連作花生紅壤微生物多樣性的研究及微生物制劑對(duì)連作花生的影響.pdf

1、花生是南方低丘紅壤區(qū)的主要油料作物和經(jīng)濟(jì)作物,連作使花生單產(chǎn)、總產(chǎn)及其產(chǎn)投比在2-5年內(nèi)均呈下降趨勢(shì)。研究者從不同角度對(duì)作物連作的障礙原因進(jìn)行了分析,多數(shù)學(xué)者分析認(rèn)為連作后的土壤微生物區(qū)系變化是引起作物減產(chǎn)的主要原因。本文通過(guò)非培養(yǎng)的方法直接從土壤中提取總DNA,用細(xì)菌通用引物擴(kuò)增16S rEINA V3區(qū),用真菌引物擴(kuò)增18s rDNA,通過(guò)DGGE技術(shù)分析土壤樣品中的微生物群落結(jié)構(gòu);利用培養(yǎng)方法從土壤中分離芽孢桿菌,用細(xì)菌通用引物擴(kuò)

2、增16S rDNA,HhaI和XspI聯(lián)合酶切,通過(guò)RFLP技術(shù)分析土壤樣品中的芽孢桿菌群落多樣性.
　　 從細(xì)菌DGGE結(jié)果發(fā)現(xiàn):花生連作土壤樣品的條帶數(shù)較多,細(xì)菌種類均比較豐富;經(jīng)切膠回收、TA克隆測(cè)序后發(fā)現(xiàn)3個(gè)土壤樣品的代表類型是芽孢桿菌。然而真菌DGGE結(jié)果顯示:花生連作土壤樣品的條帶數(shù)都不多,在所有的土壤樣品中真菌種類均不豐富,測(cè)序后發(fā)現(xiàn)霉菌普遍存在于連作土壤中。3個(gè)連作小區(qū)土樣的微生物群落間具有較高的相似度。

3、　　 枯草芽孢桿菌是目前研究報(bào)道較多的一類芽孢桿菌,廣泛存在于壤、湖泊、海洋和動(dòng)植物的體表,由于其無(wú)致病性,并可以分泌多種酶和抗生素,而且還具有良好的發(fā)酵基礎(chǔ),所以用途十分廣泛。通過(guò)培養(yǎng)法對(duì)芽孢桿菌計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,花生連作土壤芽孢桿菌較豐富,數(shù)量從2.00×105～2.25×105cfu/g干土。通過(guò)對(duì)3個(gè)土樣中的芽孢桿菌進(jìn)行了16S rDNA的PCR-RFLP分析,獲得9個(gè)OTUs。多樣性指數(shù)分析表明,PCC1的OTUs多樣性最高,P

4、CC3次之,PCC2多樣性最低。16S rDNA測(cè)序結(jié)果表明花生連作土壤中芽孢桿菌的優(yōu)勢(shì)類型有短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、高地芽孢桿菌,分別占總克隆的54％、12%和14%。
　　 為了探索解除花生連作障礙的方法,本試驗(yàn)對(duì)花生連作地進(jìn)行不同微生物菌劑的施用,觀察不同處理間對(duì)花生生育性狀和產(chǎn)量的影響。結(jié)果表明,微生物菌劑均能一定程度上增加作物的產(chǎn)量,本試驗(yàn)分離得來(lái)的枯草芽孢桿菌與光合細(xì)菌聯(lián)合施用的效果最好,比對(duì)照提高了32.14%