雷帕霉素阻斷mTOR信號通路抑制病毒性心肌炎心肌纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:哺乳類雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號通路在細(xì)胞的生存、生長與增殖中起中心調(diào)控作用，本研究用柯薩奇病毒B3m株(CVB3m,CVB3)感染體外培養(yǎng)的SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞，建立病毒性心肌炎(VM)的細(xì)胞模型，用雷帕霉素(rapamycin)阻斷mTOR信號通路，了解mTOR信號通路在VM心肌纖維化的可能作用機(jī)制。 方法:取新生SD鼠，用改良法原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色對細(xì)胞進(jìn)行

2、鑒定，建立CVB3感染的細(xì)胞模型。用mTOR抑制劑——雷帕霉素對細(xì)胞模型進(jìn)行干預(yù)，采用RT-PCR、Western Blot、免疫細(xì)胞化學(xué)染色等方法檢測細(xì)胞mTOR、eIF-4E、Ⅰ型膠原及Smad3表達(dá)，應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05為差別有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: (1)低濃度的胰蛋白酶和膠原酶合用，結(jié)合2次差速貼壁分離培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞，可提高心肌細(xì)胞的存活率和純度，使細(xì)胞搏動(dòng)良好。

3、 (2)心肌成纖維細(xì)胞可作為CVB3的感染細(xì)胞建立VM細(xì)胞模型。 (3)雷帕霉素使心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)源性mTOR表達(dá)下調(diào)，在一定劑量內(nèi)，呈劑量和時(shí)間依賴性，mTOR可作為雷帕霉素作用的靶點(diǎn)。 (4)雷帕霉素抑制CVB3誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞成纖維細(xì)胞增殖是通過mTOR/eIF-4E信號通路起作用的。 (5)雷帕霉素抑制CVB3可誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原及Smad3表達(dá)，提示mTOR/eIF-4E信號通路與Smad