植物乳桿菌299高密度培養(yǎng)及冷凍干燥保護(hù)的研究.pdf

1、以植物乳桿菌299為研究菌株，為了提高植物乳桿菌299的最終活菌數(shù)，為其將來的商業(yè)化生產(chǎn)提供參考，分別對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基、高密度發(fā)酵工藝、真空冷凍干燥的凍干工藝和保護(hù)劑濃度以及菌粉包裝及儲(chǔ)藏期進(jìn)行了研究，并得到了以下結(jié)論:
　　(1)通過單因素、PB和響應(yīng)面試驗(yàn)分析，以MRS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，優(yōu)化得到植物乳桿菌299的最佳培養(yǎng)基為:蛋白胨2.33％，酵母膏1.41％，葡萄糖2.52％，檸檬酸氫二胺0.40％，乙酸鈉0.30％，磷酸氫二鉀0.

2、80％，Tween-800.30％，硫酸錳0.0025％。培養(yǎng)得到的菌體OD600可達(dá)到1.2687，比相同條件下在MRS培養(yǎng)基中菌體OD600提高了28.9％，同時(shí)，優(yōu)化后的培養(yǎng)基去掉了牛肉膏和硫酸鎂兩種成分，簡化了培養(yǎng)基配方。
　　(2)在確定最適培養(yǎng)基以及前期實(shí)驗(yàn)室工作的基礎(chǔ)上，在30L半自動(dòng)發(fā)酵罐上對(duì)影響高密度發(fā)酵工藝的因素進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳高密度發(fā)酵工藝為:發(fā)酵恒定pH值為5.5，中和劑為25％的氨水，攪拌轉(zhuǎn)速為100r

3、/min，菌體生長限制性底物為碳源和氮源，補(bǔ)料液碳源和氮源最佳比例為3∶2，同時(shí)在對(duì)數(shù)期末期對(duì)發(fā)酵體系進(jìn)行相隔4h的兩次補(bǔ)料。在此條件下，植物乳桿菌299經(jīng)過高密度發(fā)酵培養(yǎng)24h后，發(fā)酵液的菌體OD600可達(dá)到1.3422，較普通發(fā)酵培養(yǎng)提高約44％。
　　(3)對(duì)影響真空冷凍干燥的條件及保護(hù)劑配方進(jìn)行優(yōu)化。得到該菌株的最佳凍干工藝為:預(yù)凍溫度為-80℃，預(yù)凍時(shí)間為2h，菌泥與保護(hù)劑的最佳比例為2∶5，最佳凍干厚度為1.2cm，脫

4、脂乳濃度為16％，凍干時(shí)間為20h。經(jīng)過優(yōu)化后，最終獲得的菌粉中植物乳桿菌299的活菌數(shù)達(dá)到2.11×1011cfu/g，凍干存活率為89.8％。
　　(4)對(duì)植物乳桿菌299的菌粉包裝及儲(chǔ)藏條件進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)在-20℃保藏1年時(shí)間內(nèi)，用鋁箔袋和PET-PE袋（普通真空包裝袋）進(jìn)行包裝時(shí)，兩者無顯著性差異，菌活仍可維持在1011cfu/g;在4℃及25℃下保藏時(shí)，鋁箔袋對(duì)菌體的保護(hù)效果較PET-PE袋效果好，并且溫度越高，差異性