6種木本植物耐鹽性研究【開題報告+文獻綜述+畢業(yè)設計】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開題報告</b></p><p><b>　　生物技術</b></p><p>　　6種木本植物耐鹽性研究</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><p>　　

2、植物對土壤鹽度的反應因樹種而異，即使同一種內(nèi)，也存在著明顯差異。植物的耐鹽性是指在鹽脅迫下維持生長、形成經(jīng)濟產(chǎn)量或完成生活史的能力。植物耐鹽能力評價是耐鹽植物引種、育種和篩選的基礎，是植物形態(tài)適應和生理適應的綜合體現(xiàn)。</p><p>　　土壤鹽漬化是一個世界性的資源與生態(tài)問題，據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織和教科文組織統(tǒng)計，全球有各種鹽漬化土地約10億hm2，占全球陸地面積的10%，廣泛分布于100多個國家和地區(qū)。我國各種類

3、型的鹽漬土總面積為14.87億畝。其中，現(xiàn)代鹽漬化土壤約5.54億畝；殘余鹽漬化土壤約6.73億畝；潛在鹽漬化土壤約為2.6億畝。我國沿海各省、市、自治區(qū)約18，000km的濱海地帶和島嶼沿岸，廣泛分布著各種濱海鹽土，總面積可達5×106hm2，主要包括長江以北的山東、河北、遼寧等省和江蘇北部的海濱沖積平原及長江以南的浙江、福建、廣東等省沿海一帶的部分地區(qū)。隨著國民經(jīng)濟和社會的迅速發(fā)展，人口增長與耕地減少的矛盾日益突出，各類鹽

4、土資源，特別是我國海岸帶鹽土作為一種重要的土地后備資源，亟待我們?nèi)ラ_發(fā)、利用和保護。</p><p>　　國內(nèi)外研究已經(jīng)證明，利用生物措施對鹽堿地進行改良是緩解土壤鹽漬化問題。最切實可行的辦法。培育和引種能適應高鹽環(huán)境的優(yōu)良耐鹽堿植物對改善我國廣大濱海及內(nèi)陸鹽堿地生態(tài)系統(tǒng)，豐富鹽堿地景觀，增加樹種多樣性，提高土地生產(chǎn)力，增加經(jīng)濟收益無疑具有現(xiàn)實而深遠的意義。引進國外優(yōu)良耐鹽堿樹種及配套栽培技術，不失為一條迅速提升

5、我國沿海防護林建設和鹽堿地治理水平的有效途徑，一方面可以提高沿海防護林的生態(tài)穩(wěn)定性、防護功能和綜合效應，另一方面還能改善沿海發(fā)達地區(qū)的生態(tài)環(huán)境和投資環(huán)境，為我國東部沿海發(fā)達地區(qū)率先實現(xiàn)農(nóng)業(yè)和林業(yè)現(xiàn)代化提供重要保障。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p>　　(1)研究的基本內(nèi)容：</p><p>　　1、鹽脅迫下6個樹種的生長情

6、況：</p><p>　　測定6種植物在鹽脅迫處理后的存活率、株高及形態(tài)變化情況</p><p>　　2、鹽脅迫下6個樹種的生理變化：</p><p>　　測定6種植物在鹽脅迫處理后脯氨酸，葉綠素，可溶性糖，丙二醛含量以及電導率等相關生理生化指標的變化情況。</p><p>　　(2)擬解決的主要問題：</p><p>

7、;　　五種生理指標數(shù)據(jù)的協(xié)調(diào)</p><p>　　三、研究的方法與技術路線：</p><p><b>　　1.實驗材料</b></p><p>　　①銀河梾木②美國白蠟③東方杉④加拿大紫荊⑤美國鵝掌楸⑥美國薄殼山核桃</p><p><b>　　實驗設計</b></p><p&g

8、t;　　將幼苗移栽到15cm直徑的塑料花盆中培育2周，栽培基質(zhì)用泥炭：蛭石：珍珠巖1:1:1。并采用鹽溶液（NaCl）進行脅迫，濃度梯度分別為0.0%；0.3%；0.5%；1.0%，每種物種每種處理10株苗（每種4個處理共40株苗）。為了防止鹽激反應，按1/4、1/2、1/1鹽濃度逐漸遞增，每2d定時定量(1L/盆)澆灌溶液1次，分別于脅迫初期（2周）、脅迫中期（4周）、脅迫后期（6周）、脅迫末期（7周）進行隨機采樣測定。</p&

9、gt;<p><b>　　3.測定指標</b></p><p><b>　?。?）電解質(zhì)滲出率</b></p><p>　　在脅迫中，膜系統(tǒng)常常受到傷害，從而使膜質(zhì)受損傷，透性加大，細胞內(nèi)離子外滲量增多，電導率加大。因此可以用電導儀測定溶液的電導率，求算電解質(zhì)滲出率（或稱傷害率）。傷害率愈高則抗性越小，反之則抗性較大。剪碎葉片，分別

10、測定浸泡十小時的浸泡液和煮沸后的浸泡液的電解質(zhì)滲出率。</p><p><b>　　葉綠素含量</b></p><p>　　葉綠素是植物的光合色素，葉綠體色素在光能吸收、傳遞和轉(zhuǎn)換過程中都起著重要作用，其含量對葉片光合性能有較大的影響，葉片葉綠素含量的消長規(guī)律是反映葉片生理活性變化的重要指標之一，與葉片光合機能大小具有密切關系。</p><p>

11、;　　用丙酮提取樣品中的葉綠素，用分光光度計測定。</p><p><b>　　丙二醛含量</b></p><p>　　植物在逆境或衰老條件下，會發(fā)生膜質(zhì)的過氧化作用。丙二醛（MDA）是膜質(zhì)過氧化產(chǎn)物之一，其濃度表示膜質(zhì)過氧化強度和膜系統(tǒng)傷害程度，所以是逆境生理指標。丙二醛在酸性和高溫條件，可以和硫代巴比妥（TBA）反應生成紅棕色的三甲川，在532nm具有最大光吸收。

12、</p><p><b>　　葉片游離脯氨酸含量</b></p><p>　　脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，具有很強的水合能力，其水溶液具有很高的水勢。脯氨酸的疏水端可和蛋白質(zhì)結合，親水端可與水分子結合，蛋白質(zhì)可借助脯氨酸束縛更多的水，從而防止?jié)B透脅迫條件下蛋白質(zhì)的脫水變性。因此脯氨酸在植物的滲透調(diào)節(jié)中起重要作用，而且即使在含水量很低的細胞內(nèi)，脯氨酸仍能提供足夠的自由水

13、，以維持正常的生命活動。正常情況下，植物體內(nèi)脯氨酸含量并不高，但遭受水分、鹽分等脅迫時體內(nèi)的脯氨酸含量往往增加，它在一定程度上反映植物受環(huán)境水分和鹽度脅迫的情況，以及植物對水分和鹽分脅迫的忍耐及抵抗能力。</p><p>　　當用磺基水楊酸提取植物樣品時，脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加熱處理后，溶液即成紅色，再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中。色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm

14、波長下比色測定吸光度，從標準曲線上查出脯氨酸含量。</p><p><b>　　可溶性糖含量</b></p><p>　　植物體內(nèi)的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10－100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故

15、可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上。</p><p><b>　　技術路線</b></p><p>　　四、研究的總體安排與進度：</p><p>　　2010年11月—2010年12月：</p><p&

16、gt;　　1、實驗前的準備工作：查找資料，寫開題報告和論文綜述；</p><p>　　2、儀器和實驗材料的準備。</p><p><b>　　3、進行預試驗。</b></p><p>　　2011年1月—2011年3月：</p><p><b>　　1、進入實驗階段</b></p>&

17、lt;p><b>　　2、翻譯外文文獻</b></p><p>　　3、分析相關數(shù)據(jù)，整理試驗結果；補充完善相關實驗。</p><p>　　2011年4月-2011年5月：</p><p><b>　　撰寫論文；</b></p><p><b>　　2、答辯 。</b>&

18、lt;/p><p><b>　　主要參考文獻：</b></p><p>　　[1] 查霞娟，孫嵐，肖崇彬，等.蘋果砧木耐鹽性比較試驗[J].中國果樹，1986，(2)：5～9.</p><p>　　[2] 陳國雄，李志淑，張志謙，等.鹽脅迫對多年生黑麥草和草地早熟禾種子萌發(fā)影響的對比研究[J].草業(yè)科學，13(3)：41～44.</p>

19、<p>　　[3] 陳竹生，聶華堂，計玉，等.柑橘種質(zhì)的耐鹽性鑒定[J].園藝學報，1992，19(4)：289～295.</p><p>　　[4] 董曉霞，趙樹慧，孔令安，等.葦狀羊茅鹽脅迫下生理效應的研究[J].草業(yè)科學，15(5)：10～13. </p><p>　　[5] 康俊水，張淑英，黃勝強等.濱海鹽堿地庭院綠化技術研究[J].山東林業(yè)科技，1997，(6)：9

20、～13.</p><p>　　[6] 李瑞云，魯純養(yǎng)，凌禮章.植物耐鹽性研究現(xiàn)狀與展望[J].鹽堿地利用，1989，(1)：38～41. </p><p>　　[7] 李艷華，楊敏生，王海英等.樹木抗鹽生理研究進展[J].河北林果研究，2000，15（2）：189～196.</p><p>　　[8] 劉友良，汪良駒.植物對鹽脅迫的反應和耐鹽性[J].余叔文，湯章城

21、.植物生理與分子生物學.北京：科學技 術出版社，1998.752～769.</p><p>　　[9] 劉友良、毛才良、汪良駒.植物耐鹽性研究進展[J]，植物生理學通訊，1987，(4)：1～7.</p><p>　　[10] 劉祖祺，張石誠.植物抗性生理學[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，1994</p><p>　　[11] 馬建華，鄭海雷，趙中秋.植物抗鹽機理研究進展[

22、J].生命科學研究，2001，5（3）：175～179.</p><p>　　[12] 牛菊蘭.早熟禾品種特性與耐鹽性關系的研究[J].草業(yè)科學，1998，15(1)：38～41.</p><p>　　[13] 張川紅，沈應柏，尹偉倫.鹽脅迫對幾種苗木生長及光合作用的影響[J].林業(yè)科學，2002，38(2): 27～31.</p><p>　　[14] 閻秀峰，孫

23、國榮，李景信，等.我國耐鹽牧草的研究現(xiàn)狀[J].中國草地，1994，(3)：68～72.</p><p>　　[15] 徐恒剛，張萍，李臨杭，等.對牧草耐鹽性測定方法及其評價指標的探討[J].中國草地，1997，(5)：52～54.</p><p>　　[16] 王業(yè)遴，馬凱，姜衛(wèi)兵等.五種果樹耐鹽力初報[J].中國果樹，1990，(3)：8～12.</p><p>

24、;　　[17] 王洪春.植物抗性生理[J].植物生理學通訊,1981（6）：72～81.</p><p>　　[18] 王寶山，趙可夫，鄒琦.作物耐鹽機理研究進展及提高作物抗鹽性的對策[J].植物學通報，1997，14（增刊）：25～30.</p><p>　　[19] 李樹華，許興，惠紅霞，等.不同小麥品種（系）對鹽堿脅迫的生理及農(nóng)藝性狀反應[J].麥類作物學報,2000,20(4):6

25、3～67.</p><p>　　[20] Corney HJ,Sasse JM Ades PK.Assessment of salt tolerance in eucalypts using chlorophyll fluorescence attributes[J].New Forests,2003,26(3):233～246.</p><p>　　[21] Shannon MC,Rho

26、ades JD,Draper JH,et al.Assessment of salt tolerance in rice cultivars in response to salinity problems in California[J].Crop Science,1998,38,(2):394～398.</p><p>　　[22] Ruiz Dionisio,Martinez Vicente,Cerda A

27、ntonio.Citrus response to salinity:growth and nutrient uptake[J].Tree Physiology,1997,17:141～150.</p><p>　　[23] Balsamo，RA，Thomson，WW.，Ultrastructural features associated with secretion in the salt glands of

28、 Frankenia grandifolia and Avicennia germinans[J].American Journal.Of Botany，1993，80(11)：1276～1283.</p><p>　　[24] Bohnert HT et al.Environmental Stress in plant.Plant physiol[J]，1981，68：673～675.</p>&

29、lt;p>　　[25] Carter DR，Cheese man JM.The effect of external Nacl on thtlakoid stacking in lettuce plants[J].Plant Cell Envion，1993，16：215～223.</p><p><b>　　畢業(yè)論文文獻綜述</b></p><p><b

30、>　　生物技術</b></p><p><b>　　植物鹽脅迫研究現(xiàn)狀</b></p><p>　　摘要：鹽分是影響植物生長發(fā)育的重要環(huán)境因素之一。該文綜述了鹽脅迫對植物形態(tài)結構特征、生長狀況、生理生化反應等方面的影響。目前植物鹽脅迫適應機制的研究取得了一定的進展，但仍有待于進一步深入研究。</p><p>　　關鍵詞：鹽脅迫

31、 抗鹽性 生理生態(tài) 形態(tài)結構</p><p><b>　　1前言</b></p><p>　　目前全世界約有100多個國家57億畝土地受鹽堿化影響，約占陸地面積的三分之一。我國鹽漬化土地近1億hm2，同時我國沿海灘涂鹽漬土面積近2×l06hm2。還有因長期的低標準田間灌溉導致泥質(zhì)濱海區(qū)域幾乎整體次生鹽漬化，地力日趨衰退。因此，沿海大面積土壤的鹽漬化和內(nèi)

32、陸干旱、半干旱地區(qū)因強烈的地表蒸發(fā)造成的土地鹽漬化及不適當灌溉造成大面積土壤的次生鹽漬化，已經(jīng)成為制約農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境建設的嚴峻問題。在人類社會現(xiàn)代化進程不斷加快、人口數(shù)量不斷增加、耕地面積日趨減少和淡水資源嚴重不足的巨大壓力下，如何開發(fā)利用如此大面積的鹽堿地已成為世界性問題[1]。</p><p>　　因此，研究林木耐鹽性機理，培育耐鹽性材料，改善鹽堿地區(qū)生態(tài)環(huán)境并解決沿海等城市綠化建設等問題，具有十分重要

33、的理論和現(xiàn)實意義。</p><p><b>　　2植物耐鹽研究</b></p><p>　　土壤鹽漬化不同程度地影響了植物的正常生長，造成了經(jīng)濟和生態(tài)效益的巨大損失。國內(nèi)外有關植物對鹽脅迫的生理響應以及它們與耐鹽能力關系等方面的研究報道很多。植物對鹽的反應受許多因素的影響：①鹽脅迫的強度（輕度、中度、重度）及時間；②物種、品種、植物器官；③植物生長發(fā)育的階段[2]。&

34、lt;/p><p>　　2.1鹽脅迫對植物生長的影響研究</p><p>　　鹽分對植物最普遍最顯著的效應是抑制生長，影響種子出苗率、成苗率、苗木生長量及嫁接成活率，其對根的影響超過對枝干的影響。當植物被轉(zhuǎn)移到鹽逆境中幾分鐘后，生長速率即有所下降，其下降程度與根際滲透壓成正比[3]。Yeo等發(fā)現(xiàn)鹽脅迫下植物的生長受阻早于光合下降[4]。一些長期試驗的結果表明生長的減少量大于光合的下降量。因此，

35、許多研究者認為鹽脅迫下造成生長下降的原因是葉片面積減少造成光合面積減少，導致同化產(chǎn)物的供應不足，而非光合速率下降所致[5]。目前，關于鹽分對植物生長發(fā)育造成的影響主要有三種解釋：①鹽土中低水勢引起植物水勢下降，導致氣孔導度下降是鹽影響多種生理生化過程的根本原因；②鹽害降低光合作用速率，減少同化率與能量的供給，從而限制了作物生長發(fā)育；③鹽害影響某些特定的酶和代謝過程[6]。</p><p>　　2.2鹽脅迫對植物生

36、理的影響研究</p><p>　　2.2.1鹽脅迫對植物光合作用的影響</p><p>　　一般來講，鹽脅迫對植物（尤其是鹽生植物）的光合作用具有抑制作用，而且隨外界鹽濃度的提高，被抑制的程度也越大[7]。但鹽脅迫對光合作用的具體途徑至今還沒有統(tǒng)一認識：一種觀點認為鹽脅迫主要是由于Na+和Cl-引起的；另一種觀點認為鹽脅迫中滲透因素起著重要作用；還有研究者認為鹽脅迫則是個兩相過程，短期脅迫

37、主要是非NaCl特異性的滲透脅迫，長期脅迫則是NaCl特異性離子傷害[8]。在短期鹽脅迫下，植物葉片葉綠體膜蛋白含量下降，氣孔導度下降；在較長期鹽脅迫下，葉肉導度和光合面積下降是植物生長受抑制的主要原因，即光合速率的下降是由非氣孔作用——葉肉阻力增加造成的，而葉肉阻力增加源于離子濃度的增加。因此，鹽脅迫下光合速率下降，是氣孔效應還是非氣孔效應，許多相關試驗結果沒有統(tǒng)一結論，但是許多實驗證明鹽脅迫下，氣孔發(fā)生“非”均勻關閉[9]。<

38、/p><p>　　2.2.2鹽脅迫對呼吸作用的影響</p><p>　　在鹽化條件下，植物為了逆著電化學梯度汲取離子和維持生命，需要更多的能量。這種能量看來是由于呼吸作用的增大，也可能直接從光和磷酸化來供應。這種呼吸作用的增大和直接來自光合作用的能量與O2的固定和整個植株生長的減小有關[10]。在很高的鹽度水平上，呼吸作用是減少的。這種效應在對鹽敏感的植物中更顯著，其結果是在需要能量最大的時候

39、維持此時生命所需能量供應不足。</p><p>　　2.2.3鹽脅迫對生物膜的影響</p><p>　　Lyons(1973年)的“質(zhì)膜傷害學說”認為鹽分脅迫對植物的傷害作用主要是離子脅迫致使植物細胞質(zhì)膜損傷，使其選擇性遭到破壞，胞內(nèi)大量離子和某些有機物質(zhì)外滲，外界有毒鹽離子進入，導致細胞內(nèi)的一系列生理生化過程受到干擾[11]。大量研究表明，植物在逆境脅迫中，體內(nèi)自由基代謝平衡被打破而出現(xiàn)

40、自由基（O2-、OH、H2O2等）的累積，積累的活性氧直接攻擊膜系統(tǒng)中不飽和脂肪酸，導致膜脂過氧化的發(fā)生，膜脂過氧化產(chǎn)物MDA含量增加，膜脂組分發(fā)生變化[12]。膜脂組分的變化破壞了膜的結構，使膜的流動性下降，生物膜的結構和功能遭到破壞或損傷，進而引起一系列生理生化功能的改變。</p><p>　　2.2.4鹽脅迫對酶系統(tǒng)的影響</p><p>　　SOD、CAT、POD是植物體內(nèi)的保護酶

41、系統(tǒng)，它們相互協(xié)調(diào)，共同作用清除活性氧，降低膜脂過氧化所產(chǎn)生的MDA，從而保護膜系統(tǒng)不受破壞[13]。但植物細胞內(nèi)許多酶只能在很窄的離子濃度范圍才具有活性，對于K+離子而言是0.1－0.2M，對于Na+和Cl-離子則要求低于50mM。在鹽脅迫下由于植物攝取了過量的Na+、K+、Cl-等離子，導致細胞內(nèi)離子濃度過高，細胞質(zhì)中高濃度的陽離子抑制了酶蛋白的合成，植物體內(nèi)主要的清除酶類（SOD、POD、CAT）的含量會明顯下降。同時，在植物體內(nèi)

42、過多的Na+會使代謝中的酶形成無活性的蛋白結構而毒害植物[14]。</p><p>　　2.3植物抗/耐鹽機制研究</p><p>　　植物的抗鹽/耐鹽機制是一個相當復雜的問題，植物在長期的進化過程中形成了各種各樣的適鹽、耐鹽機制。</p><p>　　2.3.1形態(tài)結構的適應性</p><p>　　植物由于受外界環(huán)境因素的影響，逐漸演化出各

43、種各樣的形態(tài)結構來適應賴以生存的生長環(huán)境。植株矮小、干硬、根冠比大是長期生長于鹽漬環(huán)境中的植物最顯著的特征，這些有利于植物廣泛吸收土壤中的水分[15]。葉片變小或肉質(zhì)化也是植物對鹽脅迫的適應性表現(xiàn)，肉質(zhì)化（succulence）是許多耐鹽植物采用的耐鹽機制。胡楊葉片在鹽脅迫下發(fā)生肉質(zhì)化，這也是胡楊的一種耐鹽機理，即胡楊通過降低單位重量的葉面積，一方面可以降低葉面積的蒸騰速率，從而減少由質(zhì)流（mass flow）引起的離子累積，另一方面通

44、過肉質(zhì)化還可以起到稀釋鹽分濃度的作用[16]。有些植物莖、葉片中含有單晶細胞和單寧細胞，電鏡的出現(xiàn)，將鹽漬對植物影響的研究深入到超微結構水平，葉綠體在鹽脅迫下出現(xiàn)較多的脂質(zhì)小球和淀粉粒。鹽腺作為一些鹽地植物的特有結構，受到耐鹽研究者的普遍關注，不少學者從外部形態(tài)、顯微結構、超微結構以及生理特性等不同水平對諸多植物的鹽腺或腺體進行了觀察研究[17]。</p><p>　　2.3.2內(nèi)部物質(zhì)的滲透調(diào)節(jié)</p&g

45、t;<p>　　在鹽脅迫下，植物細胞通過滲透調(diào)節(jié)降低胞內(nèi)水勢，使水分的跨膜運輸朝著有利于細胞生長的方向流動。參與細胞內(nèi)滲透調(diào)節(jié)的物質(zhì)有兩類：外來的無機離子和細胞內(nèi)合成的有機親和物質(zhì)[18]。滲透調(diào)節(jié)一般由無機離子和親和的有機親和物質(zhì)共同參與。無機離子和有機小分子再細胞質(zhì)中和液泡中都有分布，只是無機離子主要集中在液泡內(nèi)以減少對細胞器的傷害，合成的有機物質(zhì)主要集中在細胞質(zhì)中。從植株整體水平或整個細胞角度來看，有機物質(zhì)在滲透調(diào)節(jié)

46、中的比重比無機離子小得多，但它們的作用</p><p>　　不容忽視。鹽生植物主要以無機離子調(diào)節(jié)，非鹽植物以合成有機親和物質(zhì)為主。有機物質(zhì)和無機離子協(xié)同作用，保證了一系列生理活動的需要[19]。</p><p>　　2.3.3離子區(qū)域化</p><p>　　植物吸收的Na+、Cl-等離子必須積累在液泡中，否則會干擾細胞質(zhì)和葉綠體等的生理生化代謝過程，這種作用稱之為離

47、子區(qū)域化作用[20]。Fung等用X－射線微區(qū)分析的方法發(fā)現(xiàn)鹽處理的胡楊根細胞內(nèi)產(chǎn)生大量富含Cl-的小液泡，這種小液泡可以對Cl-起區(qū)隔和儲存作用，減少Cl-向地上部分的運輸[21]。王艷青等也發(fā)現(xiàn)刺槐根皮層細胞對Na+和Cl-具有一定的區(qū)隔化作用[22]。陳少良等認為胡楊耐鹽性強的重要基礎是在鹽脅迫下胡楊具有較高的拒鹽性和離子選擇性，并能將鹽離子區(qū)隔于液泡[23]。Na+在根部積累，可以減輕對代謝旺盛部位的干擾作用，同時可以使植物利用

48、這些積累在根部的鹽離子進行滲透調(diào)節(jié)，降低植物的水勢，保持植物吸收水分的能力，以減少造成生理干旱，這可能是植物適應鹽害的一種機制[24]。</p><p>　　2.3.4植物的拒鹽作用</p><p>　　降低地上部分鹽分的濃度是植物耐鹽的重要機理之一，植物拒鹽是緩解鹽脅迫的重要方式。根系是Na+、Cl-等離子進入植物體內(nèi)的重要屏障，根系對離子有選擇吸收的功能。尤其是對Na+、K+的選擇吸收

49、，有關調(diào)控Na+、K+選擇吸收的基因已經(jīng)找到一些，轉(zhuǎn)基因表明重組體對離子吸收的能力提高的同時，耐鹽能力也得到增強[25]。由于內(nèi)皮層凱氏帶栓化，阻止離子在質(zhì)外體的運輸，離子在共質(zhì)體中運輸，運輸受表皮、皮層或內(nèi)皮層細胞膜的控制。</p><p><b>　　3展望</b></p><p>　　目前，有關鹽脅迫對植物影響的研究已取得了相當大的進展，但植物的耐鹽性是植物體內(nèi)

50、一系列因素綜合作用的結果，受相關的多個基因調(diào)控，并受到外界環(huán)境因子的影響或制約，因此，許多重要問題還有待深入探索研究。各項生理相關研究必須結合植物自身結構特點和環(huán)境因素才能準確地綜合評價植物的耐鹽性。相信隨著對植物鹽適應生理生化研究的深入，并結合日益發(fā)展的基因工程手段，將會進一步揭示植物耐鹽性機制的本質(zhì)，這必將為今后培育抗鹽作物提供充分的理論指導。</p><p><b>　　參考文獻</b>

51、;</p><p>　　[1] 查霞娟，孫嵐，肖崇彬，等.蘋果砧木耐鹽性比較試驗[J].中國果樹，1986，(2)：5～9.</p><p>　　[2] 陳國雄，李志淑，張志謙，等.鹽脅迫對多年生黑麥草和草地早熟禾種子萌發(fā)影響的對比研究[J].草業(yè)科學，13(3)：41～44.</p><p>　　[3] 陳竹生，聶華堂，計玉，等.柑橘種質(zhì)的耐鹽性鑒定[J].園藝學

52、報，1992，19(4)：289～295.</p><p>　　[4] 董曉霞，趙樹慧，孔令安，等.葦狀羊茅鹽脅迫下生理效應的研究[J].草業(yè)科學，15(5)：10～13. </p><p>　　[5] 康俊水，張淑英，黃勝強等.濱海鹽堿地庭院綠化技術研究[J].山東林業(yè)科技，1997，(6)：9～13.</p><p>　　[6] 李瑞云，魯純養(yǎng)，凌禮章.植物耐鹽

53、性研究現(xiàn)狀與展望[J].鹽堿地利用，1989，(1)：38～41. </p><p>　　[7] 李艷華，楊敏生，王海英等.樹木抗鹽生理研究進展[J].河北林果研究，2000，15（2）：189～196.</p><p>　　[8] 劉友良，汪良駒.植物對鹽脅迫的反應和耐鹽性[J].余叔文，湯章城.植物生理與分子生物學.北京：科學技 術出版社，1998.752～769.</p>

54、<p>　　[9] 劉友良、毛才良、汪良駒.植物耐鹽性研究進展[J]，植物生理學通訊，1987，(4)：1～7.</p><p>　　[10] 劉祖祺，張石誠.植物抗性生理學[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，1994</p><p>　　[11] 馬建華，鄭海雷，趙中秋.植物抗鹽機理研究進展[J].生命科學研究，2001，5（3）：175～179.</p><p&g

55、t;　　[12] 牛菊蘭.早熟禾品種特性與耐鹽性關系的研究[J].草業(yè)科學，1998，15(1)：38～41.</p><p>　　[13] 張川紅，沈應柏，尹偉倫.鹽脅迫對幾種苗木生長及光合作用的影響[J].林業(yè)科學，2002，38(2): 27～31.</p><p>　　[14] 閻秀峰，孫國榮，李景信，等.我國耐鹽牧草的研究現(xiàn)狀[J].中國草地，1994，(3)：68～72.<

56、;/p><p>　　[15] 徐恒剛，張萍，李臨杭，等.對牧草耐鹽性測定方法及其評價指標的探討[J].中國草地，1997，(5)：52～54.</p><p>　　[16] 王業(yè)遴，馬凱，姜衛(wèi)兵等.五種果樹耐鹽力初報[J].中國果樹，1990，(3)：8～12.</p><p>　　[17] 王洪春.植物抗性生理[J].植物生理學通訊,1981（6）：72～81.<

57、;/p><p>　　[18] 王寶山，趙可夫，鄒琦.作物耐鹽機理研究進展及提高作物抗鹽性的對策[J].植物學通報，1997，14（增刊）：25～30.</p><p>　　[19] 李樹華，許興，惠紅霞，等.不同小麥品種（系）對鹽堿脅迫的生理及農(nóng)藝性狀反應[J].麥類作物學報,2000,20(4):63～67.</p><p>　　[20] Corney HJ,Sass

58、e JM Ades PK.Assessment of salt tolerance in eucalypts using chlorophyll fluorescence attributes[J].New Forests,2003,26(3):233～246.</p><p>　　[21] Shannon MC,Rhoades JD,Draper JH,et al.Assessment of salt tole

59、rance in rice cultivars in response to salinity problems in California[J].Crop Science,1998,38,(2):394～398.</p><p>　　[22] Ruiz Dionisio,Martinez Vicente,Cerda Antonio.Citrus response to salinity:growth and n

60、utrient uptake[J].Tree Physiology,1997,17:141～150.</p><p>　　[23] Balsamo，RA，Thomson，WW.，Ultrastructural features associated with secretion in the salt glands of Frankenia grandifolia and Avicennia germinans[

61、J].American Journal.Of Botany，1993，80(11)：1276～1283.</p><p>　　[24] Bohnert HT et al.Environmental Stress in plant.Plant physiol[J]，1981，68：673～675.</p><p>　　[25] Carter DR，Cheese man JM.The effe

62、ct of external Nacl on thtlakoid stacking in lettuce plants[J].Plant Cell Envion，1993，16：215～223.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設計</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　6種

63、木本植物耐鹽性研究</p><p><b>　　摘要</b></p><p>　　【摘要】在鹽脅迫條件下，通過對梾木（Cornus macrophylla）、美國白蠟（Fraxinus americana）、東方杉（Taxodium mucronatum ×Cryptomeria fortunei）、加拿大紫荊（Cercis Canadensis）、薄殼山核

64、桃（Liriodendron　tulivifera）、美國鵝掌楸（Carayaillinoensis）6種木本植物2年生幼苗鹽害癥狀的觀察以及對相對電導率、葉綠素、游離脯氨酸、可溶性糖、丙二醛等生理指標的測定，比較了6種樹種的抗鹽能力。結果表明，在鹽脅迫條件下，6種樹種幼苗的抗鹽能力強弱為：梾木>美國白蠟>東方杉>加拿大紫荊>薄殼山核桃>美國鵝掌楸。</p><p>　　【關鍵詞】木

65、本植物；形態(tài)生長；生理指標；耐鹽性評價</p><p><b>　　Abstract</b></p><p>　　【Abstract】Under salt stress, by Cornus macrophylla, Fraxinus americana, Taxodium mucronatum × Cryptomeria fortunei, Cercis

66、Canadensis, Liriodendron tulivifera, Carayaillinoensis 6 2 year old seedlings of woody species of salt injury symptoms observed and the relative conductivity, chlorophyll, free proline, soluble sugar, and other physiolog

67、ical indicators MDA determination, compared the ability of 6 species in the salt.The results showed that under salt stress, seedlings of 6 species in salt st</p><p>　　【Key words】Woody plants； morphology Grow

68、th； physiological indicators； salt tolerance evaluation</p><p><b>　　目錄</b></p><p>　　1 引言..................................................................4</p><p>　　2 材料

69、與方法............................................................4</p><p>　　2.1 實驗材料與實驗設計..............................................4</p><p>　　2.1.1 實驗材料........................................

70、..........4</p><p>　　2.1.2 實驗設計..................................................6</p><p>　　2.2 測定方法........................................................6</p><p>　　2.2.1 電解質(zhì)滲出率的測

71、定........................................6</p><p>　　2.2.2 葉綠素含量的測定..........................................7</p><p>　　2.2.3 丙二醛含量測定............................................7</p><p

72、>　　2.2.4 葉片游離脯氨酸含量的測定..................................8</p><p>　　2.2.5 可溶性糖含量測定..........................................9</p><p>　　2.2.6 鹽脅迫危害調(diào)查...........................................10

73、</p><p>　　3 結果與分析...........................................................10</p><p>　　3.1 鹽脅迫對6種樹種形態(tài)生長的影響.................................10</p><p>　　3.2 鹽脅迫對6種樹種生理指標的影響..........

74、.......................11</p><p>　　3.2.1 不同濃度鹽脅迫對供試樹種電解質(zhì)滲出率的影響...............11</p><p>　　3.2.2 不同濃度鹽脅迫對供試樹種葉綠素含量的影響.................12</p><p>　　3.2.3 不同濃度鹽脅迫對供試樹種丙二醛含量的影響...........

75、......13</p><p>　　3.2.4 不同濃度鹽脅迫對供試樹種脯氨酸含量的影響.................14</p><p>　　3.2.5 不同濃度鹽脅迫對供試樹種可溶性糖含量的影響...............15</p><p>　　3.2.6 各樹種耐鹽性綜合評價.....................................1

76、6</p><p>　　4 結論與討論...........................................................17</p><p>　　參考文獻...............................................................20</p><p>　　致謝...........

77、........................................................22</p><p><b>　　1 引言</b></p><p>　　目前全世界約有100多個國家57億畝土地受鹽堿化影響，約占陸地面積的三分之一。我國鹽漬化土地近1億hm2，同時我國沿海灘涂鹽漬土面積近2×l06hm2。還有因長期的低標準田間灌

78、溉導致泥質(zhì)濱海區(qū)域幾乎整體次生鹽漬化，地力日趨衰退。因此，沿海大面積土壤的鹽漬化和內(nèi)陸干旱、半干旱地區(qū)因強烈的地表蒸發(fā)造成的土地鹽漬化及不適當灌溉造成大面積土壤的次生鹽漬化，已經(jīng)成為制約農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境建設的嚴峻問題[1]。在人類社會現(xiàn)代化進程不斷加快、人口數(shù)量不斷增加、耕地面積日趨減少和淡水資源嚴重不足的巨大壓力下，如何開發(fā)利用如此大面積的鹽堿地已成為世界性問題。</p><p>　　從十九世紀初開始,植物

79、耐鹽性的研究逐漸受到人們的重視。Harvery于 1939年討論植物耐鹽性時,只收集到了當時9篇研究植物耐鹽方面的論文。近年來,有關耐鹽性的研究取得了明顯的進展。目前國內(nèi)外關于植物耐鹽性的研究,按研究內(nèi)容可分為四類： ( 1)鹽脅迫對植物種子發(fā)芽質(zhì)量指標的影響； (2)鹽脅迫對植物幼苗生長、生理生化指標方面的影響；(3)在鹽脅迫下,通過組織培養(yǎng)誘導耐鹽性愈傷組織,觀察和分析愈傷組織微型結構以及測定愈傷組織脯氨酸 ( Pro)等； (4)

80、抗鹽基因的研究[2]。</p><p>　　本文是以游離脯氨酸和丙二醛(MDA)含量及相對電導率等為指標，開展梾木（Cornus macrophylla）、美國白蠟（Fraxinus americana）、東方杉（Taxodium mucronatum ×Cryptomeria fortunei）、加拿大紫荊（Cercis Canadensis）、薄殼山核桃（Liriodendron　tulivifer

81、a）和美國鵝掌楸（Carayaillinoensis）6種木本植物抗鹽性比較研究，為增加鹽堿地綠化樹種多樣性，改善我國廣大濱海及內(nèi)陸鹽堿地生態(tài)系統(tǒng)，豐富鹽堿地景觀，提供理論依據(jù)。本研究具有十分重要的理論和現(xiàn)實意義。</p><p><b>　　2 材料與方法 </b></p><p>　　2.1 實驗材料與實驗設計</p><p>　　2.1.

82、1 實驗材料</p><p>　　6種實驗樹種的生物學特征及觀賞價值</p><p><b>　　梾木</b></p><p>　　山茱萸科，生于山坡或溪邊雜木林中；分布于山東、浙江、臺灣、湖北、湖南、陜西、甘肅、四川、云南、貴州。</p><p>　　落葉喬木或灌木，高達15米；一年生枝條赤褐色，疏生柔毛，有棱。葉對生

83、，橢圓狀卵形至長圓形，長達16厘米，寬4—8厘米，頂端漸尖，基部寬楔形，側脈6—8對；葉柄長1．5—4厘米。頂生二歧聚傘花序圓錐狀，花小，白色或黃色；萼齒三角形，外面有柔毛；花瓣長圓形至長圓狀被針形；雄蕊4；花柱短，棍棒形，宿存。核果球形，熟時藍黑色?；ㄆ?—8月，果熟期10月。 也供建筑及制家具用；果實榨油，供制肥皂、潤滑油及食用(須將油熬透、除去異味)；葉和樹皮可提栲膠，可做紫色染科。</p><p><

84、;b>　　美國白蠟</b></p><p>　　木犀科白蠟樹屬，原產(chǎn)加拿大南部和美國。我國可在北至黑龍江南部，南至云南、廣西、廣東北部的區(qū)域內(nèi)生。</p><p>　　外形亮麗，樹勢雄偉，冠幅達12米。小枝圓形，粗狀。奇數(shù)羽狀復葉，小葉7枚，葉片卵形或卵狀披針形，表面暗綠色，有光澤。秋季葉片紫紅。鮮艷奪目。喜光，能耐側方庇陰，喜溫暖，也耐寒。喜肥沃濕潤也能耐干旱瘠薄，也稍

85、能耐水濕，喜鈣質(zhì)壤土或沙壤土，并耐輕鹽堿，抗煙塵，深根性。是優(yōu)良的行道樹和遮蔭樹；可用于湖岸綠化和工礦區(qū)綠化。</p><p><b>　?。?）東方杉</b></p><p>　　杉科落羽杉屬，是以“墨西哥落羽杉”為母本，柳杉為父本，經(jīng)遠緣雜交獲得。常綠或半常綠的高大喬木。樹冠通常為圓柱形或橢圓形；葉條形，冬季與小枝一起脫落；樹干基部有板狀根；該品種適宜疏松肥沃土壤

86、。適用于沿海防護林建設、鹽堿地綠化、水濕地造林、江河堤岸林帶建設等。</p><p><b>　?。?）加拿大紫荊</b></p><p>　　豆科紫荊屬落葉灌木或小喬木，原產(chǎn)美國，是美國俄克拉何馬州的州樹。</p><p>　　加拿大紫荊成年植株高7至15米。初春先葉開花，花冠扁平，圓形，紅紫色，叢生或呈總狀花序，花簇繁茂奪目。夏季結果，果實

87、紅褐色。它既可植于庭院、公園，也可植于路邊。葉片心形，新生葉呈現(xiàn)淺紅紫色，以后漸漸轉(zhuǎn)為深綠色，具有光澤。秋季落葉前，葉色有金黃、橘紅、紫紅色，對比鮮明，異常美麗。</p><p><b>　?。?）薄殼山核桃</b></p><p>　　胡桃科山核桃屬，原產(chǎn)北美東部；樹干端直，樹冠近廣卵形，根系發(fā)達，耐水濕，可孤植、叢植于湖畔、草坪等，宜作庭蔭樹，行道樹，亦適于河流沿

88、岸及平原地區(qū)綠化造林，為很好的城鄉(xiāng)綠化樹種和果材兼用樹種。</p><p><b>　　美國鵝掌楸</b></p><p>　　木蘭科鵝掌楸屬，生長于北美洲。又名馬褂木，落葉大喬木，株高60米，胸徑3米，是城市中極佳的行道樹、庭蔭樹種，無論叢植、列植或片植于草坪、公園入口處，均有獨特的景觀效果，對有害氣體的抗性較強，也是工礦區(qū)綠化的優(yōu)良樹種之一。</p>

89、<p>　　2.1.2 實驗設計</p><p>　?。?）選用6種木本植物的2年生幼苗進行盆栽</p><p>　　①梾木：共36株，分4組，每組9株；每個實驗3株對照；</p><p>　?、诿绹紫灒汗?4株，分4組，每組6株；每個實驗3個對照；</p><p>　?、蹡|方杉：共40株，分4組，每組10株；每個實驗3個對照；

90、</p><p>　?、芗幽么笞锨G：共36株，分4組，每組9株；每個實驗3個對照；</p><p>　?、菝绹Z掌楸：共16株，分4組，每組4株；每個實驗3個對照；</p><p>　?、薇ど胶颂遥汗?0株，分4組，每組10株；每個實驗3個對照；</p><p>　?。?）不同濃度的鹽進行脅迫</p><p>　　先

91、將幼苗移栽到15cm直徑的塑料花盆中培育2周（脅迫初期），栽培基質(zhì)用泥炭：蛭石：珍珠巖1:1:1。并采用鹽溶液（NaCl）進行脅迫，濃度梯度分別為0.0%；0.3%；0.5%；1.0%，每種物種每種處理10株苗（理想情況）。為了防止鹽激反應[3]，在脅迫初期期間，先按25%、50%、100%鹽濃度梯度逐漸遞增，最后至目標濃度梯度。每2d定時定量(1L/盆)澆灌鹽溶液1次，分別于脅迫中期（4周）、脅迫后期（6周）、脅迫末期（7周）進行隨機

92、采樣測定。</p><p><b>　　2.2 測定方法</b></p><p>　　2.2.1 電解質(zhì)滲出率的測定</p><p>　　近年來的研究表明，在脅迫中，膜系統(tǒng)常常受到傷害，從而使膜質(zhì)受損傷，透性加大，細胞內(nèi)離子外滲量增多，電導率加大。因此可以用電導儀測定溶液的電導率，求算電解質(zhì)滲出率（或稱傷害率）。傷害率愈高則抗性越小，反之則抗性

93、較大。</p><p>　　取處理和對照樣品各0.5g，放入試管中，放于50mL小燒杯中，加去離子水30mL，振蕩1min后用電導儀測定電導率(EC0)，置于室溫下浸泡12h，分別測定其電導率(EC1)，再置沸水中10min，取出冷卻后搖勻，分別測定其電導率(EC2)，按下列公式求出其相對電導率[4]。</p><p>　　相對電導率(%)=[(EC1- EC0) / ( EC2- EC0

94、) ]× 100%</p><p>　　2.2.2 葉綠素含量的測定</p><p>　　葉綠素是植物的光合色素，葉綠體色素在光能吸收、傳遞和轉(zhuǎn)換過程中都起著重要作用，其含量對葉片光合性能有較大的影響，葉片葉綠素含量的消長規(guī)律是反映葉片生理活性變化的重要指標之一，與葉片光合機能大小具有密切關系[5]。</p><p>　　在試管中加入7.5ml 2:1（丙

95、酮：無水乙醇）混合液---擦凈葉片表面污物，把被測植物葉片剪成寬度小于1mm細絲，混勻---用電子天平稱取0.1g樣品放入試管---把試管置室溫避光處浸泡提取至肉眼觀察葉片完全發(fā)白為止。將葉綠素提取液置1cm厚的比色皿中，用2:1混合液作參比，在分光光度計上，在663nm和645nm處分別測定葉綠素a，b吸光度。并由下列公式計算：</p><p>　　葉綠素a的含量=（12.7A663-2.69A645）V/10

96、00*W</p><p>　　葉綠素b的含量=（22.7A645-4.68A663）V/1000*W</p><p>　　葉綠素總含量=(1000A652)/34.5*V/1000*W</p><p>　　式中A663、A645和A652分別為相應波長下的吸光度值，V為提取液的體積，W為葉片鮮重，葉綠素含量單位為mg/g。</p><p>　

97、　2.2.3 丙二醛含量測定</p><p>　　植物在逆境或衰老條件下，會發(fā)生膜質(zhì)的過氧化作用。丙二醛（MDA）是膜質(zhì)過氧化產(chǎn)物之一，其濃度表示膜質(zhì)過氧化強度和膜系統(tǒng)傷害程度，所以是逆境生理指標[6]。丙二醛在酸性和高溫條件，可以和硫代巴比妥（TBA）反應生成紅棕色的三甲川，在532nm具有最大光吸收。</p><p>　?。?）MDA的提?。悍Q取植物材料1g，剪碎，加入2mL5%TCA

98、和少量石英砂，研磨至勻漿，再加8mLTCA進一步研磨，勻漿在4000r/min離心10min，上清液為樣品提取液。 </p><p>　　（2）顯色反應和測定：吸取離心的上清液2mL(對照加2mL蒸餾水)，加入2 mL0.6%TBA溶液，搖勻。將試管放入沸水浴中煮沸10min(自試管內(nèi)溶液中出現(xiàn)小氣泡開始計時)，取出試管并冷卻，3000r/min離心15 min，取上清液并以0.6％TBA 溶液為空白測定532n

99、m、600nm和450nm處的吸光度值。</p><p>　　MDA（μmol/g FW）=MAD濃度（μmol/g）×提取液體積（ml）/植物組織鮮重（g）</p><p>　　2.2.4 葉片游離脯氨酸含量的測定</p><p>　　脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，具有很強的水合能力，其水溶液具有很高的水勢。脯氨酸的疏水端可和蛋白質(zhì)結合，親水端可與水分子結

100、合，蛋白質(zhì)可借助脯氨酸束縛更多的水，從而防止?jié)B透脅迫條件下蛋白質(zhì)的脫水變性。因此脯氨酸在植物的滲透調(diào)節(jié)中起重要作用，而且即使在含水量很低的細胞內(nèi)，脯氨酸仍能提供足夠的自由水，以維持正常的生命活動[7]。正常情況下，植物體內(nèi)脯氨酸含量并不高，但遭受水分、鹽分等脅迫時體內(nèi)的脯氨酸含量往往增加，它在一定程度上反映植物受環(huán)境水分和鹽度脅迫的情況，以及植物對水分和鹽分脅迫的忍耐及抵抗能力。</p><p>　　當用磺基水楊

101、酸提取植物樣品時，脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加熱處理后，溶液即成紅色，再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中。色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長下比色測定吸光度，從標準曲線上查出脯氨酸含量。</p><p>　?。?）2.5%酸性茚三酮顯色液配置：冰乙酸和6mol/L磷酸以3:2混合，作為溶劑進行配制，于70℃下加熱溶解，冷卻后置棕色試劑瓶中，4℃下保存?zhèn)溆茫瑑商靸?nèi)穩(wěn)定。&l

102、t;/p><p>　?。?）繪制脯氨酸標準曲線</p><p>　?。╝）稱取10mg脯氨酸，蒸餾水溶解后定容至100ml，其濃度為100μg/ml母液。</p><p>　　（b）取母液0.0、0.5、1.25、2.5、5.0、7.5、10.0ml分別放入7個50ml容量瓶中，再分別加入蒸餾水定容至50ml，配成0.0、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20

103、.0μg/ml的系列溶液。</p><p>　?。╟）別取上述各溶液２ml，加入已編號的7個試管中，再分別加入２ml冰醋酸，4ml酸性茚三酮試劑，2ml磺基水楊酸溶液；</p><p>　　（d）搖勻后，用玻璃蓋上試管口，在沸水浴中反應2h；</p><p>　　（e）將試管取出，冷卻至室溫，然后向各試管中加入４ml甲苯，手工充分震蕩后，靜置約10min，紅色反應產(chǎn)

104、物被萃取到甲苯層；</p><p>　?。╢）用滴管吸取紅色的甲苯萃取液于比色皿中，在分光光度計520nm波長處測定吸光度；</p><p>　?。╣）以脯氨酸含量為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。</p><p>　?。?）游離脯氨酸的提?。悍Q取0.3g葉片鮮樣（來自經(jīng)干旱處理和對照的不同材料），剪碎后放入具塞試管中，加5ml 3%磺基水楊酸溶液，加塞后在沸水

105、浴中提取10min，過濾液待測。</p><p>　　（4）游離脯氨酸的測定：取提取液2ml于具塞試管中，加入2ml蒸餾水、2ml冰醋酸和4ml酸性茚三酮試劑，搖勻后在沸水浴中加熱顯色2h，取出后冷卻至室溫，加入4ml甲苯，充分搖勻以卒取紅色產(chǎn)物。靜置約10min，吸取甲苯層，于分光光度計520nm波長處測定吸光度。</p><p>　　（5）計算樣品中的脯氨酸含量：脯氨酸含量（μg/g

106、）＝（C×V/A）/W 或脯氨酸含量（%）＝（C×V/A）/W×10-4</p><p>　　式中：C—由標準溶液查得脯氨酸μg數(shù)； V—提取液總體積（ml）； A—測定液總體積（ml）；W－樣品重（g）；1g＝106μg。</p><p>　　2.2.5 可溶性糖含量測定</p><p>　　植物體內(nèi)的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的

107、單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10－100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏度高，實驗時基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上[8]。</p><p>　　1．標準曲線的制作： 取

108、20mL刻度試管11支，從0－10分別編號，按表加入溶液和水，然后按順序向試管內(nèi)加入1mL 9％苯酚溶液，搖勻，再從管液正面以 5－20s。加入5 mL濃硫酸，搖勻。比色液總體積為8 mL，在恒溫下放置30min。顯色。然后以空白為參比，在485nm波長下比色測定，以糖含量為橫坐標，光密度為縱坐標，繪制標準曲線，求出標準直線方程。</p><p>　　2．可溶性糖的提取 取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱