轉(zhuǎn)茶陵野生稻三個(gè)耐冷候選基因擬南芥的創(chuàng)制及其表型分析.pdf

1、湖南茶陵普通野生稻(Oryza rufipogon Griff.)是兩個(gè)北緣野生稻居群之一，前人的研究表明其耐冷性很強(qiáng)?？寺∑淠屠湎嚓P(guān)基因，不僅能給栽培稻的耐冷轉(zhuǎn)基因分子育種提供目的基因資源，而且可增進(jìn)我們對(duì)野生稻耐冷分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)，具有重要價(jià)值。
　　OrCr、OrCr2及OrCr3(Oryza rufipogon cold responsive gene 1,2,3)是采用水稻全基因組表達(dá)芯片分析以及生物信息學(xué)分析從茶陵野生稻

2、中鑒別出的3個(gè)受低溫誘導(dǎo)而顯著上調(diào)的耐冷候選基因。
　　為了探明這3個(gè)耐冷候選基因是否具有耐冷作用或其它作用，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化了擬南芥，獲得了轉(zhuǎn)OrCr1，2，3基因擬南芥植株，并篩選出純系。
　　對(duì)獲得的轉(zhuǎn)OrCr1，2，3基因擬南芥純系的耐逆性進(jìn)行了鑒定，初步結(jié)果如下:
　　1)轉(zhuǎn)OrCr1，2,3基因擬南芥經(jīng)過4℃低溫處理20d后其發(fā)芽率高于野生型，幼苗的生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)于野生型;
　　2)轉(zhuǎn)OrCr1，2，3

3、基因擬南芥經(jīng)過43℃處理3h后生長(zhǎng)勢(shì)與野生型無顯著性差異;
　　3)轉(zhuǎn)OrCr3基因擬南芥在150mM NaCl條件下生長(zhǎng)10d的發(fā)芽率與根系長(zhǎng)勢(shì)高于或強(qiáng)于野生型，而轉(zhuǎn)OrCr1，2基因擬南芥與野生型發(fā)芽率與根系長(zhǎng)勢(shì)無顯著差異;
　　4)在滲透脅迫（300mM甘露醇培養(yǎng)基中萌發(fā)10d）下，轉(zhuǎn)OrCr3基因擬南芥發(fā)芽率明顯低于野生型并且根長(zhǎng)短于野生型，而轉(zhuǎn)OrCr1，2基因擬南芥與野生型發(fā)芽率與根系長(zhǎng)勢(shì)無顯著性差異;
　

4、　5)在0.4μM-0.8μM脫落酸處理下，轉(zhuǎn)OrCr1，2，3基因擬南芥植株均增加對(duì)脫落酸的敏感性，尤其在0.8μM脫落酸中，轉(zhuǎn)OrCr1，2,3基因擬南芥幾乎不萌發(fā)，而野生型正常萌發(fā);隨著脫落酸處理濃度的升高，根系長(zhǎng)度逐漸降低或者不萌發(fā)，而到0.8μMABA時(shí)，轉(zhuǎn)OrCr1，2,3基因擬南芥根幾乎不生長(zhǎng)，而野生型擬南芥根系長(zhǎng)度稍微低于正常條件下的擬南芥根長(zhǎng)。
　　以上結(jié)果說明:OrCr1，2，3基因在擬南芥中異位表達(dá)能提高擬南