Molecular characterization of begomoviruses infecting Vernonia cinerea and Ipomoea indica.pdf

1、雙生病毒(雙生病毒科)植物病毒中具有孿生顆粒形態(tài)的單鏈環(huán)狀DNA病毒,已在多個(gè)國(guó)家和地區(qū)的多種重要經(jīng)濟(jì)作物上造成毀滅性危害。根據(jù)雙生病毒基因組結(jié)構(gòu)、介體種類(lèi)、寄主范圍的不同將雙生病毒科劃分為四個(gè)屬,其中菜豆金色花葉病毒屬是種類(lèi)最多、分布最廣、危害最為嚴(yán)重的一個(gè)屬,在自然條件下一般通過(guò)煙粉虱(Bemisia tabaci)以持久性方式傳播,侵染雙子葉植物。多數(shù)菜豆金色花葉病毒屬病毒為雙組份基因組,即DNA-A和DNA-B。而有些為單組份病

2、毒,其基因組結(jié)構(gòu)相當(dāng)于雙組份病毒的DNA-A。多數(shù)舊世界的單組份雙生病毒還伴隨有單鏈DNA衛(wèi)星分子為betasatellites(DNA-β),DNA-β不能自主復(fù)制。需依賴(lài)丁輔助病毒編碼的蛋白進(jìn)行復(fù)制和系統(tǒng)運(yùn)輸,并且多數(shù)DNA-β與癥狀誘導(dǎo)相關(guān)。很多雙生病毒／DNA-β復(fù)合物中還伴隨有第三類(lèi)病毒組分,即alphasatellite(DNA1),DNA1不能單獨(dú)侵染植物,必須依賴(lài)于輔助病毒進(jìn)行包裹、移動(dòng)和系統(tǒng)侵染,對(duì)病毒的致病性幾乎沒(méi)有

3、影響。在中國(guó),越來(lái)越多的菜豆金色花葉病毒被鑒定。
　　 有效的疾病控制策略需要對(duì)雙生病毒的感染作出準(zhǔn)確和精確地診斷,單由癥狀的觀察不能對(duì)感染的雙生病毒作出可靠的診斷,因?yàn)楦啻嬖诘氖莾蓚€(gè)或兩個(gè)以上病毒的混合侵染。分子診斷提供了一個(gè)具體的病毒病原鑒定的可靠工具。本文對(duì)侵染夜香牛及甘薯的雙生病毒進(jìn)行了分子鑒定。
　　 夜香牛(Vernonia cinerea)樣品采自福建省,病株表現(xiàn)為黃脈癥狀。利用雙生病毒的簡(jiǎn)并引物PA／P

4、B擴(kuò)增到約500 bp的片段,片段克隆測(cè)序結(jié)果顯示為雙生病毒DNA-A的非編碼區(qū)和外殼蛋白基因的部分區(qū)域。根據(jù)此500bp片段設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增病毒全長(zhǎng)基因組序列,得到一條2.7kb的片段,通過(guò)在Genebank中進(jìn)行BLAST同源性檢索發(fā)現(xiàn),它與分離自印度的夜香牛黃脈病毒(VeYVV)相似性最高,達(dá)78.9％。與之前的報(bào)道相一致,伴隨有VeYVV的還有DNA-β和DNA1衛(wèi)星分子,前者顯示與夜香牛黃脈病毒伴隨的DNA-β分子(VeYVB)有

5、52.1％的同源性,后者顯示與棉花無(wú)癥病毒伴隨的DNA1分子(GMusSLA)相似性最高為70.7％。鑒于雙生病毒的分類(lèi)命名規(guī)則,我們將此命名為福建夜香牛黃脈病毒(Vernoniayellow vein Fujian virus,VeYVFjV)。
　　 甘薯曲葉病毒(Sweet potato leaf curl virus,SPLCV)可在甘薯上引起毀滅性的危害,已經(jīng)在包括美洲、亞洲、非洲以及歐洲的大陸上鑒定了很多種甘薯曲葉病

6、毒及其相關(guān)雙生病毒。同樣在中國(guó),甘薯曲葉病毒引起的曲葉病的危害性也得到了廣泛的注意。甘薯曲葉病毒感染植物后主要引起曲葉、褪綠、黃色斑駁等癥狀。為了明確存在中國(guó)的甘薯曲葉病毒的株系,本研究采用分子生物學(xué)的診斷方法對(duì)從江蘇和云南兩省采來(lái)帶有類(lèi)似雙生病毒癥狀的銳葉牽牛進(jìn)行了鑒定。使用通用引物PA／PB獲得了500 bp長(zhǎng)的DNA片段,然后進(jìn)行克隆和測(cè)序。測(cè)序結(jié)果可知,兩個(gè)樣品的500 bp長(zhǎng)的DNA片段與甘薯曲葉病毒的序列同源性大于89％,按