食品果實(shí)中不同地理種群舞毒蛾分子鑒定研究.pdf

1、舞毒蛾(Lymantria dispar Linnaeus)是全北溫帶地區(qū)危害最為嚴(yán)重的森林害蟲之一。根據(jù)地理分布、生物學(xué)特性、形態(tài)特征等被分為歐洲亞種L. dispar dispar(Linnaeus)、亞洲亞種L. dispar asiatica Vnukovskii和日本亞種L. dispar japonica(Motsc hulsky)。亞洲、日本亞種統(tǒng)稱為亞洲型舞毒蛾,歐洲亞種被稱為歐洲型舞毒蛾。僅通過形態(tài)特征很難確定其地理種

2、群,特別是口岸截獲的幼蟲,鑒定存在一定的困難,且檢疫周期長。為快速準(zhǔn)確鑒定這些近似種舞毒蛾,根據(jù)其線粒體全序列之間的序列差異建立了舞毒蛾的快速鑒定方法,并分析其線粒體序列的分子遺傳規(guī)律。
　　采用PCR引物步移法完成舞毒蛾線粒體全序列的擴(kuò)增、克隆、測序和分析,拼接獲得了九條不同地理種群舞毒蛾完整的mt DN A基因全序列。舞毒蛾線粒體DNA全長15,569 bp,由22個tRNA、13個蛋白編碼基因和2個rRNA基因組成,基因位置

3、及方向與鱗翅目其他昆蟲相同。通過九條不同地理種群舞毒蛾 mt DN A全序列的比較,為進(jìn)一步進(jìn)行地理型快速檢測方法研究以及目標(biāo)序列庫的建立打下基礎(chǔ)。
　　根據(jù)舞毒蛾線粒體全基因組的特點(diǎn)確定突變率較高的序列,并針對突變率較高序列設(shè)計(jì)特異性引物。對來自不同地區(qū)的舞毒蛾樣品進(jìn)行測序,并進(jìn)行編輯與拼接,建立一個本地舞毒蛾線粒體目標(biāo)序列數(shù)據(jù)庫。根據(jù)序列同源性確定未知舞毒蛾樣品的地理種群。
　　根據(jù)亞洲型舞毒蛾、歐洲型舞毒蛾、北美型舞毒

4、蛾這幾個近似種的mt DN A中部分基因的序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針。通過對中國、俄羅斯、蒙古、日本、比利時、土耳其、美國不同地理來源的97個舞毒蛾樣品進(jìn)行檢測,建立了舞毒蛾的實(shí)時熒光PCR檢測方法,以達(dá)到快速準(zhǔn)確檢測鑒定舞毒蛾的目的。
　　來自比利時的紅橡木原木上截獲2頭鱗翅目幼蟲,根據(jù)形態(tài)特征鑒定為舞毒蛾幼蟲。通過對樣本進(jìn)行線粒體和常染色體上兩段分子標(biāo)記的擴(kuò)增和測序,并與其他舞毒蛾樣本進(jìn)行比對與分析,結(jié)果表明該樣品屬于歐洲型舞毒