糖尿病胃輕癱與生長抑素和胃泌素的相關性研究.pdf

1、糖尿病胃輕癱(diabeticgastroparesis，DGP)是糖尿病患者常見的并發(fā)癥，目前多認為由于長期的糖尿病病變所引起的植物性神經(jīng)病變，使胃腸平滑肌神經(jīng)肌肉接頭部位發(fā)生功能障礙所致，即胃腸正常的節(jié)律性蠕動受到影響而出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹部不適、腹脹等臨床癥狀。由于DGP嚴重影響糖尿病病人的生活質(zhì)量，并給糖尿病的治療造成諸多困難，隨著分子生物學和細胞學的迅速發(fā)展，對深入探討DGP分子水平演化過程和細胞生物學效應提供了條件。

2、現(xiàn)己證實，胃動素[1](motility，MTL)，胃泌素[2](gastrin，GAS)，生長抑素[3](Somatostatin，SS)，血管活性腸肽[4](Vasoactiveintestinalpolypeptide，VIP)，P物質(zhì)[5](SubstanceP，SP)等在消化道運動功能調(diào)節(jié)方面起重要作用。上述胃腸激素還被發(fā)現(xiàn)存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因而把胃腸激素又稱為腦腸肽(Braingutpeptide)。這些腦腸肽有些本身就是

3、神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)，這就打破了傳統(tǒng)的內(nèi)分泌概念，使胃腸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)聯(lián)系起來。已有研究表明這些腦腸肽大多廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、胃腸道等全身許多組織器官，均屬于G蛋白(鳥苷酸結(jié)合蛋白，GTP-bindingprotein)偶聯(lián)的受體家族，通過激活受體后信號轉(zhuǎn)導通路，調(diào)節(jié)胃腸運動，使胃腸平￡滑肌收縮或舒張，而且生物作用十分廣泛，其中MTL[6、7]、VIP[8-9]、SP[10]已被證實與DGP密切相關。GAS與SS及其受體的協(xié)

4、同作用在DGP的作用目前尚未見報道。 GAS是由GAS分泌細胞(G細胞)產(chǎn)生的，存在于胃腸道特別是胃竇黏膜中，主要作用有刺激胃酸分泌、對泌酸區(qū)胃黏膜的營養(yǎng)支持作用和刺激胃竇部運動。糖尿病伴自主神經(jīng)病變患者常出現(xiàn)高GAS血癥，SS對GAS有強烈的抑制作用，當糖尿病出現(xiàn)高血糖時，SS分泌減少，其對GAS分泌的抑制作用減弱，故GAS水平增高。GAS刺激胃酸分泌是通過GAS/膽囊收縮素-B受體(GAS/CCK-B受體)介導的。SS是一種

5、環(huán)狀多肽，在哺乳動物中14肽和28肽的SS是兩種主要存在形式，除了調(diào)節(jié)內(nèi)外分泌活動外，在神經(jīng)系統(tǒng)中作為一種神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)機體多種生理活動和參與某些病理過程。SS由胃竇部的D細胞分泌，有抑制GAS的作用。SS不僅可抑制多種胃腸道激素的分泌以及胃腸道運動和吸收功能[11]，還可抑制葡萄糖、甘油三酯和電解質(zhì)的吸收，使血糖向組織內(nèi)轉(zhuǎn)運，從而降低血糖水平。 DGP患者幽門螺桿菌(HP)感染率為78.61％，遠高于DM無胃輕癱患者的HP感染

6、率(43.85％)，而后者的HP感染率接近于普通正常人群的感染率(46.5％)，提示HP感染與DGP有關[12]。 本研究通過多因素分析，旨在揭示DGP的致病機制，有助于臨床治療和糖尿病并發(fā)癥的控制。 目的：探討GAS、SS及HP在DGP發(fā)生中的作用，以及GAS的產(chǎn)生細胞(G細胞)和SS產(chǎn)生細胞(D細胞)在胃黏膜組織中的形態(tài)、數(shù)量、分布和結(jié)構，觀察其與DGP的相互關系和臨床診斷意義。 材料和方法：應用放免法及RT

7、-PCR方法測定正常對照組(17例)、單純胃輕癱組(30例)、單純糖尿病組(23例)和DGP組(33例)血清GAS及SS水平及其蛋白的表達。應用HIS檢測各組胃竇組織中GAS及SS水平基因mRNA序列并觀察各組病例胃竇部D細胞和G細胞的數(shù)量、形態(tài)、分布等情況。應用快速尿素酶實驗法及Giemsa染色法檢查胃竇黏膜HP。統(tǒng)計學多因素分析法分析GAS、SS及HP三者的相關性和基因mRNA及蛋白的表達情況。探討其在DGP發(fā)生中的相互作用。

8、 結(jié)果：通過放免法、原位雜交與RT-PCR法得出趨勢一致的結(jié)果，提示GAS、SS及HP在DGP發(fā)病中生物學作用明確，D細胞和G細胞的數(shù)量、形態(tài)、分布情況與GAS、SS及HP在DGP的發(fā)病中具有相關性。 、GAS、SS血清檢測結(jié)果：1、正常對照組(Ⅰ)：GAS為83.47±14.35pg/ml，SS為52.08±15.11pg/ml。 2、單純糖尿病組(Ⅱ)：GAS為102.21±21.54pg/ml，與Ⅰ組比較差異顯著

9、(P＜0.05)；SS為42.57±13.56pg/ml，與Ⅰ組比較差異顯著(P＜0.05)。 3、單純胃輕癱組(Ⅲ)：GAS為98.31±23.81pg/m1，SS為60.86±14.15pg/ml與Ⅰ組比較有顯著差異(P＜0.05)。 4、DGP組(Ⅳ)：GAS為146.58±28.83pg/ml，SS為16.15±3.85pg/ml，與Ⅰ組比較差異非常顯著(P＜0.01)；與Ⅱ、Ⅲ組比較差異顯著(P＜0.05)。

10、 二、胃竇G細胞、D細胞mRNAHIS檢測結(jié)果：1、正常對照組(Ⅰ)GAS陽性率為17.65％；SS陽性率為76.47％。 2、單純糖尿病組(Ⅱ)GAS陽性率為26.67％，與Ⅰ組比較差異顯著(P＜0.05)；SS陽性率為56.67％，與Ⅰ組比較差異顯著(P＜0.05)。 3、單純胃輕癱組(Ⅲ)GAS陽性率為34.78％，SS陽性率為56.52％，、與Ⅰ組比較有顯著差異(P＜0.05)。 4、DGP組(Ⅳ)

11、GAS陽性率為78.79％，SS陽性率為24.24％，與Ⅰ組比較差異非常顯著(P＜0.01)；與Ⅱ、Ⅲ比較差異顯著(P＜0.05)。 三、GAS、SS的PCR檢測結(jié)果：1、正常對照組(Ⅰ)：GASI值0.338±0.313；SSI值0.756±0.302。 2、單純糖尿病組(Ⅱ)：GASI值0.408±0.439，與Ⅰ組比較籌異顯著(P＜0.05)；SSI值為0.521±0.232，與Ⅰ組比較差異顯著(P＜0.05)。

12、 3、單純胃輕癱組(Ⅲ)：GASI值0.432±0.299、SSI值0.528±0.423，與I組比較有顯著差異(P＜0.05)。 4、DGP組(Ⅳ)：GASI值0.662±0.301，SSI值0.326±0.282，與Ⅲ組比較差異非常顯著(P＜0.01)；與Ⅱ、Ⅲ組比較差異顯著(P＜0.05)。 四、G細胞、D細胞電鏡結(jié)果：單純糖尿病組及單純胃輕癱組的胃竇部G、D細胞的超微結(jié)構與正常對照組比較無明顯變化。DGP組

13、的胃竇部G細胞除表現(xiàn)細胞數(shù)量增加外，細胞的內(nèi)部結(jié)構變化不明顯，分泌顆粒未見減少；而D細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)多擴張呈囊泡狀，網(wǎng)面上的核糖體顆粒消失，細胞器減少。 五、快速尿素酶實驗法和Giemsa染色法檢測胃竇部黏膜的HP:快速尿素酶實驗法和Giemsa染色法檢測HP在各組中均無差別(P＞0.05)。應用快速尿素酶實驗法和Giemsa染色法，正常對照組HP的檢出率分別為(47.1％，41.2％)，單純胃輕癱組為(73.3％，66.7％)，

14、單純糖尿病組為(47.8％，43.5％)，DGP組為(87.8％，81.9％)，兩種方法無差異(P＞0.05)。單純糖尿病組與正常對照組的HP檢出率無明顯差異(P＞0.05)；單純胃輕癱組與正常對照組的HP檢出率有明顯差異(P＜0.05)；DGP組與正常對照組和單純糖尿病組比較均有顯著性差異(P＜0.001)，與單純胄輕癱組比較HP檢出率有明顯差異(P＜0.01)，表明胃輕癱與HP感染有關，而DGP的患者80％左右有HP感染，進一步說明

15、HP感染可以加重DGP。 HP(+)組：DGP組的GAS均高于正常對照組(P＜0.001)，SS低于正常對照組(P＜0.001)。 HP(一)組：各組的GAS和SS水平無明顯差異(P＞0.05)。 DGP組：血清GAS水平HP(+)組高于HP(一)組，差異顯著(P＜0.05)；血清SS水平HP(+)組低于HP(一)組，差異顯著(P＜0.05)。 結(jié)論：GAS的升高、SS的降低是DGP發(fā)生的重要因素。DGP