植原體侵染對泡桐組培苗酶的影響及相關(guān)基因片段克隆研究.pdf

1、該試驗(yàn)分為三部分,第一部分是外施藥劑對泡桐病健組培苗過氧化物酶(POD)和吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性的影響,第二部分是與植原體侵染相關(guān)的酶蛋白純化,第三部分是與植原體侵染相關(guān)的POD基因片斷克隆.通過外源使用植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(NAA和6-BA)和一種酚類物質(zhì)(SA)處理泡桐無性系病健組培苗,結(jié)果表明,NAA處理后,在第一周適宜的濃度可以降低因損傷引起POD活性升高的代謝反應(yīng),在第二和第四周,POD活性升高總體上隨著藥劑濃度的升高而升

2、高,而對于IAAO的活性變化兩無性系間的變化趨勢差異較大,NAA處理后植株的生根能力增強(qiáng),對生長有一定的促進(jìn)作用:6-BA處理后,POD和IAAO的活性在各周次的測定中都出現(xiàn)活性下降,在形態(tài)上健康苗出現(xiàn)類似病苗的癥狀,病苗的癥狀加重;SA處理后病健苗都出現(xiàn)POD活性升高,IAAO活性下降,在處理濃度范圍內(nèi),SA的加入抑制了健康苗的生長,促進(jìn)了病苗的生長;在提取酶液時(shí)加入PVP-P除去酚類物質(zhì),POD的活性明顯上升,IAAO的活性略有下降

3、,酚類物質(zhì)可以抑制POD的活性,提高IAAO的活性.運(yùn)用泡桐病健組培苗進(jìn)行酶蛋白的抽提,酶的純化過程包括勻漿、(NH4)2S04沉淀、陰離子DEAE-sephadex A50和陽離子CM-52交換層析,純化和鑒定了一種在病苗中表達(dá)量特異性升高的POD,對該酶進(jìn)行高效液相色譜分析可知,該酶的純度已達(dá)到99﹪以上,比活力達(dá)到371U/mg.對泡桐病健組培苗對照進(jìn)行POD酶基因誘導(dǎo)表達(dá)的研究,通過分子生物學(xué)的方法,從病苗中克隆出一段長度為87