重組類人膠原蛋白Ⅱ組織工程支架材料的性能及生物相容性研究.pdf

1、隨著組織工程的迅速發(fā)展，生物材料日益受到人們的關(guān)注。膠原蛋白做為一種天然生物材料，因其具有低抗原性、生物可降解性、優(yōu)越的生物相容性并且還有利于細(xì)胞貼附和遷移的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域。重組類人膠原蛋白Ⅱ(recombinant human-like collagen Ⅱ，RHLC Ⅱ)是一種由人類膠原基因的mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA重組入大腸桿菌經(jīng)高密度發(fā)酵而成的蛋白，與動物體提取的膠原蛋白相比，具有安全性高、無病毒隱患的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)

2、還具備大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的特點(diǎn)，有很好的應(yīng)用前景。組織工程支架材料的構(gòu)建是RHLC Ⅱ應(yīng)用于組織工程的前提，本文采用戊二醛交聯(lián)的方法將RHLC Ⅱ制作成膜狀和海綿狀組織工程支架材料，探討不同濃度的戊二醛對RHLC Ⅱ組織工程支架材料的性能和生物相容性的影響。 1．采用終濃度為 0.01％，0.025％，0.05％，0.075％，0.1％的戊二醛對RHLC Ⅱ進(jìn)行交聯(lián)，利用自然干燥法制備。RHLCⅡ膜。當(dāng)戊二醛濃度在 0.025％以

3、上時(shí)，能制備出RHLC Ⅱ膜。采用BHK-21細(xì)胞對RHLC Ⅱ膜進(jìn)行細(xì)胞毒性評價(jià)，細(xì)胞毒性評價(jià)均為 1 級，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)合格。通過倒置顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察到成纖維細(xì)胞均能貼附于RHLCⅡ膜。通過MTT法，成纖維細(xì)胞在RHLCⅡ膜上均能實(shí)現(xiàn)增殖且增殖情況沒有顯著性差異(P>0.05)。此外，當(dāng)戊二醛濃度在0.05％以上時(shí)，RHLCⅡ膜的抗張強(qiáng)度可以達(dá)到11MPa。0.05％的戊二醛濃度為采用自然干燥法制備RHLCⅡ膜的最優(yōu)濃度。

4、 2．改進(jìn)交聯(lián)工藝，用無菌風(fēng)吹干法制備RHLCⅡ膜。采用終濃度為0.05％和0.1％的戊二醛對RHLCⅡ進(jìn)行交聯(lián)。RHLCⅡ膜細(xì)胞毒性評價(jià)均為0-1級，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)合格。成纖維細(xì)胞在RHLCⅡ膜上均能實(shí)現(xiàn)貼附和增殖，并且增殖情況沒有顯著性性差異(P>0.05)。通過掃描電子顯微鏡觀察到RHLCⅡ膜上的成纖維細(xì)胞均能連接成片，形成多層細(xì)胞。此外，當(dāng)戊二醛濃度為0.05％和0.1％時(shí)，RHLCⅡ膜抗張強(qiáng)度均能達(dá)到11MPa。無菌風(fēng)吹干

5、法制備RHLCⅡ膜，選擇0.05％的戊二醛濃度。 3．采用終濃度為 0.01％，0．05％，0.1％，0.15％，0.2％的戊二醛交聯(lián)RHLCⅡ，通過冷凍干燥法制備 RHLCⅡ海綿。當(dāng)戊二醛濃度在 0.05％以上時(shí)，能制備出RHLCⅡ海綿，細(xì)胞毒性評價(jià)均為0-1級，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)合格。倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、掃描電子顯微鏡觀察及冰凍切片HE染色結(jié)果表明成纖維細(xì)胞均能很好地貼附于RHLCⅡ海綿上并且生長情況良好。通過細(xì)胞計(jì)數(shù)法，當(dāng)戊