忍冬枝枯病病原菌研究.pdf

1、　　目的：調(diào)查河南省封丘縣忍冬枝枯現(xiàn)象原因,明確其對(duì)藥材金銀花產(chǎn)量和質(zhì)量的影響。
　　方法：田間調(diào)查忍冬枝枯現(xiàn)象的發(fā)生規(guī)律及特點(diǎn)；組織分離法分得不同地區(qū)病株中的共有真菌并進(jìn)行回接,驗(yàn)證其致病性；結(jié)合形態(tài)學(xué)特征鑒定法、rDNA-ITS序列鑒定法、TEF-1α基因部分序列鑒定法,確定病原菌分類學(xué)地位；對(duì)部分致病菌生物學(xué)特性進(jìn)行考察,研究不同溫度、pH、光照、碳氮源等條件對(duì)病原菌生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響；利用田間調(diào)查法和高效液相色譜法確定忍

2、冬枝枯病對(duì)藥材金銀花產(chǎn)量和質(zhì)量的影響。
　　結(jié)果：
　　1 忍冬枝枯現(xiàn)象發(fā)生特點(diǎn)
　　忍冬枝枯現(xiàn)象在忍冬整個(gè)生育期均可發(fā)生,7 -9月為該病高發(fā)期,發(fā)病部位常為成年忍冬枝條或扦插幼苗整株。隨病情發(fā)生和發(fā)展,病枝葉片逐步呈現(xiàn)黃化、邊緣枯萎、脫落現(xiàn)象,并從發(fā)病點(diǎn)沿枝條蔓延,導(dǎo)致枝枯。在高溫高濕條件下,病葉落葉痕或病枝剪口處?？梢?jiàn)白色溢出狀菌絲。挖出重病植株,偶可見(jiàn)根部發(fā)黑,須根稀少。該病傳播迅速,可在不同枝條或

3、不同植株間傳播,也可經(jīng)由忍冬扦插苗傳播。
　　2 忍冬枝枯病原菌的分離回接
　　分別用PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養(yǎng)基和WA(水瓊脂)培養(yǎng)基從河南省封丘縣三個(gè)忍冬枝枯病高發(fā)區(qū)分離出共有真菌5種,其中PDA培養(yǎng)基中分離出的4種病原菌可以純化,分別命名為 FQ1、FQ2(來(lái)自病株莖、葉),FQ3、FQ4(來(lái)自病株根部)；WA培養(yǎng)基中分離出的一種真菌來(lái)自忍冬病枝活體,命名為FQ0,不能培養(yǎng)。將PDA培養(yǎng)基上分得的4種真菌進(jìn)

4、行回接驗(yàn)證,證明其均可致病。
　　3 五種真菌的鑒定
　　綜合利用形態(tài)特征鑒定、顯微特鑒定、rDNA-ITS序列分析及TEF-1α基因部分序列分析等方法確定 5 種真菌的分類學(xué)地位,將菌株 FQ1 和 FQ2 鑒定為(Fusarium incarnatum - equiseti species complex),將菌株FQ3、FQ4鑒定為( Fusarium solani species complex ),將 FQ

5、0 鑒定為( Thanatephorus theobromae)。
　　4 四株鐮刀菌的生物學(xué)特性
　　研究了四株鐮刀菌 FQ1、FQ2、FQ3、FQ4 在不同溫度、pH、光照及碳氮源條件下的生長(zhǎng)和產(chǎn)孢情況。結(jié)果顯示,菌株 FQ1,最適菌絲生長(zhǎng)溫度為 25℃,最適產(chǎn)孢溫度為 30℃,最適菌絲生長(zhǎng) pH 值為 6-10,最適產(chǎn)孢 pH 值為 8,光照條件對(duì)菌絲生長(zhǎng)無(wú)顯著影響,全黑暗條件有利于產(chǎn)孢,菌絲生長(zhǎng)最佳碳氮源分別

6、為淀粉、蔗糖和硝酸鈉,產(chǎn)孢最佳碳氮源分別為山梨醇和硝酸鈉；菌株 FQ2,最適菌絲生長(zhǎng)溫度為 30℃,最適產(chǎn)孢溫度為35℃,最適菌絲生長(zhǎng)pH值為10,最適產(chǎn)孢p H值為7和 11 ,全黑暗條件有利于菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢,菌絲生長(zhǎng)最佳碳氮源分別為蔗糖和酵母、硝酸鈉,產(chǎn)孢最佳碳氮源分別為果糖和硝酸鈉；菌株FQ3,最適菌絲生長(zhǎng)溫度為 30℃,最適產(chǎn)孢溫度為35℃,最適菌絲生長(zhǎng)pH值為 9,最適產(chǎn)孢 pH 值為 7 和 10,全黑暗條件有利于菌絲生長(zhǎng)和

7、產(chǎn)孢,菌絲生長(zhǎng)最佳碳氮源分別為乳糖和甘氨酸,產(chǎn)孢最佳碳氮源分別為葡萄糖和硝酸鈉；菌株 FQ4,最適菌絲生長(zhǎng)溫度為 25℃-30℃,最適產(chǎn)孢溫度為 30℃,最適菌絲生長(zhǎng)pH值為5-10,最適產(chǎn)孢pH值為9,半光照條件有利于菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢,菌絲生長(zhǎng)最佳碳氮源分別為蔗糖和酵母,產(chǎn)孢最佳碳氮源分別為果糖和酵母。
　　5 田間結(jié)蕾量調(diào)查證明忍冬枝枯現(xiàn)象能導(dǎo)致田間金銀花結(jié)蕾量顯著減少；高效液相分析結(jié)果表明,枝枯植株所得金銀花藥材中綠原酸和