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文檔簡介
1、本研究設計了巢式RT-PCR、半巢式RT-PCR、斑點雜交三個試驗，來準確、敏感的檢測綿羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus JSRV）。通過在外源性綿羊肺腺瘤病毒的囊膜基因env的TM區(qū)和長末端重復序列LTR的U3區(qū)分別設計特異性的巢式、半巢式引物以及特異性的探針，運用巢式、半巢式RT-PCR、斑點雜交的方法進行檢測、比較，同時也與普通RT-PCR進行比較。結果表明，巢式RT-PCR測得的綿羊肺腺瘤病毒
2、的env基因和U3區(qū)序列與GenBank中發(fā)表的外源性綿羊肺腺瘤病毒基因序列的同源性分別為96％和98%，半巢式RT-PCR的同源性為96.8%和98%。特異性試驗結果表明本研究設計的env基因和LTR的U3區(qū)的巢式、半巢式引物不能從健康綿羊、小鼠、家兔的肺組織以及感染了綿羊肺腺瘤病病羊的腎、肝、脾的RNA中擴增出條帶。斑點雜交同樣也不能從健康綿羊和小鼠的肺組織得到陽性的藍色斑點。敏感性試驗結果表明，env基因和LTR的U3區(qū)的巢式、半
3、巢式RT-PCR診斷方法最低能檢測出的標準模板RNA量分別為48fg和48pg以及0.48pg和480ng，而普通的RT-PCR，env基因及LTR的U3區(qū)的最低檢出量分別為0.48ng和4.8ng，得出巢式RT-PCR的敏感性高于普通RT-PCR，而半巢式RT-PCR的env基因敏感性高于普通RT-PCR的env基因，但是LTR的U3區(qū)敏感性卻低于普通的RT-PCR，同時巢式RT-PCR的敏感性高于半巢式RT-PCR。斑點雜交env基
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