Legumain在葡萄膜黑色素瘤中的表達(dá)及其對(duì)患者預(yù)后影響的研究.pdf

1、目的:葡萄膜黑色素瘤是一種成人最常見的原發(fā)性眼內(nèi)惡性腫瘤，主要來源于葡萄膜黑色素細(xì)胞，因其血運(yùn)豐富，主要經(jīng)血行轉(zhuǎn)移，而且特異性轉(zhuǎn)移到肝臟，轉(zhuǎn)移是主要的致死因素，尤其葡萄膜黑色素瘤的轉(zhuǎn)移往往具有隱匿性，即在腫瘤早期就容易出現(xiàn)臨床影像學(xué)無法診斷發(fā)現(xiàn)的微轉(zhuǎn)移灶。因而目前對(duì)葡萄膜黑色素瘤研究的熱點(diǎn)是確立轉(zhuǎn)移潛能的預(yù)后標(biāo)志，尋找可以早期準(zhǔn)確客觀預(yù)判葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的生物標(biāo)記物。legumain是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的半胱氨酸蛋白酶，其特點(diǎn)：在腫瘤組織

2、中特異性表達(dá)，正常組織中無明顯表達(dá)，與腫瘤免疫關(guān)系密切，而且與腫瘤生成，侵襲，轉(zhuǎn)移，擴(kuò)散密切相關(guān)。本研究旨在明確legumain在葡萄膜黑色素瘤中的表達(dá)，探討legumain對(duì)葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的影響，及其與影響葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后各因素（病理類型，腫瘤體積，轉(zhuǎn)移情況，視神經(jīng)受累，侵潤程度）的關(guān)系。
　　 方法:本研究首先選取兩株葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞株Mum-2B和Mum-2C，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)傳代，提取RNA和蛋白質(zhì)，進(jìn)行RT

3、-PCR和Western-blot檢測，同時(shí)利用兩株細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光的染色，從而在基因和蛋白水平明確legumain在葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系的表達(dá)。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)而收集82例葡萄膜黑色素瘤患者的臨床及預(yù)后資料，同時(shí)將這些患者保存的石蠟標(biāo)本制作組織切片，進(jìn)行l(wèi)egumain免疫組織化學(xué)染色，統(tǒng)計(jì)legumain的表達(dá)情況，運(yùn)用Kaplan-meier單因素生存分析的原理與方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，將legumain的表達(dá)情況作為待檢驗(yàn)的

4、預(yù)后因素，與患者預(yù)后結(jié)果相聯(lián)系，并運(yùn)用Log-rank、Beelow、Tatone-Ware三種方法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，明確legumain對(duì)葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的影響，同時(shí)對(duì)82例葡萄膜黑色素瘤的臨床預(yù)后資料進(jìn)行Kaplan-meier單因素生存分析，并運(yùn)用Log-rank、Brelow、Tarone-ware三種方法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，篩選出與葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后相關(guān)的因素，然后將legumain免疫組化結(jié)果分別與葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后

5、相關(guān)的各因素進(jìn)行相關(guān)分析，明確legumain與影響葡萄膜黑色素瘤預(yù)后各相關(guān)因素的關(guān)系。
　　 結(jié)果:在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過RT-PCR的檢測，表明在基因水平上兩株葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系legumain為高表達(dá)，從細(xì)胞免疫熒光也可見legumain在兩株葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞膜呈現(xiàn)為綠色熒光的高表達(dá)，利用western-blot技術(shù)對(duì)兩株細(xì)胞系進(jìn)行l(wèi)egumain的蛋白檢測，可見legumain在兩株細(xì)胞系中均為高表達(dá)，且在Mum-

6、2B中表達(dá)較高。對(duì)82例葡萄膜黑色素瘤患者的石蠟病理切片進(jìn)行免疫組化染色，結(jié)果顯示在葡萄膜黑色素瘤的三種基本病理類型（上皮細(xì)胞型，梭形細(xì)胞型，混合細(xì)胞型）中l(wèi)egumain均有陽性（高表達(dá)）和陰性（低表達(dá)）的表達(dá)。通過Kaplan-meier單因素生存分析和Log-rank、Brelow、Tarone-Ware三種方法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)葡萄膜黑色素瘤患者性別的不同對(duì)患者預(yù)后無明顯影響（P>0.05），其余因素legumain，病理類型

7、，腫瘤體積，轉(zhuǎn)移情況，視神經(jīng)受累，侵潤程度均對(duì)葡萄膜黑色素瘤患者的預(yù)后有顯著性的影響（P<0.05）。經(jīng)過雙變量的相關(guān)分析，legumain與影響葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的各因素（病理類型，腫瘤體積，轉(zhuǎn)移情況，侵襲視神經(jīng)，侵潤程度）均呈正相關(guān)（P<0.01），而且與腫瘤侵潤程度關(guān)系密切（相關(guān)系數(shù)大于0.5）。
　　 結(jié)論:本研究通過對(duì)葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系和石蠟包埋病理標(biāo)本進(jìn)行l(wèi)egumain表達(dá)情況的檢測，發(fā)現(xiàn)legumain在葡

8、萄膜黑色素瘤中有明顯的高表達(dá)，然后結(jié)合患者臨床及預(yù)后資料進(jìn)行葡萄膜黑色素瘤的預(yù)后研究和相關(guān)分析，明確legumain與葡萄膜黑色素瘤預(yù)后及影響預(yù)后各因素的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)legumain不但與葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后有關(guān)，而且與影響葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的各因素有一定的相關(guān)性，從而說明legumain不僅是判斷葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)，而且在葡萄膜黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用，legumain也有可能成為葡萄膜黑色素瘤治