去細(xì)胞結(jié)合光氧化技術(shù)處理牛心包的性能研究.pdf

1、目的：研究比較理想的去細(xì)胞結(jié)合光氧化法處理牛心包的方案，初步探討其作為心血管生物組織替代材料的可行性。 方法： 1.將新鮮的牛心包片分成新鮮對照組和不同脫細(xì)胞方法處理組(I-XIII)等共13組(n=10)。通過牛心包片的大體形態(tài)、脫細(xì)胞的完整程度、膠原彈力纖維保存的完整性，評價(jià)去細(xì)胞的最佳方案。 2.將牛心包片隨機(jī)分成新鮮對照組和去細(xì)胞后不同的光氧化時(shí)間組(分別進(jìn)行光氧化處理36h、48h、60h)共4組(n=

2、10)，通過熱皺縮溫度、最大抗張強(qiáng)度和最大拉伸距離評價(jià)光氧化的最佳時(shí)程。 3.將牛心包片隨機(jī)分成新鮮對照組、戊二醛、去細(xì)胞及去細(xì)胞結(jié)合光氧化處理組共4組(n=15)，通過熱皺縮溫度、最大抗張強(qiáng)度和最大拉伸距離檢測，評價(jià)其物理性能；建立大鼠皮下包埋模型，8周后獲取組織標(biāo)本，通過HE染色，比較四組試片的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化；原子吸收光譜法測定組織鈣含量，并應(yīng)用Von Kossa鈣鹽染色評價(jià)組織鈣化情況。 結(jié)果： 1.所有去細(xì)

3、胞處理后的各組牛心包片中除了XIII組的組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重外，其他組的組織結(jié)構(gòu)完好，和新鮮組相似；光鏡顯示過短的曲那通X-100(0.25％)和胰蛋白酶(0.025％)處理時(shí)間會導(dǎo)致去細(xì)胞不完全，殘留部分細(xì)胞成分；而過長的(20u/mlDNase-I和0.2mg/mlRNase-A)處理時(shí)間可破壞牛心包片中膠原彈力纖維。Ⅻ組脫細(xì)胞處理后的牛心包片比較理想：組織大體形態(tài)和處理前相似，光鏡觀察顯示細(xì)胞成分去除徹底，膠原彈力纖維保存完整，組織結(jié)

4、構(gòu)無明顯疏松。 2.單純?nèi)ゼ?xì)胞處理后的牛心包片熱皺縮溫度、最大抗張強(qiáng)度和最大抗拉伸距離均較新鮮組顯著下降(P<0.05)；光氧化反應(yīng)進(jìn)一步交聯(lián)后，去細(xì)胞牛心包片機(jī)械強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，并且這種作用呈明顯的時(shí)間依賴性，至光氧化反應(yīng)48小時(shí)達(dá)到峰值，與60小時(shí)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；光氧化反應(yīng)48小時(shí)組與新鮮組比較，機(jī)械強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；光氧化反應(yīng)48小時(shí)組與戊二醛組比較，熱皺縮溫度、最大抗張強(qiáng)度均有所

5、下降，但是最大拉伸距離增強(qiáng)(P<0.05)，其韌性增加。 3.去細(xì)胞結(jié)合光氧化組的生物穩(wěn)定性好于各組，血管片無明顯降解，炎性細(xì)胞浸潤較少，范圍局限，組織結(jié)構(gòu)保存較好。大鼠皮下包埋實(shí)驗(yàn)去細(xì)胞組和去細(xì)胞結(jié)合光氧化組均未見明顯鈣化；組織鈣含量測定，去細(xì)胞結(jié)合光氧化組與去細(xì)胞組相似，兩組結(jié)果均顯著優(yōu)于新鮮組和戊二醛組(P<0.05)。Von Kossa鈣鹽染色顯示去細(xì)胞結(jié)合光氧化組與去細(xì)胞組的組織鈣化情況明顯輕于新鮮組和戊二醛組。

6、 結(jié)論： 1.采用多步驟去垢劑-酶消化法(0.25％曲那通X-10048h，0.025％胰蛋白酶和0.02％EDTA30min，20u/mlDNase-I和0.2mg/mlRNase-A12h)脫細(xì)胞處理牛心包，能夠有效去除其細(xì)胞成分同時(shí)保存完整膠原纖維。 2.光氧化反應(yīng)對去細(xì)胞牛心包的交聯(lián)作用呈時(shí)間依賴性，并且至光氧化反應(yīng)48小時(shí)性能表現(xiàn)最佳。光氧化反應(yīng)交聯(lián)處理可增強(qiáng)去細(xì)胞牛心包的機(jī)械性能。 3.去細(xì)胞結(jié)合光