基于核酸適配體的水中重金屬檢測(cè)技術(shù)條件優(yōu)化及適用性研究.pdf

1、重金屬在地殼和水環(huán)境中分布廣泛,在自然狀況下,微量的重金屬一般不會(huì)對(duì)人類(lèi)健康造成影響。但近些年,隨著人類(lèi)社會(huì)的發(fā)展,重金屬被廣泛應(yīng)用于工業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域,人為的造成大量重金屬進(jìn)入環(huán)境,使得環(huán)境受到污染。重金屬污染的主要特點(diǎn)是可以在環(huán)境中通過(guò)食物鏈富集,只能轉(zhuǎn)移,而不能被降解。對(duì)環(huán)境中重金屬的監(jiān)測(cè)已經(jīng)引起廣泛的關(guān)注。
　　常用的重金屬檢測(cè)傳統(tǒng)方法有原子發(fā)射光譜法、原子吸收光譜法、紫外-可見(jiàn)分光光度法、原子熒光法、質(zhì)譜法等。這些傳統(tǒng)檢測(cè)

2、方法對(duì)操作人員專(zhuān)業(yè)性要求較高,設(shè)備大,不便攜。而近些年發(fā)展起來(lái)的基于重金屬核酸探針的生物傳感器技術(shù),具有響應(yīng)快速,操作方便等優(yōu)點(diǎn),因而具有很好的應(yīng)用前景。
　　本論文基于核酸適配體能夠與重金屬離子特異性結(jié)合,利用核酸適配體(aptamer)和核酸染料SYBR Green I構(gòu)建了生物傳感體系,對(duì)水中重金屬離子Ag+和Hg2+進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,對(duì)適用性進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容如下:
　　(1)胞嘧啶-胞嘧啶(C-C)

3、/胸腺嘧啶-胸腺嘧啶(T-T)錯(cuò)配堿基對(duì)在有Ag+/Hg2+存在時(shí),能夠特異性的形成穩(wěn)定的C-Ag+-C/T-Hg2+-T復(fù)合物。當(dāng)反應(yīng)體系中沒(méi)有Ag+/Hg2+存在時(shí),SYBR Green I只能吸附在單鏈DNA上,發(fā)出較弱的熒光。當(dāng)加入Ag+/Hg2+后,單鏈DNA形成穩(wěn)定的雙鏈DNA,從而使得SYBR Green I能夠嵌入雙鏈DNA的小凹槽與之結(jié)合,使體系的熒光強(qiáng)度急劇增強(qiáng),由此實(shí)現(xiàn)對(duì)Ag+/Hg2+的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化后, A

4、g+檢測(cè)的線性范圍在100nM~1000nM之間,檢出限達(dá)到59.9nM。Hg2+檢測(cè)的線性范圍為200nM~2.5μM,檢出限為3.02nM。(2)考察了水中幾種常見(jiàn)干擾因素Ca2+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Co2+、Mn2+、Cu2+、Pb2+、Al3+、Ni2+、Hg2+、銨鹽、氟化物、游離氯、氯化物及堿度對(duì)該檢測(cè)體系的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,上述這些干擾因素對(duì)Ag+/Hg2+檢測(cè)體系影響較小,該檢測(cè)體系具有應(yīng)用于實(shí)際水樣檢測(cè)的