豬高熱病發(fā)病機理研究.pdf

1、自2006年夏季以來，起初發(fā)生我國中南地區(qū)的安徽、江西、浙江、湖南、湖北、江蘇等省份，而后波及全國各地的以豬體溫升高、皮膚發(fā)紅和呼吸急促等主要臨床癥狀，剖檢變化以彌散性、出血性間質(zhì)性肺炎、淋巴結(jié)和各內(nèi)臟器官不同程度出血為突出特征的豬傳染病。該病發(fā)病率可以達到80％-90％,病死率高達50％-90％。由于體溫高、發(fā)病率高、病死率高，而治愈率低，故俗稱“三高一低”，2006年至今，該病的暴發(fā)與流行給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。起始由于人

2、們不清楚該病的主要病原，故有“豬無名高熱”的稱謂。利用采自疫區(qū)的病料懸液和分離的大腸桿菌，接種健康豬，引起與高熱病同樣癥狀的疾病，造成2/3的豬只死亡，但是對照組正常；該實驗證明大腸桿菌是引起高熱病的原因之一，但不是最主要的病原；爾后通過分離的病毒F2代和大腸桿菌再次接種健康豬，造成12/13的豬只死亡，對照組正常，并且從疫區(qū)病料和兩次復制的病例中都能分離到豬繁殖與呼吸綜合征病毒；這些研究表明，該病為細菌與病毒的混合感染，引起本病最主要

3、的病原為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒。豬高熱病病原的確定，為豬高熱病的預防與控制提供了理論依據(jù)。 分離的PRRSV，經(jīng)過噬斑純化后，擴大培養(yǎng)；利用RT-PCR技術(shù)擴增基因片段，加A后克隆連接到pMD18-T載體，經(jīng)驗證有目的基因插入后，送生物公司測序，獲得該病毒的基因全長，全長為15，328nt，GENBANK登錄號為EF517962；經(jīng)過與標準毒株VR-2332的比較發(fā)現(xiàn)，在非結(jié)構(gòu)蛋白中，最保守的區(qū)域為NSP9,變異最大區(qū)域

4、是NSP2；發(fā)現(xiàn)在NSP2處缺失30AA，其中有29AA為連續(xù)缺失，該實驗表明引起高熱病的豬繁殖與呼吸綜合征病毒是變異毒株；在結(jié)構(gòu)蛋白中最保守的區(qū)域為ORF6，變異最大的為ORF5。同時對同時期分離自高熱病的其它毒株5'UTR比較發(fā)現(xiàn)，該區(qū)存在文獻報道的12nt,8-11-9的串狀保守區(qū)域以及CACC的保守區(qū)域；3'UTR與標準毒株及中國的早期分離株比較后發(fā)現(xiàn)，在poly(A)尾巴上游的第5個核苷酸有所不同，標準毒株及中國早期的絕大多數(shù)

5、分離株為A，而分離自高熱病的病毒全部為U。病毒基因全長的擴增豐富了豬繁殖與呼吸綜合征病毒的基因數(shù)據(jù)庫，為深入研究該毒株的遺傳與變異及其與生物學特性的關(guān)系奠定了基礎，同時全部基因的獲得為感染性克隆的構(gòu)建，并通過某些基因的插入、突變和缺失來深入致病機理奠定了實驗基礎。 采取實驗室攻毒后發(fā)病實驗豬的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、扁桃體、淋巴結(jié)、膀胱、胃臟，腸、睪丸、腦等器官、通過2.5％的戊二醛一甲醛固定液固定后制取病理切片，通過觀察

6、發(fā)現(xiàn)各個器官均有不同程度的病理變化，其中以呼吸系統(tǒng)(肺臟)和生殖系統(tǒng)(睪丸)的損害最為嚴重，腦(病毒性腦炎的全部癥狀)、心臟(血栓和微血栓形成)、肺臟(正常結(jié)構(gòu)被破壞，有效肺泡體積較少，血管內(nèi)血栓和微血栓形成)的病理變化揭示了病死率高達50％-90％的原因；免疫組化的結(jié)果告訴我們，呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)全部為強陽性，扁桃體、淋巴結(jié)、肝臟的病毒含量較多，心臟、腸等為弱陽性，提示我們在胃、腸等器官內(nèi)也有PRRSV的存在；值得提出的是在每一個組織