煙草根結線蟲生防菌的篩選及其技術體系的建立.pdf

1、煙草是一種重要的經濟作物，煙草根結線蟲病是世界煙草生產上的重要病害之一。在我國大部分煙草種植區(qū)均有發(fā)生，且多個省市危害嚴重。由于生產上所種植的煙草品種抗性程度不夠，防治上仍然以化學藥劑為主要防控手段。長期使用化學農藥易導致根結線蟲抗（耐）藥性劇增、環(huán)境污染和煙葉重金屬含量超標等影響防治效果、生態(tài)平衡和人類健康等問題出現(xiàn)。為此，本文針對煙草根結線蟲病生防控制設計試驗，試驗內容主要是進行了拮抗菌株室內篩選及防效測定，拮抗菌溫室盆栽驗證以及拮

2、抗菌株對煙草根結線蟲發(fā)育進程影響的初步研究。通過本研究，從生防菌的初步篩選、拮抗菌對卵和二齡幼蟲的拮抗試驗、溫室盆栽控病試驗、同時調查統(tǒng)計根結線蟲在植株根內發(fā)育進程受拮抗菌的影響等幾個方面，建立一套較為系統(tǒng)、可行的根結線蟲生防菌篩選體系。本研究的主要結果如下:
　　1、煙草根結線蟲拮抗活性菌株初步篩選
　　分別利用實驗室保存經前人研究對煙草病害具有良好控病作用的的45株菌株進行煙草根結線蟲二齡幼蟲抑殺測定，得到有拮抗活性的菌

3、株13株，占待測菌總數的28.9％;其中真菌3株，細菌8株，放線菌2株。其中處理二齡幼蟲校正死亡率超過70％的菌株共3株，分別為哈茨木霉菌YZL229(77.0％)，熒光假單胞桿菌P-72-10(74.0％)，枯草芽孢桿菌Itb162(72.3％)，占待測菌總數的11.1％。
　　2、拮抗菌YZL229，P-72-10，Itb162對煙草根結線蟲卵和二齡幼蟲的拮抗試驗
　　通過初步篩選，分別選取對煙草根結線蟲具有良好拮抗作用

4、的哈茨木霉菌YZL229，熒光假單胞桿菌P-72-10，枯草芽孢桿菌Itb162對煙草根結線蟲卵和二齡幼蟲進行抑殺測定。結果表明，三種菌株不同濃度發(fā)酵液上清液均對煙草根結線蟲的卵表現(xiàn)出較好的抑制作用。處理120h后，菌株發(fā)酵液對煙草根結線蟲卵孵化的抑制作用從大到小為:YZL229＞P-72-10＞ Itb162。其中菌株YZL229發(fā)酵液原液抑制孵化作用最明顯，菌株Itb162發(fā)酵液5倍稀釋液抑制作用最小，但均與對照呈顯著性差異。同樣，

5、三種菌株不同濃度發(fā)酵液上清液均對煙草根結線蟲的二齡幼蟲表現(xiàn)出較好的抑制作用。處理48h后，菌株發(fā)酵液對根結線蟲二齡幼蟲的抑殺作用從大到小為: YZL229＞P-72-10＞ Itb162。其中菌株YZL229發(fā)酵液原液在處理48h后對二齡幼蟲的致死率高達94.7％，而菌株Itb162發(fā)酵液5倍稀釋液對二齡幼蟲的致死率為62.3％，均與對照具顯著性差異。另外，還，針對菌株YZL229對煙草根結線蟲卵作了寄生測定。結果表明，處理7d后菌株Y

6、ZL229對根結線蟲卵的寄生率高達73.4％，同時還發(fā)現(xiàn)該菌株對發(fā)育較成熟的卵具有較高的寄生率，而對未發(fā)育成熟的卵寄生率較低。
　　3、拮抗菌株對煙草根結線蟲病的溫室盆栽試驗
　　選擇拮抗試驗中對煙草根結線蟲具有良好拮抗作用的哈茨木霉菌YZL229，熒光假單胞桿菌P-72-10，枯草芽孢桿菌Itb162對煙草根結線蟲進行溫室盆栽試驗。用灌根法先接種拮抗菌菌懸液14d后，再接種二齡幼蟲，接種二齡幼蟲60d后對煙草植株進行調查。

7、試驗結果表明，菌株YZL229，P-72-10和Itb162均對煙草根結線蟲侵染有不同程度的抑制作用。三種拮抗菌均能不同程度的減小寄主植株的GI(egg index)和EMI(egg mass index)，均能不同程度的增加寄主植株的生長指數（葉片長度，根長，葉面積），均能增加寄主植株的干重和鮮重，同時也能減少寄主根圍線蟲密度和減少煙草根結線蟲的產卵量。其中菌株YZL229具有三者之中最好的拮抗效果，其效果由大到小依次為:YZL229

8、＞P-72-10＞ Itb162，三者均與發(fā)病對照具有顯著性的差異，均展現(xiàn)了良好的生防潛力。
　　4、熒光假單胞桿菌P-72-10對煙草根結線蟲發(fā)育進程的影響
　　選擇經前人研究能定殖于煙草根表且對煙草根結線蟲具有良好拮抗作用的熒光假單胞桿菌P-72-10菌株進行盆栽試驗，分別于接種二齡幼蟲后二齡幼蟲侵染和不同時間段不同齡期對線蟲發(fā)育進程進行調查，以直觀的說明拮抗菌株P-72-10對煙草根結線蟲發(fā)育進程的影響，從而驗證其生防

9、潛力。試驗結果表明，接種二齡幼蟲后第2d，4d，6d，8d，10d二齡幼蟲侵染煙草植株數量逐漸增大，但經菌株P-72-10處理過的侵染率除第4d外均顯著低于對照。接種后第10d對侵染的煙株進行移栽，在接種二齡幼蟲第14d，21d，28d和35d對煙草植株根系內線蟲進行調查統(tǒng)計。結果表明，經菌株P-72-10處理的煙株根系內的根結線蟲與對照相比其發(fā)育進程受到了顯著的抑制和延緩，這表明拮抗菌P-72-10能在整個根結線蟲生活史時段中有效的抑

10、制根結線蟲的發(fā)育進程和繁殖，具有良好的生防潛力。
　　5、建立一套較為系統(tǒng)、可行的煙草根結線蟲生防菌篩選技術體系
　　本研究利用初步篩選出的三株菌株從其對煙草根結線蟲卵和二齡幼蟲的抑制試驗、溫室控病試驗，對侵染煙株不同發(fā)育進程根結線蟲的影響三個不同角度充分驗證了三種拮抗菌株對煙草根結線蟲的生防潛力，建立起一套較系統(tǒng)、可行的煙草根結線蟲生防菌篩選技術體系。在對煙草根結線蟲卵和二齡幼蟲的抑制試驗中，針對可能對根結線蟲卵和二齡幼蟲

11、具有寄生能力的真菌菌株進行了卵和二齡幼蟲的寄生測定，同時利用三株拮抗菌株不同濃度發(fā)酵液上清液分別對卵進行孵化抑制試驗和對二齡幼蟲進行抑殺試驗，同時觀察統(tǒng)計二齡幼蟲在不同濃度發(fā)酵液上清液中的行為特征，充分驗證三株拮抗菌株的抑制效果;在溫室盆栽控病試驗中，利用三株菌株菌懸液對煙株進行灌根處理，調查其根結指數(GI)和卵塊指數(EMI)及單位土壤中線蟲數量，并從煙株的生長指數等方面充分說明菌株的控病能力;在進行三株菌株對侵染煙株后不同發(fā)育進程