蚜蟲專性病原真菌安徽蟲瘟霉的黍米培養(yǎng)及其培養(yǎng)物的生物學(xué)特性與功能.pdf

1、安徽蟲瘟霉(Zoophthoraanhuiensis)是僅見于我國的蚜蟲?；圆≡婢?，屬于蟲霉目(Entomophthorales)的蟲霉科(Entomophthoraceae)。安徽蟲瘟霉常在秋冬季引發(fā)長江中下游地區(qū)菜蚜種群的流行病。寄主專化性蟲霉一般對營養(yǎng)條件要求比較苛刻，其侵染體的繁殖相當困難，阻礙著蟲霉作為害蟲生防真菌資源的利用研究。安徽蟲瘟霉雖可分離培養(yǎng)，但同其它寄主專化性蟲霉一樣，其侵染體很難大量繁殖。針對這一技術(shù)難題，本

2、研究嘗試建立了安徽蟲瘟霉侵染體的黍米培養(yǎng)技術(shù)體系，并對培養(yǎng)物進行了產(chǎn)孢潛能、殺蚜活性評價以及貯存條件的摸索。主要研究結(jié)果概述如下： 黍米培養(yǎng)物及產(chǎn)孢潛能采用俗稱黃米的黍米(Panicummiliaceum)作為營養(yǎng)基質(zhì)，對安徽蟲瘟霉ZU1102菌株進行直接固體培養(yǎng)。將SEMA平板培養(yǎng)的半個菌落挑碎，移入3mL薩氏培養(yǎng)液中振蕩混勻，再倒入干重15g、經(jīng)滅菌后適度熟化、含水量為45％的黍米中，充分混勻后瓶口加蓋可透氣瓶塞，在20℃和

3、12L:12D的溫光條件下靜止固體培養(yǎng)15天，從第3天起隔天從中取樣，采用自行設(shè)計的采孢裝置精確定量測定米粒的產(chǎn)孢潛能。黍米培養(yǎng)物的產(chǎn)孢潛能因培養(yǎng)天數(shù)不同而異，以培養(yǎng)7天的產(chǎn)孢量最大，達到13.0×104個孢子/粒，產(chǎn)孢持續(xù)時間長達6天。相對于新鮮的病死成蚜2.5×104個孢子/頭的產(chǎn)孢量和僅60小時的有效產(chǎn)孢時間，培養(yǎng)5～11天的黍米培養(yǎng)物的產(chǎn)孢潛能高出4.2～5.3倍，持續(xù)產(chǎn)孢時間延長2倍以上。結(jié)果表明，安徽蟲瘟霉黍米培養(yǎng)物的產(chǎn)孢性

4、狀與該菌侵染致死的蚜尸相同，單顆米粒培養(yǎng)物相當于天然蚜尸的模擬物，但產(chǎn)孢潛能和持續(xù)產(chǎn)孢時間遠優(yōu)于天然蚜尸。 黍米培養(yǎng)物的侵染性及毒力用培養(yǎng)7天的安徽蟲瘟霉黍米培養(yǎng)物作為侵染源對桃蚜(Myzuspersicae)2～3齡若蚜進行7.9～134.9個孢子/mm2共9個劑量的孢子浴接種，所獲數(shù)據(jù)很好地擬合了時間-劑量-死亡率模型。接種后第5～7天的LC50依次為59.8、39.5和33.5個孢子/mm2，LC90依次為354、234和

5、198個孢子/mm2。在57.7～134.9個孢子/mm2的接種劑量范圍內(nèi)，致死中時LT50從5.1天下降到4.3天。結(jié)果表明，安徽蟲瘟霉的黍米培養(yǎng)物具有菌種對寄主固有的侵染性和毒力。 黍米培養(yǎng)物的貯存蟲霉培養(yǎng)物保存的難度較大。安徽蟲瘟霉黍米培養(yǎng)物能否在常規(guī)條件下貯存，是黍米培養(yǎng)技術(shù)的重要環(huán)節(jié)。將培養(yǎng)7天的安徽蟲瘟霉黍米培養(yǎng)物分裝到100mL小燒杯中，分別進行報紙封口(處理1)、保鮮膜封口(處理2)和加變色硅膠干燥劑(處理3)的

6、處理，于不同溫度(4，10和20℃)下黑暗貯存80天，定期抽樣檢測產(chǎn)孢量和含水量。在20℃下貯存20天，處理1、2和3與12.3×104個孢子/粒的初始產(chǎn)孢量相比分別僅剩9.2％、8.5％和7.7％，60天時抽樣未檢測到產(chǎn)孢。在10℃下貯存，黍米培養(yǎng)物產(chǎn)孢潛能相對于20℃下的衰減趨勢稍緩，處理1、2和3的產(chǎn)孢量在貯存后第20天時分別下降了76.1％、86.3％和86.4％，貯存80天已基本喪失產(chǎn)孢能力。4℃下貯存的各處理的產(chǎn)孢量在第20

7、天檢測時，分別下降了50.3％、68.8％和73.8％，產(chǎn)孢量顯著高于同期10℃和20℃下貯存的產(chǎn)孢量，貯存80天時仍能觀察到4700～8600個孢子/粒的產(chǎn)孢量。結(jié)果表明，黍米培養(yǎng)物4℃冷貯在所考慮的條件范圍內(nèi)是最佳的，貯存期間黍米培養(yǎng)物含水量的變化明顯與其產(chǎn)孢潛能的保持有關(guān)。 綜上所述，安徽蟲瘟霉侵染體的黍米培養(yǎng)方法是成功的，簡便易行且成本低廉。黍米培養(yǎng)物在產(chǎn)孢和侵染生物學(xué)特性等方面與天然病死蚜尸完全一致，但單顆米粒的產(chǎn)孢量