江蘇部分地區(qū)克氏原螯蝦WSSV調(diào)查及ELISA檢測(cè)技術(shù).pdf

1、克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)俗稱小龍蝦，原產(chǎn)于美國(guó)南部和墨西哥北部，后由美國(guó)傳入日本，上世紀(jì)30年代末期由日本引入我國(guó)，因其味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，現(xiàn)己成為我國(guó)市場(chǎng)上深受歡迎的水產(chǎn)品，而江蘇省是我國(guó)主要的克氏原螯蝦生產(chǎn)地區(qū)，區(qū)位優(yōu)勢(shì)明顯。然而，自2007年5月份開(kāi)始，在江蘇省的徐州、盱眙、淮安、揚(yáng)州、常州等地先后發(fā)生了克氏原螯蝦病害，死亡率最高達(dá)50％，使克氏原螯蝦養(yǎng)殖業(yè)遭受了巨大損失，經(jīng)檢測(cè)，確定致病原為白斑綜合征

2、病毒(WSSV)。
　　白斑綜合征病毒(WSSV)是一種具囊膜、桿狀的雙鏈環(huán)狀DNA病毒。由WSSV引起的對(duì)蝦白斑綜合征疾病自1992年首次發(fā)現(xiàn)于我國(guó)臺(tái)灣以來(lái)，現(xiàn)如今已在世界范圍內(nèi)爆發(fā)流行，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)、聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)及亞太水產(chǎn)養(yǎng)殖中心網(wǎng)(NACA)列為需要報(bào)告的重要水生動(dòng)物疾病病原之一。雖然在過(guò)去20余年，對(duì)WSSV的病原學(xué)、分子生物學(xué)以及致病機(jī)理等方面已經(jīng)有了深入研究，但是目前對(duì)由WSSV所引起的疾病

3、尚無(wú)有效治療方法，使得人們?cè)趹?yīng)對(duì)它時(shí)必須側(cè)重于早期的防控，而這又主要依賴于早期快速的診斷和篩查。
　　本論文通過(guò)調(diào)查江蘇省部分地區(qū)養(yǎng)殖克氏原螯蝦中白斑綜合征的流行狀況，獲得了第一手?jǐn)?shù)據(jù)，并初步純化出WSSV，制備了WSSV囊膜蛋白VP26和VP28的多克隆抗體，以嘗試建立ELISA快速檢測(cè)技術(shù)，便于基層推廣應(yīng)用。
　　1、江蘇省部分地區(qū)克氏原螯蝦WSSV調(diào)查
　　2014-2015年江蘇省克氏原螯蝦養(yǎng)殖持續(xù)保持較強(qiáng)地上

4、升勢(shì)頭，養(yǎng)殖面積不斷擴(kuò)大，克氏原螯蝦養(yǎng)殖業(yè)已逐步成為我省重要的淡水水產(chǎn)支柱產(chǎn)業(yè)。但隨著養(yǎng)殖業(yè)的高速發(fā)展，克氏原螯蝦暴發(fā)性流行病問(wèn)題日益突出，尤以白斑綜合征病毒病感染最為普遍。本課題組與江蘇省淡水水產(chǎn)研究所合作，建立了克氏原螯蝦WSSV測(cè)報(bào)系統(tǒng)，按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1151.2-2011對(duì)蝦白斑病檢疫技術(shù)規(guī)范聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)方法檢測(cè)，對(duì)江蘇省南京市、楚州區(qū)、姜堰區(qū)、盱眙縣等部分地區(qū)克氏原螯蝦WSSV病害情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、分析，發(fā)

5、現(xiàn)當(dāng)前白斑綜合征病毒病己成為克氏原螯蝦養(yǎng)殖業(yè)的最主要病害，并呈不斷蔓延趨勢(shì)。
　　2、基于WSSV囊膜蛋白VP26、VP28的ELISA檢測(cè)技術(shù)
　　在目前常用的幾種病原檢測(cè)方法中，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試驗(yàn)成本較低、簡(jiǎn)單實(shí)用且靈敏度高、特異性強(qiáng)，而且不需要任何儀器設(shè)備，便于生產(chǎn)實(shí)際應(yīng)用，是一種早期診斷的良好方法。本實(shí)驗(yàn)成功表達(dá)、獲取了WSSV的VP26、VP28蛋白;用獲取的蛋白免疫新西蘭大耳兔制備多克隆抗體;參照已有