CdTe量子點(diǎn)對(duì)PCR增效作用的初步研究.pdf

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究中的基本實(shí)驗(yàn)手段,自從其發(fā)明以來(lái),人們對(duì)其改進(jìn)的研究就沒(méi)間斷過(guò)。本課題主要是把一種納米材料碲化鎘(CdTe)量子點(diǎn)作為添加劑加入PCR體系中,研究其對(duì)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的影響。
　　本課題主要從四個(gè)方面對(duì)CdTe量子點(diǎn)作為PCR的添加劑的可行性進(jìn)行了分析。第一,CdTe量子點(diǎn)對(duì)PCR影響的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃蛯?shí)驗(yàn)條件的建立;第二, CdTe量子點(diǎn)對(duì)普通PCR特異性和靈敏度及穩(wěn)定性的影響研究;第三,CdT

2、e量子點(diǎn)對(duì)Q-PCR特異性和靈敏度及穩(wěn)定性的影響研究;第四,CdTe量子點(diǎn)對(duì)PCR擴(kuò)增忠實(shí)性的影響研究。
　　(1)CdTe量子點(diǎn)最佳添加濃度的摸索:采用濃度梯度的方式確定CdTe量子點(diǎn)的最佳濃度為0.0833mg/ml,并針對(duì)CdTe量子點(diǎn)對(duì)普通PCR的影響和CdTe量子點(diǎn)對(duì)Q-PCR(實(shí)時(shí)定量PCR)的影響,確立了本課題所需要的實(shí)驗(yàn)的模型。
　　(2)CdTe量子點(diǎn)對(duì)普通PCR的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)CdTe量子點(diǎn)濃度為

3、0.0833mg/ml時(shí)對(duì)PCR有明顯的增效作用,表現(xiàn)在產(chǎn)物產(chǎn)量的增加,靈敏度提高100倍,特異性增強(qiáng),且穩(wěn)定性測(cè)試在第三輪仍有擴(kuò)增。不同CdTe量子點(diǎn)對(duì)PCR的影響:從3種尺寸相近的不同CdTe量子點(diǎn)對(duì)PCR的產(chǎn)量與退火溫度方面著手,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同 CdTe量子點(diǎn)對(duì)PCR產(chǎn)量的影響是不同的,但是對(duì)PCR退火溫度的影響是相似的。
　　(3)CdTe量子點(diǎn)對(duì)Q-PCR的影響。第一,最佳濃度的CdTe量子點(diǎn)對(duì)Q-PCR的影響與對(duì)普通

4、PCR的影響一致,即能夠提高PCR的產(chǎn)量,靈敏度,特異性。第二,不同濃度CdTe量子點(diǎn)對(duì)Q-PCR的影響,向PCR體系中分別加入0μl,0.4μl,1μl,4μl,7μl的1mg/ml的Cdte量子點(diǎn),則在12μl中的量子點(diǎn)的濃度依次為0mg/ml,0.033mg/ml,0.0833mg/ml(最佳濃度量子點(diǎn)),0.33mg/ml,0.5833mg/ml,當(dāng)CdTe量子點(diǎn)超過(guò)最佳添加濃度時(shí),對(duì)PCR有抑制作用。第三,不同CdTe量子點(diǎn)對(duì)

5、Q-PCR的影響的實(shí)驗(yàn),在普通PCR的基礎(chǔ)上，對(duì)兩種不同CdTe量子點(diǎn)進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn),得出結(jié)論尺寸小一點(diǎn)的CdTe量子點(diǎn)的靈敏性比尺寸大的高。第四,Q-PCR的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn),主要通過(guò)Q-PCR的重現(xiàn)性來(lái)測(cè)試的,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明添加CdTe量子點(diǎn)的PCR實(shí)驗(yàn)具有可重復(fù)性。
　　(4)CdTe量子點(diǎn)的保真性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)Rpsl體內(nèi)測(cè)試和體外測(cè)試兩種方法得出CdTe量子點(diǎn)能夠使PCR的忠實(shí)性下降。表明其具有一定的分子毒性。但是通過(guò)DNA測(cè)序