牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定及發(fā)病機(jī)理的研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜炎是引起母牛不孕癥的主要疾病之一，該病主要是由于分娩時(shí)或產(chǎn)后子宮內(nèi)病原微生物的感染引起。據(jù)統(tǒng)計(jì)由子宮內(nèi)膜炎引起的不孕癥占疾病性不孕的60％～70％。在國(guó)外有資料表明。奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率在30～4096左右。我國(guó)奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率約為20～50％左右。母牛發(fā)生子宮內(nèi)膜炎后可使產(chǎn)犢間期延長(zhǎng)、產(chǎn)奶量下降、死淘率增加、治療費(fèi)用增加及治療期間奶源的廢棄。然而子宮內(nèi)膜炎患病牛在不同的地區(qū)從子宮內(nèi)容物中所分離的病原菌種類及各種細(xì)菌所占

2、的比例不盡相同。本研究對(duì)平頂山地區(qū)某奶牛場(chǎng)子宮內(nèi)膜炎患病牛和郟縣紅牛子宮內(nèi)容物中的細(xì)菌進(jìn)行分離鑒定、藥物敏感性試驗(yàn)和昆明小鼠的致病性試驗(yàn)：根據(jù)樣品中細(xì)菌分離率的高低、細(xì)菌的耐藥情況并結(jié)合致病性試驗(yàn)結(jié)果共選擇5株細(xì)菌進(jìn)行昆明小鼠子宮內(nèi)膜炎病例模型的復(fù)制；通過(guò)小鼠子宮組織的病理切片和透射電鏡觀察子宮組織及其組織中細(xì)胞的損傷情況來(lái)揭示子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病機(jī)理。
　　 1、郟縣紅牛及奶牛子宮內(nèi)膜炎患病牛子宮內(nèi)容物中細(xì)菌的分離與鑒定：通過(guò)對(duì)某

3、奶牛場(chǎng)確診的29頭臨床型子宮內(nèi)膜炎患病牛子宮內(nèi)容物進(jìn)行分離培養(yǎng)、純化、鑒定，結(jié)果共分離出細(xì)菌18種(52株)。其中以蠟樣芽孢桿菌、奧斯陸莫拉菌、大腸埃希菌、鏈球菌、蘇云金芽孢桿菌為主。同時(shí)，我們對(duì)沒(méi)有子宮內(nèi)膜炎臨床癥狀的21頭郟縣紅牛進(jìn)行子宮內(nèi)容物樣品的采集，并對(duì)其進(jìn)行分離、純化、鑒定。結(jié)果共分離出細(xì)菌14種(43株)，其中以蠟樣芽孢桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、淺黃金色單胞菌、奧斯陸莫拉菌等為主。在所分離的14種細(xì)菌中有10種細(xì)菌

4、均與奶牛子宮內(nèi)膜炎患病牛所分離到的病原菌相一致。此外，從郟縣紅牛子宮內(nèi)容物中所分離細(xì)菌的革蘭氏染色結(jié)果來(lái)看，革蘭氏陽(yáng)性菌有23株(占53.5％)，革蘭氏陰性菌有20株(占46.5％)，兩者均與奶牛子宮內(nèi)膜炎患牛相一致。
　　 2、藥物敏感性試驗(yàn)：為了研究所分離細(xì)菌對(duì)藥物的敏感程度，在常用的各類藥物中選擇了24種藥物的標(biāo)準(zhǔn)品，采用微量肉湯稀釋法，測(cè)得了所分離細(xì)菌對(duì)24種藥物的敏感性。在奶牛樣品中所分離的18種細(xì)菌對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙

5、星、氟苯尼考及氯霉素均較為敏感。表皮葡萄球菌對(duì)四環(huán)素、土霉素、金霉素產(chǎn)生了耐藥性而對(duì)多西環(huán)素仍具有敏感性說(shuō)明該細(xì)菌對(duì)四環(huán)素類藥物還未產(chǎn)生完全交叉耐藥性。所有細(xì)菌對(duì)阿莫西林、氨芐西林均產(chǎn)生了較高的耐藥性。甚至大腸埃希菌、表皮葡萄球菌、玫瑰色庫(kù)克菌、棒狀桿菌屬、腦膜膿毒性金黃桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺酶抑制劑(克拉維酸)均產(chǎn)生了耐藥性。在郟縣紅牛樣品中所分離的14種細(xì)菌對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星、四環(huán)素、多西環(huán)素、氯霉素、氟本尼考、替米考星均較為敏感，所有

6、細(xì)菌除乳房鏈球菌(為中介)外均對(duì)阿莫西林、氨芐西林存在較高的耐藥。
　　 3、致病性試驗(yàn)：針對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎患病牛和郟縣紅牛子宮內(nèi)容物中所分離的細(xì)菌進(jìn)行了致病性試驗(yàn)。采集細(xì)菌的新鮮純培養(yǎng)物0.5mL接種于昆明小鼠腹腔中，觀察并記錄小鼠的發(fā)病致死情況。結(jié)果顯示：在郟縣紅牛樣品中所分離的蠟樣芽孢桿菌、滕黃微球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌和奶牛樣品中所分離的大腸埃希菌、腦膜膿毒性金黃桿菌、停乳鏈球菌、蘇云金芽孢桿菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌等，

7、在腹腔攻毒后2d內(nèi)均可使昆明小鼠致死，特別是郟縣紅牛樣品中的大腸埃希菌在腹腔攻毒后2～3h即可使昆明小鼠致死。
　　 4、昆明小鼠子宮內(nèi)膜炎病例模型的建立：根據(jù)樣品中細(xì)菌分離率的高低、細(xì)菌的耐藥性情況以及致病性的強(qiáng)弱共選擇5株細(xì)菌建立昆明小鼠子宮內(nèi)膜炎病例模型。在子宮內(nèi)接種細(xì)菌3d后將試驗(yàn)組小鼠處死，取子宮進(jìn)行細(xì)菌分離，結(jié)果表明：各模型組從子宮內(nèi)分離到所接種的細(xì)菌，同時(shí)在脾臟、肝臟中也可分離到所接種的細(xì)菌；生理鹽水對(duì)照組和空白對(duì)

8、照組均未分離到細(xì)菌。子宮組織病理切片和電鏡觀察表明：①各造模組小鼠HE染色結(jié)果顯示子宮黏膜上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，毛細(xì)血管充血，子宮內(nèi)膜及子宮肌層有大量中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，以及部分造模組肌纖維排紊亂、松散、肌肉的斷裂。②各造模組小鼠子宮組織的超微結(jié)構(gòu)觀察表明多數(shù)細(xì)胞中均可見(jiàn)到胞質(zhì)內(nèi)有火量空泡狀結(jié)構(gòu)、細(xì)胞核膜與細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)裂隙、細(xì)胞核內(nèi)的空泡以及凋亡小體的出現(xiàn)。③生理鹽水對(duì)照組和空白對(duì)照組HE染色結(jié)果觀察和透射電鏡的超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果