婦科五聯(lián)檢技術(shù)

1、1,陰道分泌物檢測新技術(shù) ——陰道炎五聯(lián)檢,,2,提綱,背景1.陰道微生態(tài)環(huán)境2.常見的陰道疾病3.白帶檢測方法4.方法優(yōu)勢,3,背景,女性生殖道感染性疾病是全球重大社會問題和公共衛(wèi)生問題WHO1995年統(tǒng)計全球每年有3.33億可治愈的新病例發(fā)生，主要在發(fā)展中國家。生殖道感染造成不育達20-60%不等，發(fā)達國家36%，不發(fā)達國家達85%中國 2011年8月6日公布每年有2億人感染，5%-8%患者一年中

2、有3次以上復發(fā)，治療費達400億人民幣。60%的輸卵管性不育為感染造成。 常見病、多發(fā)病導致不孕不育、流產(chǎn)，出生人口素質(zhì)下降，增加感染HIV的機會，危害女性身心健康，對婚姻質(zhì)量及家庭穩(wěn)定產(chǎn)生潛在和深遠影響。,,4,背景,常見疾病發(fā)病率 1、念珠菌外陰陰道炎發(fā)病率31.3% 2、細菌性陰道病發(fā)病率10.44% 3、滴蟲性陰道炎7.44% 4、生殖道菌群失調(diào)：89.26%《中國實用婦產(chǎn)科雜志》20

3、09年12月第25卷第12期《陰道炎的診治進展》文章，對6982例門診就診女性的統(tǒng)計分析。作者：吳文湘、廖秦平,,5,2006年3月-2007年10月，對北京大學第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科門診的6982例女性就診者數(shù)據(jù)分析,背景,,6,背景,,,7,一.陰道微生物群,定植于陰道內(nèi)的微生物主要由：細菌、真菌、原蟲和病毒組成。陰道菌群約有29種，由多種厭氧菌和需氧菌構(gòu)成。 1.革蘭氏陽性需氧菌及兼性厭氧菌：乳酸桿菌、棒狀桿菌、非溶血性鏈球

4、菌、腸球菌及表皮葡萄球菌 2.革蘭氏陰性需氧菌及兼性厭氧菌：加德納菌、大腸埃希菌及摩根菌 3.厭氧菌：消化球菌、消化鏈球菌、類桿菌、動彎桿菌、梭桿菌及普雷沃菌 4.其它條件致病菌：支原體、衣原體、念珠菌,8,陰道微生態(tài)環(huán)境中，保持著協(xié)調(diào)平衡的狀態(tài),雖然正常陰道內(nèi)有很多種細菌存在，但是由于陰道與這些菌群之間形成生態(tài)平衡并不致病，在維持陰道生態(tài)平衡中，雌激素、乳酸桿菌及陰道PH起重要作用。陰道正常酸性環(huán)境（PH

5、≤4.5，多在3.8-4.4） 但是陰道生態(tài)平衡一旦被打破或外源性病原體侵入，即可導致炎癥發(fā)生。若體內(nèi)雌激素下降或陰道PH升高，如頻繁性交（性交后PH可上升至7.2維持6-8小時）、陰道灌洗等均可使陰道PH升高，不利于乳酸桿菌生長。此外長期應用抗生素抑制乳酸桿菌生長，或機體免疫力低下，均可使其他致病菌成為優(yōu)勢菌，引起炎癥。,9,陰道優(yōu)勢菌的特點,乳酸桿菌：革蘭氏陽性桿菌、無芽孢、鞭毛、莢膜，細長有彎曲或呈球桿狀、桿狀、單個、雙極鏈

6、狀無動力的厭氧或兼性厭氧菌。生長適宜溫度30-40℃，最適PH3.0-4.8陰道內(nèi)最常見乳桿菌有： 1、嗜酸、卷曲、格氏、詹氏乳桿菌主要產(chǎn)H2O2 2、唾液乳桿菌 3、發(fā)酵乳桿菌 等20多種,10,陰道優(yōu)勢菌的作用,乳酸桿菌的作用：1、分解糖原，維持陰道酸性環(huán)境2、產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)：乙酸、 H2O2、乳酸菌素、硬脂酸等3、競爭粘附：也稱占位性保護4、競爭營養(yǎng)：大量定制于陰道中的乳酸桿菌營養(yǎng)處

7、于競爭優(yōu)勢狀態(tài)，利用陰道上皮細胞中的糖原，減少其它菌群的碳源供應，通過競爭營養(yǎng)物而干擾其它菌的生長。,11,二.陰道最常見感染,常見感染性疾病 1、細菌性陰道病（BV） 細菌性陰道病（Bacteral Vaginosis,簡稱BV）它是由于陰道內(nèi)微生態(tài)平衡失調(diào)，對人體有益的優(yōu)勢菌—乳酸桿菌的大量減少或消失，而加特納氏菌、動彎桿菌屬、類桿菌屬、普氏桿菌屬等厭氧菌大量增生所引起的一種無陰道粘膜炎癥性表現(xiàn)的綜合癥。,12,致

8、病機理,細菌性陰道病為內(nèi)源性感染，主要是由于正常陰道菌群（乳酸桿菌)被陰道加特納桿菌、厭氧菌及人型支原體等混合菌群替代所致。促發(fā)陰道正常菌群發(fā)生轉(zhuǎn)變，發(fā)展成BV的啟動因素和機制尚不清楚。 乳酸桿菌對維持正常陰道的生態(tài)內(nèi)環(huán)境十分關(guān)鍵。患BV時乳酸桿菌減少而其它細菌增多，導致乙酸濃度降低，胺類和氨增加，使陰道分泌物PH值增加，厭氧菌的代謝產(chǎn)物如腐胺、尸胺和三甲胺，使陰道分泌物具有魚腥樣氣味。 BV相關(guān)的病原體可產(chǎn)生毒力因子包括細

9、胞毒素、唾液酸酶、粘多糖酶和膠原酶，造成上皮細胞損傷，使液體滲出及陰道鱗狀上皮細胞脫落，產(chǎn)生典型的細菌性陰道病的分泌物。,13,流行病學,細菌性陰道病的患病率隨種族及人群而異。國外資料表明在非選擇性人群中BV的患病率為10%-20%.在性病門診就診婦女中的患病率36-50%.因該病除分泌物異常外，無其它癥狀，患者常不就醫(yī)，因此很難估計人群中的發(fā)病情況。,14,2、霉菌性陰道炎(VVC） 主要分為白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、

10、克柔氏念珠菌。對 909 例培養(yǎng)陽性的 VVC 進行研究 ,白念珠菌占77.1 %,光滑念珠菌占 14. 6 %,克柔念珠菌占 4.0 %,熱帶念珠菌占 2.3 %,近平滑念珠菌占 0.6 ，其它占 1.2 %。,15,3、滴蟲性陰道炎（TV) 一種常見的婦科感染性疾病，1、滴蟲性陰道炎的危害主要主要是會令人難受及疼痛不適； 2、滴蟲性陰道炎可并發(fā)滴蟲性尿道炎、膀胱炎、腎盂炎； 3、由于滴蟲能吞噬精子，可引起不孕癥，影響生活質(zhì)量

11、； 4、陰道毛滴蟲長期存在于陰道內(nèi)，消耗或吞噬陰道上皮細胞內(nèi)的糖原，阻礙乳酸生成，不僅破壞陰道的弱酸性環(huán)境，還有可能引起陰道細胞發(fā)育異常，誘發(fā)癌前期病變,16,三.目前常規(guī)檢測方法： 陰道分泌物檢查 鏡檢項目： 白細胞（清潔度） 念珠菌（霉菌） 滴蟲 線索細胞（顯微鏡下很難觀察） 是判定BV的一個必要條件。,17,1.4 清潔度判斷標準,1

12、8,優(yōu)勢菌及病原體染色圖片,,優(yōu)勢菌：乳酸桿菌,念珠菌,白細胞、滴蟲,線索細胞,19,目前檢測現(xiàn)狀,由于分泌物標本成份復雜，濕片高倍鏡檢下易漏檢、誤判,,20,目前白帶常規(guī)鏡檢特點及存在問題：1、鏡檢觀察，檢測標準不統(tǒng)一，操作人員需依賴較強的工作經(jīng)驗，人為因素影響大，主觀性強，稍有疏忽或經(jīng)驗欠缺者，容易漏檢，誤判。2、醫(yī)院標本量大、勞動強度大，易視覺疲勞致漏檢，誤判。3、一般是不進行染色，因此乳酸桿菌不好辨認；4、觀察清潔度容

13、易受到涂片厚薄、均勻與否、細胞破碎的影響，5、觀察念珠菌容易受到雜質(zhì)粒子干擾；6、觀察滴蟲容易受到溫度的影響或送檢時間及時性的影響；7、線索細胞在鏡下不好觀察，因此不好判定BV,21,四、檢測方法比較,細菌性陰道病唾液酸酶檢測 唾液酸酶活性增加的主要病原菌是高濃度加德納菌、普雷沃菌、消化鏈球菌、動彎桿菌等革蘭氏陰性菌和厭氧菌增多的產(chǎn)物。 單一檢測有可能漏檢部分加德納菌、動彎桿菌，能通過脯氨酸氨基肽酶活性

14、檢測才能彌補其不足提高BV檢出率。,,22,國外研究情況,美國微生物研究協(xié)會：1991年5月在《臨床微生物研究雜志》上發(fā)表了“5分鐘快速實現(xiàn)白色念珠菌菌落的鑒定方法”均對白色念珠菌特異性酶“L-脯氨酸氨基肽酶”、“乙酰氨基葡萄糖苷酶”快速檢測的研究作了詳細報導。 2005年4月在《生物醫(yī)學與藥物療法》上發(fā)表的“陰道毛滴蟲中的N-乙酰-β-D-氨基己糖酶底物特異性和抑制劑活性”說明滴蟲具有乙酰氨基葡萄糖苷酶活性,,2

15、3,檢驗結(jié)果評估,,,84.7%,,,11.2%,24,鏡檢與五項聯(lián)檢比較,25,臨床實驗結(jié)果,26,臨床檢測意義,1、女性陰道微生態(tài)狀況(清潔度）評估2、女性生殖道感染性疾病的篩查 細胞溶性陰道炎、外陰陰道念珠菌病、細菌性陰道病、滴蟲陰道炎3、輔助診斷 宮頸炎、盆腔炎（子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎）、不孕不育等4、術(shù)后感染追蹤5、療效評價,,27,四、婦科聯(lián)檢試劑,4.1.通過六項測定1、過氧化氫濃度測定2、白細胞酯酶活

16、性測定3、唾液酸苷酶活性測定4、脯氨酸氨基肽酶活性測定5、氨基葡萄糖苷酶活性測定6、PH值 pH值≥4.8為滴蟲 pH值≤4.6為念珠菌 可檢測：1、乳酸桿菌2、白細胞（清潔度）3、細菌性陰道病4、念珠菌5、滴蟲,,,28,4.2 檢測原理,１. 過氧化氫濃度測定 標本中的過氧化氫經(jīng)過氧化物酶作用，釋放出新生態(tài)氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使TOOS氧化呈紅色或紫紅色，呈色深度與H2O2濃

17、度成正比。2. 白細胞酯酶活性測定 白細胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，后者在氧存在的條件下呈藍色，呈色深度與白細胞酯酶活性成正比。,3. 唾液酸苷酶活性測定 唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酰神經(jīng)氨酸，釋放出溴吲哚基遇重氮鹽起反應呈紅色或紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性成正比。4. 脯氨酸氨肽酶活性測定 厭氧生物以及白色念珠菌有很強的脯氨酸氨肽酶活性，水解L-脯

18、氨酸-對硝基苯胺，釋放出黃色的對硝基苯胺，呈色深度與脯氨酸氨肽酶活性成正比。,5. 氨基葡萄糖苷酶活性測定 白色念珠菌和滴蟲有很強的乙酰氨基葡萄糖苷酶活性，水解對硝基苯-N-乙酰-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷，釋放出對硝基苯酚，后者在堿性條件下呈黃色，呈色深度與乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成正比。6. pH測定 正常白帶pH為3.8-4.5，BV白帶pH>4.5，滴蟲白帶pH大于5-6，霉菌白帶pH在小于4.

19、7。,29,過氧化氫 用來表示分泌物中有益菌如乳酸桿菌的多少，陰性表明乳酸桿菌多，屬正常。白細胞酯酶 用來表示白細胞的多少，陽性表明表明白細胞多于15/HP，可能有陰道炎。唾液酸苷酶 陽性表明可能有細菌性陰道病(BV)。脯氨酸氨基肽酶 單純的脯氨酸氨基肽酶陽性表明可能有BV，但若同時伴有乙酰氨基葡萄糖苷酶陽性，則根據(jù)乙酰氨基葡萄糖苷酶判斷結(jié)果。乙酰氨基葡萄糖苷酶 陽性，若同

20、時pH≥4.8，表示可能滴蟲感染；若同時pH≤4.6,則表明念珠菌感染。,4.2 各項指標意義,30,4.4 結(jié)果判斷簡易圖,31,報告單,,,,,,xxx,32,綜 述,1、陰道生物酶聯(lián)合檢測試劑完成陰道分泌物常規(guī)檢測項目和BV檢測2、將傳統(tǒng)形態(tài)學檢測方法發(fā)展、提高到功能性生化特異性酶標志物檢測，實現(xiàn)了陰道分泌物檢測技術(shù)新的突破，提高結(jié)果準確性3、統(tǒng)一了檢測標準，避免了常規(guī)鏡檢方法人為主觀因素造成的漏檢、誤判導致的患者疾