中華絨螯蟹“顫抖病”病原體的雞胚分離和生物學特性研究.pdf

1、中華絨螯蟹是中國重要的淡水水產養(yǎng)殖品種.而顫抖病是近年來中華絨螯蟹最嚴重的流行病.我們先前的病理學和流行病學研究發(fā)現(xiàn)其病原體為類立克次體Rickettsia-like organism(RLO)<'[1]>,暫定名為顫抖病的致病微生物(The tremordisease agent)簡稱TDA.在患"顫抖病"的河蟹體內,TDA只侵染血細胞、肌肉、神經(jīng)和結締組織,而不侵染上皮組織[2].人工回感實驗也證實該病原體是通過血細胞在蟹體內傳播的

2、<'[3]>.為了得到大量的病原體純培養(yǎng)物,我們嘗試從雞胚進行分離.將患"顫抖病"河蟹的血液經(jīng)220nm孔徑濾膜過濾,然后在無菌條件下接種于7日齡雞胚,并在每只雞胚中加入100U的青霉素作為抑菌劑.將接種雞胚和未接種的對照雞胚置于35.1度培養(yǎng)箱,每天觀察、記錄雞胚情況.5-8天后所有接種雞胚均死亡,而對照雞胚生長良好.我們在接種雞胚的卵黃囊和尿囊中收集到大量的微生物.為證實被分離出的就是"顫抖病"病原體,我們將分離出的微生物用人工回感

3、方式注入正常蟹體內,結果顯示,8-15天左右,這些正常蟹出現(xiàn)"顫抖病"癥狀,并且在其體內均能檢測到與自然環(huán)境中"顫抖病"蟹體內相同的病原體.將雞胚分離純化的TDA分別通過體節(jié)連接處注射和腹腔注射方法來接種克氏螯蝦和ICR小白鼠.接種38天后,將克氏螯蝦和ICR小白鼠全部處死,解剖取材,光鏡及電鏡觀察.結果顯示克氏螯蝦和ICR小白鼠均未受TDA的感染.值得注意的是,在接種雞胚的腦部發(fā)現(xiàn)了病原體,而在其身體其他部位(除卵黃囊液和尿囊液外)未