV3細(xì)胞凋亡作用，用RT-PCR方法檢

3、測化療藥物對SKOV3細(xì)胞的TRAIL受體DR4、DR5的影響。(3)建立SKOV3細(xì)胞的裸鼠腹腔移植瘤模型，通過腹腔給藥方式，檢測TRAIL和/或DDP對移植瘤的抑制作用及對裸鼠肝腎功能的影響，用RT-PCR方法研究DDP對移植瘤細(xì)胞DR4、DR5表達(dá)的影響。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10.0軟件進(jìn)行處理分析。 結(jié)果：(1)上皮性卵巢癌的DR4和DcR1表達(dá)均明顯比正常卵巢組織低。(2)高中分化卵巢癌DR4陽性率92.31％，而低

4、分化卵巢癌DR4的陽性率為62.50％，隨著卵巢癌的分化程度越低DR4表達(dá)水平也越低。TRAIL和受體DR4、DcR1的表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素?zé)o關(guān)。(3)TRAIL及其受體DR4、DcR1兩兩之間無直線相關(guān)關(guān)系。(4)TRAIL蛋白對SKOV3細(xì)胞生長有抑制作用。(5)DDP與不同濃度的TRAIL共同作用于SKOV3細(xì)胞時(shí)，在TRAIL濃度達(dá)到10ng/ml及以上濃度時(shí)，抑制率明顯升高(P＜0.05)。阿霉素與不同

5、濃度的TRAIL共同作用時(shí)，在TRAIL濃度達(dá)到8ng/ml及以上濃度時(shí)，抑制率明顯升高(P＜0.05)。(6)流式細(xì)胞儀檢測SKOV3正常對照組、TRAIL組和TRAIL+DDP組細(xì)胞凋亡率分別為5.9％、13.4％、39.5％，各實(shí)驗(yàn)組與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。TRAIL蛋白使細(xì)胞更多地停留在G0-G1期，有絲分裂細(xì)胞減少。(7)DDP使SKOV3細(xì)胞DR5水平明顯升高，為對照的1.95倍，DR4水平升高為對照1.5

6、4倍(P＜0.05)，而阿霉素、卡鉑、5-FU處理后SKOV3細(xì)胞DR4、DR5表達(dá)無明顯改變(P＞0.05)。(8)各實(shí)驗(yàn)組(TRAIL組、DDP組、TRAIL+DDP組)與對照組比較裸鼠腹腔內(nèi)移植瘤濕重均明顯降低，以TRAIL+DDP組最明顯(P＜0.05)。(9)DDP組裸鼠的BUN、CREA均有明顯升高，TRAIL+DDP組肝功能ALT升高(P＜0.05)。(10)DDP使移植瘤的DR5表達(dá)明顯升高為對照組2.24倍，使DR4表

7、達(dá)升高為對照組1.82倍(P＜0.05)。而TRAIL處理后DR5、DR4表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化。 結(jié)論：(1)上皮性卵巢癌的DR4和DcR1表達(dá)均明顯比正常卵巢組織低，DR4表達(dá)水平隨著卵巢癌的分化程度越低也越低，提示DR4表達(dá)可能與卵巢癌的預(yù)后有關(guān)，促凋亡受體DR4和拮抗凋亡受體DcR1的表達(dá)沒有相關(guān)性；(2)體外實(shí)驗(yàn)顯示TRAIL蛋白單獨(dú)使用對SKOV3細(xì)胞生長有抑制作用，腫瘤細(xì)胞凋亡率升高，TRAIL與DDP聯(lián)合使SKOV