細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶在雌激素促乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖中的作用和機(jī)制.pdf

1、目的：應(yīng)用細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶磷酸化特異性抑制劑PD98059研究ERK在雌激素促人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖、細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化、抑制細(xì)胞凋亡中的作用，探討分子機(jī)制。 方法：以雌激素受體（estrogen receptor，ER）陽(yáng)性的人乳腺癌細(xì)胞MCF-7為研究對(duì)象，應(yīng)用MTT法檢測(cè)17β-E2對(duì)MCF細(xì)胞增殖影響，確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)處理用濃度；MTT法檢測(cè)PD98059對(duì)17β-E2促M(fèi)CF-7細(xì)胞增殖作用的影響，求取其中效抑制濃度；流式

2、細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡情況；TRAP-PCR銀染法檢測(cè)端粒酶活性，Western blot檢測(cè)p-ERK1/2、野生型P53、PCAF蛋白水平；RT-PCR檢測(cè)野生型p53mRNA、PCAFmRNA水平。 結(jié)果：ERK磷酸化抑制劑PD98059能抑制17β-E2對(duì)MCF-7細(xì)胞的促增殖作用，具有時(shí)效.量效關(guān)系，其差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），各作用時(shí)間點(diǎn)PD98059中效抑制濃度分別為：89.28μmol/L·2

3、4h、39.81μmol/L·48h、21.87μmol/L·72h。應(yīng)用20μmol/L的PD9805948 h后，能抑制17β-E2促進(jìn)MCF-7細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化作用，使G1期細(xì)胞增加，S期和G2期細(xì)胞減少（P<0.05）；抑制17β-E2對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的抑制作用，使細(xì)胞早期凋亡率增加（P<0.05）；阻抑17β-E2增強(qiáng)MCF-7細(xì)胞端粒酶活性的作用（P<0.05）；增強(qiáng)野生型P53蛋白表達(dá)和p53基因轉(zhuǎn)錄水平（P<0.05）；