基于適配體放大技術(shù)檢測(cè)microRNA.pdf

1、MicroRNA是一類(lèi)細(xì)胞內(nèi)源性的非蛋白編碼的小分子RNA，它通過(guò)調(diào)控蛋白表達(dá)在生命過(guò)程中起著重要的作用。MicroRNA的分析對(duì)進(jìn)一步研究其生物功能及疾病診斷都具有重要的意義。
　　適配體是一類(lèi)新的具有類(lèi)似抗體識(shí)別功能的核酸分子，比傳統(tǒng)抗體更穩(wěn)定，保存時(shí)間長(zhǎng)，可以進(jìn)行多種修飾?？兹甘G適配體（MGA）是由38個(gè)核糖核苷酸構(gòu)成的一段RNA序列?？兹甘G（MG）是一種三苯甲烷類(lèi)染料，由于不具備分子剛性結(jié)構(gòu)而沒(méi)有熒光?？兹甘G能夠與孔

2、雀石綠適配體特異性結(jié)合形成三維空間結(jié)構(gòu)，起到固定孔雀石綠平面結(jié)構(gòu)的作用，從而使孔雀石綠產(chǎn)生強(qiáng)的熒光發(fā)射。
　　本論文中我們建立了一種基于適配體放大技術(shù)方法來(lái)檢測(cè)miR-143。首先根據(jù)目標(biāo)miR-143序列設(shè)計(jì)擴(kuò)增模板，該模板包括：目標(biāo)miR-143互補(bǔ)序列，T7RNA聚合酶啟動(dòng)子序列和孔雀石綠適配體互補(bǔ)序列。當(dāng)目標(biāo)分析物miR-143存在時(shí)，miR-143與模板雜交，在Bst聚合酶作用下延伸產(chǎn)生T7啟動(dòng)子，T7RNA聚合酶能夠識(shí)