mitfa基因在觀賞魚(yú)體色形成中的功能研究.pdf

1、觀賞魚(yú)因其絢麗多彩的體色而深受歡迎，色素細(xì)胞的發(fā)生、分化、遷徙及物質(zhì)運(yùn)輸對(duì)于研究觀賞魚(yú)體色形成及發(fā)育有重要意義。通過(guò)對(duì)魚(yú)類(lèi)體色發(fā)育和色素基因的遺傳機(jī)制研究，可以在育種和人工篩選中有效地預(yù)測(cè)及控制觀賞魚(yú)的體色。在神經(jīng)嵴細(xì)胞分化成黑色素細(xì)胞的過(guò)程中，mitfa基因作為其最早的發(fā)生標(biāo)志之一，對(duì)黑色素細(xì)胞的發(fā)育及其分化起著核心調(diào)控作用。本文主要以重要淡水觀賞魚(yú)——錦鯉為材料，從錦鯉體色發(fā)育、色素細(xì)胞細(xì)胞學(xué)、mitfa基因表達(dá)分析等方面進(jìn)行研究。

2、本文以錦鯉為材料，研究mitfa基因在4種不同類(lèi)型錦鯉和錦鯉早期體色發(fā)育時(shí)期的表達(dá)，進(jìn)一步探討mitfa基因在魚(yú)類(lèi)體色形成中的作用。
　　首先，根據(jù)已報(bào)道的斑馬魚(yú)mitfa基因cDNA序列，克隆了烏鯉mitfa基因cDNA全長(zhǎng)。mitfa基因cDNA全長(zhǎng)1634bp，編碼412個(gè)氨基酸。錦鯉與斑馬魚(yú)mitfa基因氨基酸同源性達(dá)92.9％。
　　然后觀察了四種不同體色類(lèi)型錦鯉的色素細(xì)胞組成及其分布。黑白錦鯉含有黑色素細(xì)胞、黃色

3、素細(xì)胞和虹彩細(xì)胞三種色素細(xì)胞;三色錦鯉則含有黑色素細(xì)胞、紅色素細(xì)胞、黃色素細(xì)胞和虹彩細(xì)胞四種色素細(xì)胞;紅白錦鯉含有紅色素細(xì)胞、黃色素細(xì)胞和虹彩細(xì)胞;黃金錦鯉僅含有黃色素細(xì)胞和虹彩細(xì)胞兩種色素細(xì)胞類(lèi)型。進(jìn)一步對(duì)三色錦鯉早期體色發(fā)育進(jìn)行了跟蹤觀察，發(fā)現(xiàn)三色錦鯉3dph(3 days past hatch)在背部出現(xiàn)黃色素細(xì)胞，然后顏色加深并且向尾部和腹部遷移;12dph在頭部出現(xiàn)黑色素細(xì)胞，然后向背部和尾鰭遷徙;15dph出現(xiàn)腹部虹彩細(xì)胞;

4、27dph全身黑色素細(xì)胞逐漸聚攏，黑色素細(xì)胞集中分布在將來(lái)發(fā)育成黑色斑塊的部位，黃色素細(xì)胞顏色加深。
　　最后，運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了mitfa基因在不同體色錦鯉及錦鯉早期體色發(fā)育中的表達(dá)。結(jié)果顯示，mitfa基因在黑白錦鯉和三色錦鯉皮膚中有較高量的mRNA表達(dá)，值得關(guān)注的是在無(wú)黑色素細(xì)胞的紅白錦鯉和黃金錦鯉皮膚中mitfa基因也有表達(dá)。同時(shí)對(duì)三色錦鯉體色發(fā)育不同時(shí)期mitfa基因表達(dá)進(jìn)行了分析，結(jié)果表明mitfa基因在三色錦