扁蓿豆AFLP體系的建立及在其遺傳完整性檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、AFLP(Amplified fragment length polymorphism)是一種新型的分子標(biāo)記技術(shù)，目前已廣泛應(yīng)用于生物遺傳多樣性研究、種質(zhì)資源鑒定及動(dòng)植物育種等領(lǐng)域的研究。本試驗(yàn)建立了適合扁蓿豆的AFLP分析體系，并首次使用AFLP分子標(biāo)記對(duì)扁蓿豆（Medicago ruthenica L.）種質(zhì)的遺傳完整性進(jìn)行檢測(cè)。以期為扁蓿豆種質(zhì)資源保存、扁蓿豆分子遺傳圖譜的構(gòu)建提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.建立了

2、適合扁蓿豆的AFLP分析體系。具體內(nèi)容為：模板DNA的用量范圍為100ng-600ng；酶切體系中，EcoRⅠ和MseⅠ各加入3U，在37℃下酶切反應(yīng)4h；加入接頭后在16℃連接10-12h；預(yù)擴(kuò)增體系總體積為20μl，酶切連接產(chǎn)物為4μl；將預(yù)擴(kuò)增體系稀釋20倍后用于選擇性擴(kuò)增。
　　2.從64個(gè)EcoRⅠ和MseⅠ引物組合中篩選出8對(duì)條帶清晰，多態(tài)性高的引物，8對(duì)引物共擴(kuò)增出92個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)41個(gè)，占總位點(diǎn)數(shù)的44.