河北民族師范學院畢業(yè)論文

1、<p><b>　　河北民族師范學院</b></p><p><b>　　畢業(yè)論文</b></p><p>　　論文題目：淺探不同培養(yǎng)液中固定化小球藻在的生長情況</p><p><b>　　作 者：</b></p><p><b>　　指導教師：&l

2、t;/b></p><p><b>　　所在系部：</b></p><p><b>　　專 業(yè)：</b></p><p><b>　　年級班級：</b></p><p><b>　　完成時間：</b></p><p>&

3、lt;b>　　目 錄</b></p><p>　　題目．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4</p><p>　　中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4</p&

4、gt;<p>　　1藥品的配制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4</p><p>　　2固定化小球藻．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5</p><p>　　3固定化小球藻的培養(yǎng)．．．．．．．．．．．．．

5、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5</p><p>　　4固定化小球藻在不同營養(yǎng)環(huán)境中的生長情況．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5</p><p>　　5實驗數(shù)據(jù)與分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5 </p&g

6、t;<p>　　(1)固定化小球藻在培養(yǎng)過程中PH的變化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5</p><p>　　(2)不同培養(yǎng)液對固定化小球藻生長的影響．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6</p><p>　　(3)固定化小球藻在各培養(yǎng)液中葉綠素a和葉綠素b含量的變化．．．．．．．．．．．．．

7、．．．．．．．7</p><p>　　6固定化小球藻培養(yǎng)液中藻密度的測定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8</p><p>　　結(jié)論．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8</p><p>　　注釋．．．．．．．．．

8、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．</p><p>　　參考文獻．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8</p><p>　　致謝．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

9、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9</p><p>　　淺探固定化小球藻在不同培養(yǎng)液中的生長情況</p><p>　　摘 要： 用海藻酸鈉固定化小球藻，將經(jīng)固定化的小球藻分別放在不同培養(yǎng)液中，在陽光充足的地方進行培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)液的顏色，渾濁度，定期測定培養(yǎng)液的PH值，藻密度，葉綠素含量等。通過對測定數(shù)據(jù)進行對比分析，確定在實驗中的五種培養(yǎng)液中海藻肥培養(yǎng)液最適合

10、固定化小球藻的生長。</p><p>　　關(guān)鍵詞： 固定化小球藻 不同培養(yǎng) 生長 藻密度</p><p><b>　　前 言</b></p><p>　　小球藻（俗稱為綠藻）是五億四千年前就已經(jīng)在地球上繁衍的一種單細胞的綠色微藻類，不管是生態(tài)環(huán)境的巨變還是自然災(zāi)害的侵襲，都沒能毀滅它，其穩(wěn)定的基因始終沒有改變。生息在淡水中的小球藻被稱為“

11、罐裝的太陽”，含有豐富的葉綠體，它借助陽光，水和二氧化碳以每隔20小時分裂出四個細胞的旺盛繁殖能力，不停地將太陽能轉(zhuǎn)換成蘊含多種營養(yǎng)物質(zhì)成分的藻體，并在增值中釋放大量的氧，其光合能力高于其它植物十倍以上。小球藻的藻體細胞內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)，維生素，礦物質(zhì)，食物纖維，核酸及葉綠體等，其產(chǎn)品能全面提供給人類健康及疾病康復(fù)期間所需的營養(yǎng)物質(zhì)及微量元素，具有增強人體免疫力，防止病毒增殖，抑制癌細胞增殖抑制血糖上升，降低血清膽固醇含量，排除毒素，

12、迅速修復(fù)機體的損傷等功能，因此，小球藻是一種很好的天然營養(yǎng)健康品，廣泛應(yīng)用于食品，醫(yī)療保健，美容等各個領(lǐng)域。</p><p>　　小球藻的培養(yǎng)方式主要是自養(yǎng)培養(yǎng)和異養(yǎng)培養(yǎng)。自養(yǎng)培養(yǎng)主要是指利用光能將無機碳轉(zhuǎn)化為有機碳水化合物的過程，光照可以采用太陽光或人工光源，無機碳源主要包括碳酸鹽或CO2，其最適培養(yǎng)溫度為25—35℃，最適PH 6.5—7.5，最適光照強度2000——50001ux,除此之外還需要在培

13、養(yǎng)基中提供氮源，磷源，鎂源和鐵及微量元素等。其異養(yǎng)培養(yǎng)即小球藻利用糖，有機酸和醇類等60多種有機碳源，由于更多的能量用于呼吸代謝，限制了細胞物質(zhì)的合成，但可以使小球藻的脂肪的含量明顯地增加，有利于其中脂類轉(zhuǎn)化生物柴油。</p><p>　　小球藻的固定化培養(yǎng)即將小球藻溶液與海藻酸鈉混合在純凈CaCl2溶液的作用下形成固體小球。此包埋制得的小球體有較好的機械性能和防破壞能力,而周圍營養(yǎng)源可與其內(nèi)的藻體進行正常接觸，

14、保證藻體正常生長的需要。為了探討固定化小球藻的生長條件，我們首先培養(yǎng)小球藻，進行固定化，然后將其培養(yǎng)在不同的液體營養(yǎng)環(huán)境中，并定期對培養(yǎng)液的PH值，渾濁度，藻密度，吸光度等進行檢測，便可將得到固定化小球藻在不同的環(huán)境條件下生長情況及一系列生長規(guī)律而為固定化小球藻的培養(yǎng)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。</p><p><b>　　1 藥品的配制</b></p><p>　　(1) 4%的

15、海藻酸鈉溶液200ml </p><p>　　(2) 5%的CaCl2溶液2000ml(分別裝在5個燒杯中，每個燒杯約250ml)</p><p>　　(3) 培養(yǎng)液的配制</p><p>　?、?1號  SE 溶液  （藥品加蒸餾水）</p><p>　?、?2號 土壤浸出液 用水浴加熱土壤浸出液大約70℃三十分鐘，二十

16、四小時后重復(fù)加熱一次，過濾浸出液。</p><p>　?、?號 硝酸鈉60mg/L,尿素1.8mg/L,磷酸二氫鉀2mg/L。</p><p>　?、?號 復(fù)合肥溶液 </p><p><b>　　⑤ 號 海藻肥 </b></p><p>　　將配置好的溶液和實驗用具放入高壓蒸汽滅菌過內(nèi)進行滅菌處理。</

17、p><p><b>　　2 固定化小球藻</b></p><p>　　(1)在超凈工作臺打開的情況下打開紫外燈對工作臺滅菌處理約20分鐘，并用沾有醫(yī)用酒精的棉球擦拭雙手和工作臺面（起滅菌效果）。</p><p>　　(2)將經(jīng)過滅菌處理過的海藻酸鈉溶液和CaCl2溶液取出，從錐形瓶中取出15ml海藻酸鈉溶液與綠藻溶液置于小燒杯中，用干凈的注射器抽取

18、混合溶液再放出，重復(fù)幾次此動作使液體盡量充分地混合均勻，再將帶有針頭的注射器吸取大約5毫升的混合液，慢慢的一滴滴的滴向CaCl2溶液中，可看到有固體透明球體生成，重復(fù)此過程直到將混合液用盡。</p><p>　　(3)分別在五個燒杯中重復(fù)步驟（2）得到五組固定化小球藻 靜置大約2小時后分別向燒杯中加入無菌蒸餾水使其分別稀釋一倍，最后將大燒杯放入冰箱內(nèi)靜止過夜。</p><p>　　3 固定

19、化小球藻的培養(yǎng)</p><p>　　將經(jīng)過冰箱靜置的五組小球藻分別取出放入各個裝有滅菌過的培養(yǎng)液的錐形瓶內(nèi)，蓋上牛皮紙放在陽光充足的陽臺上使其自然生長 并定期對其生長情況進行觀察，對球體成分和培養(yǎng)液檢測。</p><p>　　4 固定化小球藻在不同營養(yǎng)環(huán)境中的生長情況</p><p>　　(1)培養(yǎng)液的PH值檢測 定期用玻璃棒蘸取培養(yǎng)液，滴在PH試紙上檢測其PH值

20、。</p><p>　　(2)固定化小球藻的葉綠素含量 分別從五組實驗中取固體小球0.2克，吸干水分放置試管內(nèi)用平頭玻璃棒將其搗碎，再分別向試管中加入95%的乙醇約5ml并用封口膜將試管封嚴，浸泡大約兩小時，取其上清液在分光光度計下測定其吸光度值（分別測定其在波長為649nm和665nm處的吸光度值A(chǔ)649,A665）,以此來計算葉綠素a，葉綠素b和總的葉綠素含量（mg/L）{其中C葉綠素a =13.95A66

21、5-6.88A649 C葉綠素b=24.96A649-7.32A665 總?cè)~綠素濃度（mg/L）=C葉綠素a+ C葉綠素b}。</p><p>　　(3)培養(yǎng)液中的藻密度的測定 取一定量的培養(yǎng)液，測其在650nm處的光吸收值，即為其藻密度，表示培養(yǎng)液中的藻體數(shù)量的多少。</p><p>　　5 實驗數(shù)據(jù)與分析 （根據(jù)下列四副圖中數(shù)據(jù)得出試驗結(jié)果） &

22、lt;/p><p>　　(1)固定化小球藻在培養(yǎng)過程中PH的變化 根據(jù)試驗測定結(jié)果（圖1）可以得出：2，4號培養(yǎng)組中的培養(yǎng)液在不同培養(yǎng)時期其PH值的變化幅度較?。s0.1—0.2），1，3號培養(yǎng)組中的培養(yǎng)液在培養(yǎng)過程中其PH變化幅度較大約（0.5-0.6），5組中培養(yǎng)液的PH值保持不變而1，2，3，4組總體來看，在培養(yǎng)的中后期其PH值呈減小趨勢。由此分析可以得出5組的培養(yǎng)其化學穩(wěn)定性比前四種較好。</p>

23、;<p>　　圖1各培養(yǎng)組在不同培養(yǎng)時長培養(yǎng)液的PH值</p><p>　　(2)不同培養(yǎng)液對固定化小球藻生長的影響</p><p>　　觀察實驗組中在培養(yǎng)過程中不同培養(yǎng)時期的總?cè)~綠素含量的變化可得：①在培養(yǎng)的初期第1，2，3，組中的單位質(zhì)量的小球藻中的總?cè)~綠素含量呈下降趨勢，而第1，5組中的葉綠素的含量呈現(xiàn)緩慢增加的趨勢。由此特點可以分析得到在固定化培養(yǎng)的初期，由于小球藻剛

24、轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)環(huán)境中，需要對新環(huán)境有一定時間的適應(yīng)，因此體內(nèi)的葉綠素的合成較緩慢。</p><p>　?、谠俦容^中后期的測定結(jié)果可得1，2，3，5組中的葉綠體含量呈增高趨勢而4組中的數(shù)值則呈減小趨勢，即在4組中其營養(yǎng)液開始影響小球藻的葉綠素的合成而不適合其生長。</p><p>　?、圩詈罂v觀全圖分析，在整個的培養(yǎng)過程中5組的總?cè)~綠體含量自始至終呈不斷地增加的趨勢，且總含量增加迅速，明顯，因

25、此可分析的5組的培養(yǎng)其內(nèi)的藻體能較快的適應(yīng)周圍的新營養(yǎng)環(huán)境，且能較快的合成葉綠素，較適合藻體的生長。</p><p>　　圖2 各培養(yǎng)組不同時長單位質(zhì)量小球體中總?cè)~綠素的含量（mg/L）</p><p>　　(3)固定化小球藻在各培養(yǎng)液中葉綠素a和葉綠素b含量的變化</p><p>　　測定固定化小球藻在各培養(yǎng)液中葉綠素a和葉綠素b含量，結(jié)果見圖3，發(fā)現(xiàn)：①在培養(yǎng)

26、到中期的時候1，2，3組試驗中的單位質(zhì)量的固定化小球其葉綠素a的含量小于葉綠素b的含量 ，4，5兩組試驗中葉綠素b的含量小于葉綠素a的含量，則在此時小球藻體內(nèi)的葉綠素a的合成較葉綠素b的合成少，4，5組中葉綠素b的含量小于葉綠素a的含量，在5組中其相差量較大，即此時期內(nèi)的葉綠素b的合成速率遠大于葉綠素a 的合成速率：②縱觀全圖可發(fā)現(xiàn)1，4，5中葉綠素a和葉綠素b 含量較大，其各個含量差別較明顯，2，3組中的含量小，差別較小。</p

27、><p>　　圖3 當培養(yǎng)時間在30天時各個培養(yǎng)組中的單位質(zhì)量的小球藻內(nèi)含的葉綠素a和葉綠素b的含量</p><p>　　表1各培養(yǎng)組不同時長單位質(zhì)量小球體中葉綠素a的含量（mg/L）</p><p>　　表2 各培養(yǎng)組不同時長單位質(zhì)量小球體中葉綠素b的含量（mg/L）</p><p>　　固定化小球藻培養(yǎng)液中藻密度的測定</p>

28、<p>　　取培養(yǎng)43天的固定化小球藻培養(yǎng)液，在650nm測定光吸收，結(jié)果見表5，培養(yǎng)液中的藻密度，第1，3，4號培養(yǎng)液的藻密度較大，第5號培養(yǎng)液中的藻密度較小，2號則最小。即在第1，3，4組中有大量的藻體從固體小球中逸出，穩(wěn)定性較差，而5號培養(yǎng)液最為穩(wěn)定。 </p><p>　　圖4 各培養(yǎng)組在培養(yǎng)43天后培養(yǎng)液中的藻密度</p><p><b>　　結(jié)

29、論</b></p><p>　　通過對以上實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析可以發(fā)現(xiàn)在2組培養(yǎng)中培養(yǎng)的固定化小球藻的生長速度較慢，不適合其生長；1組培養(yǎng)的固定化小球藻其PH變化幅度較大，化學穩(wěn)定性較低，而1，4組中會出現(xiàn)藻體的外逸而影響其穩(wěn)定培養(yǎng) ；3組中雖其球內(nèi)藻體能穩(wěn)定包裹，但隨著培養(yǎng)時間的增加其葉綠素的合成速率大大減慢。5組中的小球藻能較快適應(yīng)此營養(yǎng)環(huán)境，大量，迅速合成葉綠素，且球體內(nèi)的藻體穩(wěn)定性較好，被穩(wěn)定

30、包裹，PH值較穩(wěn)定。因此綜合以上幾組圖像分析結(jié)果可以確定在此5種培養(yǎng)液中海藻肥溶液（即5號）是最適合于固定化小球藻的生長培養(yǎng)的。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　劉建文.養(yǎng)生保健的全營養(yǎng)素：小球藻.中國社會科學出版社.2008.1 【1】小球藻.彩羽漫天http://baike.baidu.

31、com/view/480332.htm 2010 .11 .12 【2】 </p><p><b>　　致謝</b></p><p>　　在此論文撰寫過程中，要特別感謝我的導師李X老師的指導與督促，同時感謝她的諒解與包容。沒有李X老師的幫助也就沒有今天的這篇論文。求學與與實驗研究歷程是

32、艱苦的，但又是快樂的，是美好的。感謝我的班主任彭XX老師，謝謝他在這三年中為我們?nèi)嗨龅囊磺?，她不求回報，無私奉獻的精神我很欽佩，再次向她表示由衷的感謝。在這三年的學期中我所結(jié)識的各位生活和學習上的摯友讓我得到了人生最大的一筆財富。在此，也對他們表示衷心感謝。</p><p>　　謝謝我的父母，沒有他們辛勤的付出也就沒有我的今天，在這一刻，將最崇高的敬意獻給你們！</p><p>　　本