敗血癥及臨床常見細菌16S-23SrRNA基因區(qū)間的分子生物學研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文敗血癥及臨床常見細菌16S23SrRNA基因區(qū)間的分子生物學研究姓名：傅君芳申請學位級別：博士專業(yè)：兒科學指導教師：洪文瀾2000.5.1不能通過水煮裂解而擴增。Chelex100裂解法能一步裂解所研究的菌種，擴增條帶清晰，明亮，方法簡便陜速，污染機會少經典的酚氯仿抽提細菌DNA進行PCR擴增，需將DNA在不同的管之間轉移，步驟繁瑣，增加污染機會最終確立Chelex100裂解法為奉課題研究的細茵裂解方法。經PCR擴增

2、后，i3個菌種呈單一條帶，其中5種菌：產單核李斯特氏茵、腦膜炎敗血黃桿菌、嗜水氣單胞茵、陰溝腸桿菌、類白喉棒狀桿菌能立刻區(qū)分，2種分枝桿菌具有與其它細菌不同的特異性條帶(i800bp)，還有6種菌不能區(qū)分；8個菌種呈兩條帶，其中3種茵：肺炎鏈球菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、福氏志賀氏茵能立刻區(qū)分。但嚆氏志賀氏茵與其它呈兩條帶的5種菌條帶相近，故在第二部分中亦對它們做了RFLP分析：呈三條帶的三種菌：糞腸球菌、洋蔥假單胞菌、枯草芽孢桿菌以及呈

3、多條帶的7種菌：B一溶血鏈球菌(4條帶)、大腸埃希氏菌(4條帶)、支氣管敗血鮑特氏菌(4條帶)、醋酸鈣不動桿菌(5條帶)，傷寒沙門氏菌(5條帶)、惡臭假單胞菌(5條帶)、痢疾志賀氏茵(7條帶)，它們的條帶分子量不同，互相之間能區(qū)分。從臨床分離的肺炎克雷伯氏菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌等常見菌株共j5株，均呈現(xiàn)b標準菌株相同的DNA圖譜，表明這些條帶具有很好的重復性二葡萄球菌屬中11個不同菌種的16S23SrRNAf基因區(qū)間的研究＼萄萄

4、球菌是引起兒童敗血癥的首位致病原，文獻報道葡萄球菌尤以金黃色葡萄球菌具有不同的rRNA基因區(qū)間PCR圖譜，且在葡萄球菌裂解i童程中，我們發(fā)現(xiàn)用水煮法及Chlexloo法均不能擴增葡萄球菌，因此為了研制簡便有效的裂解葡萄球菌的方法及詳細了解葡萄球菌屬細菌的165—23SrRNA基因區(qū)問的PeR圖譜，我們對葡萄球菌屬中ii個不同菌種的75株細菌進行了研究。結果Chelexl00裂解法經改良后，即5％Chelex緩沖液(舍003％SDS，1％