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1、長春理工大學(xué)碩士學(xué)位論文蛋氨酸裂解酶的基因克隆及表達(dá)姓名：夏立亮申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：毛亞杰于源華20100301ABSTRACTLMethionineylyase(MGL)cancatalysethe％t—eliminationofLMethionineandHomocysteineandwasdevelopedasananticancerdrugaswellasadiagnosticreagentforhom
2、oeysteinemiaGenecloning，expressionandcharacterizationofmethionine71yasefromTrichomonasvaginaliswereexploredinthispaperGeneofLMethioninelyasewaspreparedbyreversePCRwithRNAextractedfromTrichomonasvaginalisExpressionvectorp
3、ET15b—mgllWasconstructedbytheligationofplasmidpET15bwiththegeneofMGLandsequenced‘RecombinantMGLwasmainlyexpressedintheformofinclusionbodyinEcoliinducedbyIPTGThebestexpressionconditionwitllculrurepH50。inducingtemperature2
4、7“(2，inducingOD60006，IPTGconcentration06mMandinducingtime5hweredecidedbyscreeneingMicewereimmunizedwithrecombinantMGLpurifiedbyNi2colounmThereactionbetweenantiserumandwildMGLpurifiedfromTrichomonasvaginalisWastestedbyWes
5、ternblotThebiologicalactivityoftherecombinantproteinWasprovedWeprepared658mgsolubleMGLfrom1Lshakeflaskculturewithhigheractivity，謝ma411％overallyieldinthepurificationprocessTheKmoftherecombinantMGLforLMethionine，DL—Homocys
6、teine，LCysteinassubstratewere0318mM，214mM，162mMrespectivelyandthespecificactivitywere2017、31869、5696umol／min／mgproteinrespectivelyTheopfimalpHforrecombinantMGLWaspH50pH60andrecombinantMGLWasstableupto50“CTheresultsindica
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