秭歸秋露李系列品種開花生物學(xué)研究及ISSR分析.pdf

1、李(P.salicina Lindl.)為薔薇科(Roseceae)李屬(Prunus L.)植物，落葉小喬木，春季開花，一般定植后3-4年開始結(jié)果，6-7年進(jìn)入盛果期，是一種優(yōu)良的經(jīng)濟(jì)樹種。秭秋、秭露、秋露3個(gè)李品種系歷時(shí)十年選育出來的適合湖北西部700-1500m半高山地區(qū)栽培的優(yōu)良李品種。其中，秭秋是中晚熟品種(8月中旬成熟)，秭露、秋露是晚熟品種(約9月中旬成熟)。本文以秭秋、秭露、秋露3個(gè)李品種為試材，應(yīng)用石蠟切片、熒光顯微技

2、術(shù)等方法，對其3個(gè)品種的開花物候期、花粉質(zhì)量、田間雜交授粉坐果率、花粉管萌發(fā)及授粉受精過程等開花生物學(xué)方面的內(nèi)容進(jìn)行系統(tǒng)研究；同時(shí)應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對包括秭秋、秭露、秋露在內(nèi)的湖北三峽庫區(qū)14個(gè)李品種的親緣關(guān)系進(jìn)行分析。其研究結(jié)果總結(jié)如下：
　　 1、開花物候期研究。秭秋、秭露、秋露的花期集中在3月下旬至4月上旬，秭露和秋露(晚熟品種)花期基本相同，秭秋(中熟品種)花期比兩個(gè)晚熟品種晚4-7天，花期為7-10天。單花開放過

3、程包括露瓣期、展瓣期、落瓣期三個(gè)過程。
　　 2、授粉受精研究。秭秋、秭露、秋露的新鮮花粉活力分別為79.3％、56.8％、70.5％。經(jīng)柱頭觀察，秭歸秋露李系列品種的柱頭有效期為開花前2天至開花第4天，共6天，最佳授粉期為開花前2天至開花第2天，共4天。秭秋、秭露、秋露三個(gè)李品種的田間自花授粉座果率分別為8％、5.5％、6.5％，田間異花授粉座果率分別為15.5％、23.5％、18.5％。秭秋花粉在授粉后1h開始在柱頭上萌發(fā)，

4、36h后花粉管到達(dá)花柱基部，授粉后72h后雙受精過程完成。
　　 3、ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立。通過正交試驗(yàn)，建立了李I(lǐng)SSR-PCR最佳反應(yīng)體系：20ul反應(yīng)體系中，10×Buffer(Mg2+ free)2.0uL、1.5U Tap DNA聚合酶、0.5umol/L的引物、0.2 mmol/L的dNTPs、2.0mmol/L的MgCl2、20ng模板DNA。其反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min、94℃變性45sec、55

5、-56℃退火1min、72℃延伸1.5min、38個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min，4℃保存。
　　 4、親緣關(guān)系分析。利用優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系，挑選出10條擴(kuò)增條帶特異、條帶數(shù)適中、清晰、可重復(fù)性好的引物，共擴(kuò)增出101條清晰且可重復(fù)的DNA條帶，其中有83條屬多態(tài)帶，多態(tài)位點(diǎn)比率(Percentage of polymorphic bands，PPB)為82.18％。應(yīng)用POPGENE1.31和NTSYS2.10e軟件