大西洋鮭熒光假單胞菌感染癥的病原學(xué)及病理學(xué)研究.pdf

1、2008年10月以來(lái)，陸續(xù)在四川都江堰、彭山等地發(fā)生了一種嚴(yán)重危害大西洋鮭健康養(yǎng)殖的慢性潰瘍病，該病具有發(fā)病緩慢，死亡率高等特點(diǎn)，以體表出現(xiàn)圓形、橢圓形或不規(guī)則的潰瘍?yōu)椴∽兲卣?，已給當(dāng)?shù)氐拇笪餮篚q養(yǎng)殖帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)對(duì)其病原學(xué)與病理學(xué)等進(jìn)行了研究，其目的在于搞清該病的病原與致病機(jī)理，為養(yǎng)殖生產(chǎn)中有效地診斷和防治該病提供科學(xué)依據(jù)。
　　 經(jīng)常規(guī)細(xì)菌分離，從自然發(fā)生體表潰瘍的大西洋鮭肌肉潰瘍周圍肌肉和肝臟處分離到一相同菌株

2、命名為DF081019。經(jīng)人工感染實(shí)驗(yàn)確定為大西洋鮭潰瘍癥的病原。對(duì)該菌的形態(tài)、生理生化特征檢測(cè)表明，該菌為革蘭氏陰性短桿菌，大多數(shù)菌落單獨(dú)存在，少數(shù)菌落成對(duì)出現(xiàn)。菌落1～1.7mm，表面光滑，凸起有光澤，在LB培養(yǎng)基上呈半透明生長(zhǎng)，無(wú)鞭毛，無(wú)莢膜。該菌葡萄糖氧化發(fā)酵陽(yáng)性，氧化酶檢測(cè)陽(yáng)性，0％NaCL生長(zhǎng)。能利用甘露醇，不具運(yùn)動(dòng)性，能發(fā)酵麥芽糖，葡萄糖產(chǎn)酸陽(yáng)性，精氨酸雙水解酶陽(yáng)性，苯丙氨酸脫氨酶陰性。對(duì)分離株的藥物敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該

3、菌對(duì)強(qiáng)力霉素，四環(huán)素，氟苯尼考，慶大霉素敏感，對(duì)阿奇霉素，克拉霉素，先鋒霉素Ⅱ，丁胺卡那霉素較為敏感，對(duì)美滿霉素，鏈霉素，萬(wàn)古霉素，氨芐青霉素，磺胺異惡唑，新霉素，卡那霉素，青霉素，羧芐青霉素不敏感。應(yīng)用細(xì)菌通用引物，擴(kuò)增出DF081019菌株的16SrRNA的互補(bǔ)DNA片段，該片段大小為1490個(gè)bp。將獲得的序列在RDP數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行在線Classifer。結(jié)果表明，該菌屬于假單胞菌屬的細(xì)菌，再將獲得的序列與GenBank中已報(bào)道的假單

4、胞菌16SrDNA序列用DNAstar軟件進(jìn)行多序列比對(duì)分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果證實(shí)，DF081019分離株與其他熒光假單胞菌形成一個(gè)簇群，同源性高達(dá)99.3％以上，最終鑒定其為熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)。
　　 同時(shí)，通過(guò)肌肉注射、創(chuàng)傷感染和浸泡試驗(yàn)檢測(cè)該菌對(duì)大西洋鮭的毒力，結(jié)果表明，通過(guò)肌肉注射、創(chuàng)傷感染兩種方式出現(xiàn)與自然發(fā)病魚相似的體表潰瘍癥狀，并引起死亡的LD50值為3.2×105.

5、42cfu/ml;對(duì)其病變的病理學(xué)研究表明病灶處骨骼肌間質(zhì)水腫，出血，間隙增寬，肌纖維變性，肌漿凝固，呈嚴(yán)重紅染，部分肌細(xì)胞肌肉漿溶解呈蜂窩狀，間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；肌漿溶解嚴(yán)重的溶解成空泡狀，僅殘存少量的肌膜，部分區(qū)域肌纖維斷裂；肝細(xì)胞腫脹，空泡變性，部分肝細(xì)胞溶解壞死，細(xì)胞核溶解消失；肝血竇水腫擴(kuò)張，有蛋白樣物質(zhì)滲出；狄氏間隙擴(kuò)張；有淤血出現(xiàn)；脾臟出血，淋巴細(xì)胞大量消失，被紅細(xì)胞占據(jù)，大量含鐵血黃素沉著；潰瘍處皮膚表皮層和真皮層水腫；腸