應(yīng)用胚胎工程技術(shù)快速擴(kuò)繁天祝白牦牛的試驗(yàn)研究.pdf

1、為了加速天祝白牦牛的繁育進(jìn)程，進(jìn)行品種的培育和改良，本試驗(yàn)緊密結(jié)合動(dòng)物繁殖生產(chǎn)實(shí)踐，利用胚胎工程技術(shù)對54頭天祝白牦牛（供體）的超數(shù)排卵、86頭黑牦牛（受體）的同期發(fā)情以及胚胎回收、胚胎移植和超數(shù)排卵及同期發(fā)情前后供體和受體體內(nèi)幾種重要生殖激素水平的變化等進(jìn)行了研究和應(yīng)用，從而探索出簡潔而高效的白牦牛胚胎移植技術(shù)體系，為白牦牛的快速繁殖提供理論依據(jù)，并形成規(guī)?；a(chǎn)。結(jié)果顯示：
　　 1、在利用等量法注射國產(chǎn)FSH進(jìn)行超數(shù)排卵的

2、10頭牛中，有4頭牛反應(yīng)良好，其中有2頭干巴，1頭牙日瑪和1頭頭麻，超排的有效率為40％。在超排結(jié)束后，這4頭牛的卵巢平均大小為（3.8±0.8）×（3.0±1.1）×（2.1±0.6）cm3，卵巢平均增幅為22.47±5.62倍。其中干巴牛的兩側(cè)卵巢上共有10個(gè)突出于卵巢表面的黃體，另外1頭牙日瑪和1頭頭麻的兩側(cè)卵巢上分別有2個(gè)和4個(gè)黃體。其余6頭牛的卵巢上有的雖然有卵泡生長發(fā)育，但是沒有成熟和排卵，卵巢上也沒有黃體形成，卵巢的體積有

3、不同程度的增大，卵巢平均增幅為5.73±4.21倍。
　　 2、在利用減量注射法的對比實(shí)驗(yàn)中，共處理了10頭供體牛，有5頭牛的卵巢上有卵泡發(fā)育成熟，并且排卵。其中反應(yīng)較好的是2頭干巴，另外2頭牙日瑪和1頭頭麻均在一側(cè)的卵巢上各有1個(gè)黃體，超數(shù)排卵的總有效率為50％。2頭干巴牛的卵巢大小平均為（3.6±1.1）×（2.5±1.0）×（1.8±0.8）cm3，增幅為24.15±2.36倍；另外3頭牛的卵巢體積平均為（2.5±1.0）

4、×（1.6±1.1）×（1.1±0.6）cm3，平均增幅為15.49±5.23倍。通過直腸檢查發(fā)現(xiàn)這5頭牛共有17個(gè)黃體突出于兩側(cè)的卵巢表面。反應(yīng)效果不明顯的5頭牛的卵巢上有少量卵泡生長，但是沒有發(fā)育成熟，與處理前相比，它們的卵巢體積也明顯增大，平均大小為（1.8±0.8）×（1.4±0.6）×（1.0±0.6）cm3，增幅為3.16±2.80倍。
　　 3、在等量法注射進(jìn)口FSH的實(shí)驗(yàn)中共處理10頭供體白牦牛，有5頭牛超排效果

5、明顯，其中有2頭干巴，2頭牙日瑪和1頭頭麻，超排的有效率為50％。干巴牛的兩側(cè)卵巢上共有9個(gè)突出于卵巢表面的黃體，另外2頭牙日瑪兩側(cè)卵巢上共有4個(gè)黃體，1頭頭麻的兩側(cè)卵巢上有3個(gè)黃體。在試驗(yàn)的10頭牛中，平均每頭干巴形成黃體3個(gè)，每頭牙日瑪形成黃體1個(gè)，每頭頭麻形成黃體1個(gè)。干巴的處理效果明顯高于牙日瑪和頭麻（P<0.05）。
　　 4、在減量法注射進(jìn)口FSH的實(shí)驗(yàn)組中，共處理了12頭供體牛，有6頭牛的卵巢上有卵泡發(fā)育成熟，并且

6、排卵，超排的有效率為50％。其中反應(yīng)較好的有3頭干巴、2頭牙日瑪和1頭頭麻。這6頭牛共有22個(gè)黃體突出于兩側(cè)的卵巢表面。另外在處理的12頭牛中，干巴牛卵巢上有4個(gè)卵泡，牙日瑪有2個(gè)卵泡，頭麻有3個(gè)卵泡。
　　 5、應(yīng)用CIDR和大劑量FSH處理供體白牦牛的實(shí)驗(yàn)中，共處理了6頭供體白牦牛，其中有3頭牛超排反應(yīng)良好，其余3頭牛反應(yīng)不明顯，超排有效率為50％。反應(yīng)良好的3頭牛兩側(cè)的卵巢上共有10個(gè)黃體，平均每頭牛可獲得黃體數(shù)為1.67

7、個(gè)，并且有4個(gè)沒有排卵的卵泡。
　　 6、在應(yīng)用PMSG處理的6頭供體牛中，有2頭牛在96h內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情癥狀，其卵巢上共有6個(gè)黃體，平均每頭牛的黃體數(shù)為1枚，另外有8個(gè)沒有排卵的卵泡存在，超排的有效率為33％。
　　 7、應(yīng)用CIDR和FSH重復(fù)處理供體白牦牛的結(jié)果顯示，在處理的6頭牛中，有4頭牛反應(yīng)良好，其余2頭牛反應(yīng)不明顯，超排有效率為67％。直腸檢查可觸摸到反應(yīng)良好的4頭牛兩側(cè)的卵巢上共有22個(gè)黃體突出于表面，平均每

8、頭牛可獲得黃體數(shù)為3.67個(gè)，另有沒有排卵的卵泡5個(gè)。卵巢平均增幅為23.24±5.11倍。
　　 8、在應(yīng)用CIDR+前列腺素法進(jìn)行同期發(fā)情處理受體黑牦牛的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用上海產(chǎn)PG處理的26頭牛中，有14頭牛出現(xiàn)了發(fā)情癥狀，其中在24h內(nèi)發(fā)情的2頭，25h～48h內(nèi)發(fā)情的有7頭，49h～72h內(nèi)發(fā)情的3頭，73h以上發(fā)情的2頭，同期發(fā)情處理的有效率為53.8％，另有12頭牛未出現(xiàn)明顯的發(fā)情癥狀，但有2頭牛的卵巢上觸摸到了發(fā)育中的

9、卵泡；應(yīng)用寧波產(chǎn)PG共處理了20頭受體牛，撤栓后24h內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情的有1頭，25h～48h內(nèi)發(fā)情的有6頭，49h～72h內(nèi)發(fā)情的3頭，73h以上發(fā)情的1頭，同期發(fā)情的有效率為55％，另有9頭牛在120h內(nèi)未見發(fā)情癥狀。應(yīng)用CIDR+氯前列烯醇法進(jìn)行受體牛同期發(fā)情處理的總有效率為54.3％，受體牛的發(fā)情現(xiàn)象主要集中在撤栓后的25～72h之內(nèi)，占發(fā)情總數(shù)的76％，24h以內(nèi)發(fā)情的和73h以后發(fā)情的各占12％。
　　 9、使用前列腺素法

10、共計(jì)處理40頭受體牛，分為兩組，第一組共18頭牛，為一次注射氯前列烯醇組，在處理后的24h內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情的有0頭，25h～48h內(nèi)發(fā)情的有0頭，49h～72h內(nèi)發(fā)情的2頭，73h以上發(fā)情的2頭，總發(fā)情率為22.2％：第二組的22頭牛在第一次注射氯前列烯醇后，有2頭牛在25～72h內(nèi)出現(xiàn)了發(fā)情現(xiàn)象，在對剩余的20頭進(jìn)行第二次注射氯前列烯醇后，24h內(nèi)出現(xiàn)發(fā)情的有1頭，25h～48h內(nèi)發(fā)情的有3頭，49h～72h內(nèi)發(fā)情的4頭，73h以上發(fā)情的1

11、頭，發(fā)情主要集中在注射激素后的25～72h以內(nèi)，同期發(fā)情處理的總有效率為50％。
　　 10、本試驗(yàn)用于沖胚的供體白牦牛共29頭，共沖出胚胎128枚，能夠用于移植的形態(tài)正常的胚胎104枚，另外24枚為等外胚胎。胚胎有效率為81.3％。在104枚正常胚胎中，有85枚桑葚胚，另外19枚為早期囊胚。其中40枚進(jìn)行常溫保存，用于鮮胚移植，另外64枚進(jìn)行冷凍保存，用于凍胚移植。
　　 11、在胚胎移植過程中，共鮮胚移植了27頭經(jīng)同

12、期發(fā)情處理后的受體牛，移植2個(gè)月后通過直腸檢查診斷有14頭牛懷孕，妊娠率為52％。由于1頭懷孕牛意外死亡，產(chǎn)犢率為48.1％。將13枚冷凍胚胎分別移植給了13頭經(jīng)同期發(fā)情處理過的受體黑牦牛，移植2個(gè)月后通過直腸檢查診斷有5頭牛懷孕并產(chǎn)犢，妊娠率為38.5％。同時(shí)在對自然發(fā)情黑牦牛的胚胎移植中，用新鮮胚胎移植的5頭牛中，有3頭牛懷孕，妊娠率為60％，另外6頭冷凍胚胎移植的牛中有3頭也發(fā)生懷孕，妊娠率為50％。
　　 12、在供體牛

13、超數(shù)排卵周期中，母畜血清孕酮的濃度在d8前沒有明顯的變化，保持相對穩(wěn)定的水平，但在d8后迅速下降，d10降到最低值，以后又開始升高。血清雌二醇的變化趨勢剛好相反。
　　 13、受體牛在同期發(fā)情處理周期中，血清孕酮和雌二醇的濃度變化與供體牛的變化趨勢相似，d10時(shí)孕酮的含量降低而雌二醇的含量升高。
　　 結(jié)果：表明，國產(chǎn)FSH與進(jìn)口FSH在處理供體白牦牛進(jìn)行超數(shù)排卵時(shí)，其效果差異不顯著；在同等條件下，使用大劑量的FSH對供

14、體白牦牛進(jìn)行超數(shù)排卵，其效果與使用正常劑量FSH的處理效果之間沒有明顯的差異，其總有效率和平均每頭牛形成的黃體數(shù)幾乎相等；與使用CIDR+FSH進(jìn)行超數(shù)排卵相比，使用PMSG處理供體白牦牛進(jìn)行超數(shù)排卵的效果明顯要低；重復(fù)進(jìn)行超數(shù)排卵處理的效果顯著地高于一次處理的效果，平均每頭牛的排卵數(shù)也明顯地高于一次處理組；采用CIDR+氯前列烯醇進(jìn)行同期發(fā)情處理的總有效率要明顯地高于單純一次使用氯前列烯醇，但與重復(fù)兩次使用氯前列烯醇的同期發(fā)情效果差異