奶牛子宮內膜炎致病大腸桿菌的分離、鑒定及耐藥性研究.pdf

1、子宮內膜炎是導致奶牛不孕癥的生殖系統(tǒng)疾病之一。該病主要由分娩或產后子宮感染病原微生物引起。臨床上多使用抗微生物藥物對其進行治療.在藥物選擇壓力作用下，病原菌中的耐藥菌株不斷增多，不僅影響了畜牧業(yè)的良性發(fā)展，而且動物源性病原菌對抗微生物藥物耐藥性的形成也給人類健康帶來了嚴重的潛在威脅。因此，為了對引起奶牛子宮內膜炎的病原菌進行危害性分析和評估，并指導臨床合理用藥,本研究對內蒙古呼和浩特市周邊地區(qū)分離的奶牛子宮內膜炎大腸桿菌進行了血清型鑒定

2、和MICs值測定。 研究發(fā)現，該地區(qū)奶牛子宮內膜炎大腸桿菌的分離率為54.3％(57/105)，且分離菌株的優(yōu)勢血清型為O111:K58(B4)。57株大腸桿菌對磺胺類、芐胺嘧啶類、四環(huán)素、頭孢唑啉、廣譜青霉素類的氨芐西林、阿莫西林和氨基糖苷類的卡那霉素、鏈霉素以及氯霉素、多粘菌素E的耐藥率較高，在50～98％之間:而對頭孢噻呋、呋喃唑酮和氟喹諾酮類藥物較為敏感，耐藥率在13.7～35％之間。 采用PCR技術和直接測序對

3、臨床分離菌株中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ整合子/基因盒及超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)不同型別基因的分子流行病學進行了調查和分析。結果表明，其中Ⅰ型整合子的檢出率為36.8％，未檢出Ⅱ、Ⅲ型整合子。對Ⅰ型整合酶基因陽性菌株進行基因盒插入區(qū)擴增，并克隆測序，結果顯示,呼和浩特市周邊地區(qū)奶牛子宮內膜炎致病性大腸桿菌中有7種基因盒流行，分別編碼了對甲氧芐啶(dhfr,dfrA1，dfrA17,dfr2d)和氨基糖苷類藥物(aadA1、aadA2、aadA5

4、)的耐藥性。其中，基因盒排列dffA17-aadA5（69.1％)和dfrA1 aadA1(42.9％)流行最為廣泛。 通過分析57株大腸桿菌的耐藥表型和Ⅰ型整合子/基因盒分子流行病學特征發(fā)現，菌株是否攜帶Ⅰ型整合子與其多重耐藥水平有密切關系。整合子陽性菌株更趨于多重耐藥，且所攜帶的耐藥基因盒可解釋菌株對磺胺、甲氧芐啶、氨基糖苷類的耐受性，而菌株對β-內酰胺類、四環(huán)素類、氟喹諾酮類藥物的耐藥表型與其是否攜帶Ⅰ型整合子及耐藥基因盒

5、相關性不強。 本研究考察了不同型別ESBLs基因CTX、SHV和TEM在以上分離菌中的流行情況，結果發(fā)現TEM型基因最為流行，檢出率為77.2％，而未檢出其他兩種基因型別。通過分析blaTEM基因陽性菌株與陰性菌株對β-內酰胺類藥物的耐藥情況，發(fā)現質粒介導的ESBLs的產生和傳播是導致分離菌株對β-內酰胺類抗菌藥物耐藥的重要機制。從95.2％的Ⅰ型整合子陽性菌株質粒DNA上擴增出了TEM型ESBLs基因，此結果表明Ⅰ型整合子在產

6、ESBLs菌株中的廣泛分布，使耐藥基因更易于在細菌間快速散播。 隨后，采用PCR技術從11株耐氟喹諾酮類藥物的奶牛子宮內膜炎大腸桿菌中擴增了gyrA、parC、gyrB和parE基因的喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)，通過對PCR產物克隆測序，發(fā)現有4株菌GyrA亞基發(fā)生了Ser83→Leu、Asp87→Asn的氨基酸替代:11株菌GyrB亞基上均發(fā)生了Pro385→Ala；有2株耐藥菌的ParE亞基發(fā)生了Ser458→Ala氨基酸