湛江海域潮間蟹耐受麻痹性貝毒機(jī)理的初步研究.pdf

1、麻痹性貝毒不僅存在于貝類，還廣泛存在于魚、蝦、蟹等水產(chǎn)品中，嚴(yán)重威脅人類健康，然而值得注意的是，一些生物對麻痹性貝毒卻似乎比較遲鈍，其耐毒機(jī)理備受關(guān)注。本文在建立麻痹性貝毒高效液相色譜(HPLC)檢測平臺的基礎(chǔ)上，全面分析了湛江海域鈍齒短槳蟹、火紅皺皮蟹和方形大額蟹等潮間蟹的毒性、對麻痹性貝毒的耐受性以及潮間蟹體液對麻痹性貝毒的毒性中和作用，對潮間蟹耐受麻痹性貝毒的機(jī)理進(jìn)行了初步研究，旨在為揭示潮間蟹耐受麻痹性貝毒機(jī)制提供科學(xué)理論依據(jù)。

2、
　　本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了研究：
　　1.通過探討柱后衍生反應(yīng)條件和流動相條件對反應(yīng)熒光強(qiáng)度和分離效果的影響，優(yōu)化了麻痹性貝毒膝溝藻毒素的最佳HPLC檢測條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示最佳柱后衍生反應(yīng)條件：柱后衍生反應(yīng)液為70 mM高碘酸與含有0.12 M氫氧化鉀和0.75 M甲酸銨的20％甲酰胺溶液的混合液，調(diào)整pH值在7.3～7.5之間，流速為0.8 min/mL，柱后反應(yīng)溫度為50℃；最佳流動相條件為：甲醇濃度1％，庚烷磺

3、酸鈉濃度1.5 mM，磷酸緩沖液濃度10 mM，pH值7.3。
　　2.在對潮間蟹毒性分析的基礎(chǔ)上，通過向潮間蟹體內(nèi)注射貝毒溶液的方法探討了潮間蟹對麻痹性貝毒的耐受性，并采用小鼠試驗(yàn)比較了潮間蟹體液對麻痹性貝毒的毒性中和效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，約12％潮間蟹樣品的毒性超出水產(chǎn)品麻痹性貝毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(4 MU/g)，各種潮間蟹對麻痹性貝毒均有不同程度的耐受性，其體液具有良好的毒性中和作用。
　　3.以鈍齒短槳蟹體液為研究對象，采用小

4、鼠毒性試驗(yàn)，通過分析比較不同分子量范圍體液組分、蛋白酶解以及不同來源的蛋白質(zhì)對體液毒性中和效果的影響，揭示體液中起到毒性中和效果的功效成分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相對于低分子組分，體液的高分子組分(≥10KDa)有明顯的毒性中和作用，且經(jīng)蛋白酶酶解后毒性中和效果消失，另外體液的毒性中和效果明顯優(yōu)于牛血清蛋白以及牛奶等不同來源的蛋白質(zhì)。
　　4.以麻痹性貝毒作親和配體，采用親和層析的方法比較了 AF-Epoxy-650M等樹脂對體液中毒素結(jié)

5、合蛋白的分離效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AF-Epoxy-650M親和樹脂的分離效果最佳，分離獲得了電泳純的貝毒結(jié)合蛋白，SDS-PGAE電泳結(jié)果顯示該蛋白由7個(gè)分子量不等的亞基組成。
　　5.采用HPLC檢測法，對貝毒結(jié)合蛋白與PSP毒素的結(jié)合效果進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示該結(jié)合蛋白對所分析的GTXs、STXs、CTXs表現(xiàn)出不同的結(jié)合率，其中對neoSTX、dcSTX、STX的結(jié)合率較高，分別為72.27％、69.20％、56.92％；其次