葡萄黑色芽變品種巴西(Brazil)果皮顏色突變的分子機(jī)制初探.pdf

1、本研究以白色品種意大利(Italia)、紅色品種紅高(Benitaka)和黑色品種巴西(Brazil)為試驗(yàn)材料，檢測(cè)了VvmybA1的基因型以及VvmybA1和UFGT基因在不同著色時(shí)期的表達(dá)量，克隆了意大利、紅高和巴西中的VvmybA1完整的啟動(dòng)子和編碼區(qū)序列，并進(jìn)行功能驗(yàn)證，以期探究黑色芽變品種巴西果皮顏色變化的原因。具體研究結(jié)果如下:
　　1.為了鑒定意大利、紅高和巴西之間的親緣關(guān)系，篩選了22對(duì)多態(tài)性較好的SSR引物進(jìn)行

2、SSR分析。結(jié)果表明:22對(duì)SSR引物在三種葡萄中擴(kuò)增出的等位基因條帶大小完全一致，表明意大利、紅高和巴西之間的親緣關(guān)系極為緊密，從而驗(yàn)證了紅高和巴西均為意大利的芽變品種。
　　2.PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)在VvmybA1位點(diǎn)，意大利含有純和的VvmybA1a(1559bp)、紅高和巴西含有雜合的VvmybA1a扣VvmybA1BEN(926bp)。采用熒光定量技術(shù)分析VvmybA1和UFGT在三種材料中的相對(duì)表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)二者在白色品種意

3、大利中幾乎檢測(cè)不到，在有色品種中表達(dá)模式一致，即從著色后開始表達(dá)，并且在黑色品種中表達(dá)量高于紅色品種。
　　3.從三個(gè)品種中克隆了VvmybA1完整的啟動(dòng)子和編碼區(qū)序列，用BioXM2.6同已知序列進(jìn)行比對(duì)，并且利用Plant Care和Place在線分析軟件進(jìn)行啟動(dòng)子預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)在紅高和巴西的啟動(dòng)子區(qū)域存在一個(gè)堿基的差異，且差異位點(diǎn)恰好在3-AFl binding site這個(gè)光響應(yīng)原件中。將三種材料的VvmybA1啟動(dòng)子和編碼區(qū)