基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)研2017

1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中動(dòng)物選擇的基本原則,選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的原則一、相似性原則二、特異性原則三、適宜規(guī)格的原則四、標(biāo)準(zhǔn)化原則五、經(jīng)濟(jì)易獲性原則六、借鑒與法規(guī),一、相似性原則 盡量選用與人體結(jié)構(gòu)、功能、代謝及疾病特征相似的動(dòng)物。 目的：對(duì)動(dòng)物和人類疾病進(jìn)行類比研究，解決人類疾病的預(yù)防和治療問題。因此，動(dòng)物的進(jìn)化程度在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)應(yīng)是首先考慮的問題。,兩基因組的DNA序列相似性達(dá)99%；基因相似程度達(dá)到96%；人類只

2、比黑猩猩多50個(gè)特殊基因。,,,,從進(jìn)化的角度看，非人靈長類動(dòng)物與人最為近似。分析顯示黑猩猩與人類基因相似程度達(dá)到96% (2005. 9.2)。,人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在解剖、生理及代謝方面的相似點(diǎn),,,建立人類疾病動(dòng)物模型，可以下面幾個(gè)方面將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人進(jìn)行比較：1.結(jié)構(gòu)和功能的相似性2.年齡狀態(tài)的相似性3.生態(tài)或健康狀況的相似性4.疾病特點(diǎn)的相似性5.操作實(shí)感的相似性,二、標(biāo)準(zhǔn)化原則 盡量選用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)

3、物系遺傳背景明確，具有已知菌叢和模型性狀顯著且穩(wěn)定的動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證，是標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的標(biāo)志。,動(dòng)物購買： 具有動(dòng)物生產(chǎn)和質(zhì)量合格證的單位。,,三、特異性原則1 盡量選用解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮膭?dòng)物，是保證實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素。很多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有某些解剖生理特點(diǎn)，為實(shí)驗(yàn)所要觀察的器官或組織等提供了很多的便利條件，如能適當(dāng)使用，將減少實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備方面的麻煩，降低操作難度，使實(shí)驗(yàn)容易成功。,家犬的甲狀旁腺位于甲

4、狀腺的表面，位置比較固定，大多數(shù)在兩個(gè)甲狀腺相對(duì)應(yīng)的兩端上. 家兔的甲狀旁腺分布比較散，位置不固定，除甲狀腺周圍外，有的甚至分布到主動(dòng)脈弓附近，因此做甲狀旁腺摘除實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選用家犬而不能選用兔。,家兔頸部最粗、白色的為迷走神經(jīng)，中間最細(xì)的為減壓神經(jīng)，較細(xì)、呈灰白色的為交感神經(jīng)，它們是分別存在、獨(dú)自行走的。而馬、牛、豬、犬、貓、蛙等其他動(dòng)物的 減壓神經(jīng)并不單獨(dú)行走，而是行走于迷走、交感干，或迷走神經(jīng)之中。因此要觀察減壓神經(jīng)對(duì)心臟的作

5、用時(shí)，就必須選用家兔。,,家兔胸腔內(nèi)構(gòu)造與其它動(dòng)物不同，胸腔中央由縱膈連于頂壁、底壁及后壁之間將胸腔分為左右兩部，互不相通，縱膈由膈胸膜和縱膈胸膜兩層縱膈膜組成。肺被肋胸膜和肺胸膜膈開，心臟又被心包胸膜隔開。因此，開胸后打開心包胸膜暴露心臟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，只要不弄破縱隔膜，動(dòng)物不需要作人工呼吸。貓、狗等其他動(dòng)物開胸后一定要作人工呼吸，才能進(jìn)行心臟操作。,,長爪沙鼠腦底動(dòng)脈環(huán)后交通支缺損，沒有聯(lián)系頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)和椎底動(dòng)脈系統(tǒng)的后交通動(dòng)

6、脈，不能構(gòu)成Willis動(dòng)脈環(huán)，是復(fù)制腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷氖走x動(dòng)物。,2 充分利用不同品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存在的某些特殊反應(yīng),不同種系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)同一因素的反應(yīng)往往是相似的，即共同性，但也有特殊反應(yīng)，有特殊性。家兔對(duì)體溫變化十分敏感——發(fā)熱、解熱和檢查致熱原等實(shí)驗(yàn)研究。小鼠和大鼠體溫調(diào)節(jié)不穩(wěn)定，不宜選用；家兔對(duì)放射線十分敏感，發(fā)生休克，常選用小鼠、大鼠、犬和猴等。鴿子、家犬、猴和貓的嘔吐反應(yīng)敏感——適宜做嘔吐實(shí)驗(yàn)。家兔、豚鼠等草食動(dòng)物嘔吐反應(yīng)不

7、敏感，小鼠和大鼠無嘔吐反應(yīng)。豚鼠易于過敏——過敏性實(shí)驗(yàn)研究。,1、年 齡 不同品種（品系）的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物其壽命各不相同，年齡不同，生物學(xué)特性不同，受到外界因素作用時(shí)，可呈現(xiàn)不同的反應(yīng)。 如果對(duì)狗和小鼠均觀察一年，所反應(yīng)的發(fā)育過程是不同的；即使同樣是狗，不同的年齡階段所得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也不盡相同。 一般實(shí)驗(yàn)應(yīng)該選擇性成熟的青壯年動(dòng)物為宜。幼齡動(dòng)物的某些功能尚不完善，而老年動(dòng)物的各系統(tǒng)功能和代謝作用均下降，除特殊試驗(yàn)外（如老年醫(yī)學(xué)研究

8、），也不宜選用。,四、適宜規(guī)格的原則,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡與體重一般呈正相關(guān)，可按體重推算年齡。例如KM小鼠6周齡時(shí)雄性約為32g，雌性28g；Wistar大鼠雄性約為180g，雌性160g。 一般來說，選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡、體重應(yīng)盡可能一致，若相差懸殊，則易增加動(dòng)物反應(yīng)的個(gè)體差異，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 不同品種、品系的動(dòng)物都有各自的生長曲線，如大小鼠，同齡而不同品種、品系，其體重有差異。42天　Wistar

9、 雄性 187g 雌性 166g　SD 雄性 206g 雌性 172g,2、體 重,3、性 別性別不同，對(duì)實(shí)驗(yàn)的敏感程度也不同。如用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，雌性動(dòng)物的敏感性是雄性動(dòng)物的2.5～3.8倍；雌性小鼠對(duì)四環(huán)素毒素的耐受力低于雄鼠。 一般來說，若對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別無特殊要求，則宜選用雌雄各半，以避免因性別差異所造成的結(jié)果誤差。,,,,4、生理狀況 動(dòng)物如果懷

10、孕、哺乳、換毛等，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響很 大，因此實(shí)驗(yàn)不宜選用處于特殊生理狀態(tài)下的動(dòng)物進(jìn)行。 家兔有年齡性換毛和季節(jié)性換毛，每年的4～5月和9～10月為季節(jié)性換毛。年齡性換毛有兩次，出生100天時(shí)第一次，5月齡時(shí)第二次。換毛時(shí)家兔的抵抗力最差，尤其是第二次年齡性換毛時(shí)更差。 在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)動(dòng)物懷孕，則體重及某些生理、生化指標(biāo)均可受到嚴(yán)重影響，有時(shí)應(yīng)將懷孕動(dòng)物剔除。,不同藥物或化合物，在不同種系動(dòng)物上引起的反應(yīng)是有很大差異的。

11、這些在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)必須加以注意。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)某些藥物反應(yīng) 的差異,雌激素 能終止大鼠、小鼠妊娠 但不能終止人的妊娠嗎 啡 對(duì)犬、兔、猴、大鼠、人 中樞抑制 對(duì)小鼠、貓有興奮 安妥明（降血脂藥）使家犬下肢癱瘓 對(duì)其它動(dòng)物無此副作用鶴草酚（驅(qū)蟲藥） 使家犬失明 對(duì)猴無此

12、副作用苯 引起家兔白細(xì)胞減少 狗白細(xì)胞增多苯胺及其衍生物 引起犬、貓、豚鼠與人相似的病理變化－變性血紅蛋白，對(duì)家兔則不易引起，對(duì)鼠則完全不產(chǎn)生。,5、品種、品系的不同,五、經(jīng)濟(jì)易獲性原則 盡量選用結(jié)構(gòu)與功能簡單又能反映研究指標(biāo)的動(dòng)物,復(fù)制動(dòng)物模型時(shí)，在條件允許的情況下，盡量考慮與人相似、進(jìn)化程度高的動(dòng)物作模型。但不能因此就認(rèn)為進(jìn)化程度越高等的動(dòng)物其所有器官和

13、功能越接近人類。動(dòng)脈粥樣硬化：非人靈長類，病變部位經(jīng)常在小動(dòng)脈，與人類分布不同；鴿子作模型，胸主動(dòng)脈出現(xiàn)的黃斑面積可達(dá)10%，鏡下變化與人也較相似。果蠅具有生活史短（12天），飼養(yǎng)簡便，染色體少（4對(duì)），唾液腺染色體制作容易等優(yōu)點(diǎn)，是遺傳學(xué)研究的絕好材料。,不應(yīng)一味追求進(jìn)化程度高的動(dòng)物，進(jìn)化程度高或結(jié)構(gòu)功能復(fù)雜的動(dòng)物有時(shí)會(huì)給實(shí)驗(yàn)條件的控制和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的獲得帶來難以預(yù)料的困難。除了經(jīng)費(fèi)開支之外，還會(huì)影響試驗(yàn)的周期。在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果正確性

14、的前提下，盡量選用結(jié)構(gòu)功能相似又能反映研究指標(biāo)、易獲得、最經(jīng)濟(jì)、最易飼養(yǎng)管理的動(dòng)物。,六、借鑒與法規(guī),充分查閱與課題相關(guān)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩方面的文獻(xiàn)。了解本領(lǐng)域、本項(xiàng)目以往使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情況和研究成果。科研的創(chuàng)新并不是不要前人的東西，相反，前人在科研、生產(chǎn)等方面總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)，是科學(xué)工作者實(shí)踐和智慧的結(jié)晶。充分利用前人的成果，可以避免重復(fù)研究。 例如C57BL小鼠常用于Lewis肺癌和B16黑色素瘤的移植，DBA/2常用于P388

15、和L1210淋巴細(xì)胞白血病的研究，BALB／c小鼠常用來制備單克隆抗體。,,充分考慮有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物政策法規(guī)及倫理道德問題,我國制定了關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面的政策、法規(guī)、國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。國際上要求動(dòng)物實(shí)驗(yàn)達(dá)到良好實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范（GLP）和標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇和應(yīng)用、實(shí)驗(yàn)室條件、工作人員素質(zhì)、技術(shù)水平和操作方法都要求標(biāo)準(zhǔn)化?！?R”原則：目前在國內(nèi)外已被普遍關(guān)注和接受，它不但體現(xiàn)了對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的愛惜、保護(hù)和倫理道德，同

16、時(shí)也體現(xiàn)了科學(xué)地進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的觀念。,第十章 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部 鄭龍,一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備,（一） 嚴(yán)格遵守“3R”原則（二） 完善實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（三）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的選擇（四）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的購買（五）飼料、墊料、飲水的準(zhǔn)備,1,24,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法是多種多樣的，在生物醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)都有其不同的應(yīng)用，其中一些基本方法都是共性的，如動(dòng)物的抓取、固定、麻醉、脫毛、給藥、采血、處死等，不管是從事何種課題的生物醫(yī)學(xué)研

17、究都要用這套基本方法。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)和分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的除毛、給藥方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死動(dòng)物尸體及廢棄物的無害化處理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問題,二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù),第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定,小鼠大鼠豚鼠兔犬豬蟾蜍猴,一、小鼠抓取固定方法 抓取時(shí)先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒?yàn)臺(tái)向后拉，在其向前爬行時(shí)，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚

18、。以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。,二、大鼠的抓取固定方法抓取時(shí)為避免咬傷，可帶上帆布手套。用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指緊捏鼠背皮膚，置于左掌心中，這樣右手即可進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)操作。,大鼠的抓取也可伸開左手之虎口，迅速將拇指、食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中段，并將其保持仰臥位，調(diào)整左手拇指位置，緊壓在下頜骨上，注意不要過緊造成大鼠窒息。,大小鼠的固定：若做手術(shù)或解剖等，則需事先麻醉或處死，然后用細(xì)棉線繩縛腿

19、，背臥位綁在大鼠固定板上,大、小鼠尾靜脈注射,三、家兔 　 抓?。簩?shí)驗(yàn)家兔多數(shù)飼養(yǎng)在籠內(nèi)，所以抓取較為方便，一般以右手抓住兔頸部的毛皮提起，然后左手托其臀部或腹部，讓其體重重量的大部分集中在左手上，這樣就避免了抓取過程中的動(dòng)物損傷。注意事項(xiàng)：家兔比較馴服，不會(huì)咬人，但腳爪較尖，應(yīng)避免家兔在掙扎時(shí)抓傷皮膚。,不正確的家兔抓取方法,,家兔的固定方法可根據(jù)需要而采用：①盒式固定，常用作兔耳血管注射、采血或觀察兔耳血管變化，兔腦內(nèi)接種

20、等操作固定；②臺(tái)式固定，常用作兔靜脈采血或測量血壓、呼吸等實(shí)驗(yàn)和技術(shù)操作時(shí)的固定；,③架式固定，常用于作熱源試驗(yàn)時(shí)固定。,四、豚鼠 　豚鼠膽小易驚，抓取時(shí)必須穩(wěn)、準(zhǔn)、迅速。先用手掌扣住鼠背，抓住其肩胛上方，將手張開，用手指環(huán)握頸部，另一只手托住其臀部，即可輕輕提起、固定。,五、蟾蜍 　抓取蟾蜍時(shí)，可先在蟾蜍體部包一層濕布，用左手將其背部貼緊手掌固定，把后肢拉直，并用左手的中指、無名指及小指夾住，前肢可用拇指及食指壓住

21、，右手即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。抓取蟾蜍時(shí)不要擠壓兩側(cè)耳部突起的毒腺，以免蟾蜍將毒液射到使用者眼睛里。需要長時(shí)間固定時(shí)，可將蟾蜍麻醉或毀腦脊髓后，用大頭針釘在蛙板上。,,,六、狗 　用狗做實(shí)驗(yàn)時(shí)，為防止其咬傷操作人員，一般先將狗嘴綁住。對(duì)實(shí)驗(yàn)用狗，如畢格狗或馴服的狗，綁嘴時(shí)操作人員可從其側(cè)面靠近并輕輕撫摸頸部皮毛，然后迅速用布帶綁住狗嘴；對(duì)家養(yǎng)的笨狗或未經(jīng)馴服的狗，先用長柄捕狗狗夾夾住狗的頸部，將狗按倒在地，再綁嘴。,,七、豬,八、猴

22、 飼養(yǎng)人員可以用網(wǎng)罩捕捉籠內(nèi)飼養(yǎng)的獼猴。方法是以右手持短柄網(wǎng)罩，左臂緊靠門側(cè)，以防籠門敞開時(shí)獼猴逃出籠外。右手將網(wǎng)罩塞入籠內(nèi)，由上而下罩捕。在獼猴被罩到后，應(yīng)立即將網(wǎng)罩翻轉(zhuǎn)取出籠外，將猴罩在地上，由罩外抓住猴的頸部，輕掀網(wǎng)罩，再提取猴的手臂反背握住，此時(shí)，猴不能逃脫 。,第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)和分組,一、編號(hào) 　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常需要標(biāo)記以示區(qū)別。編號(hào)的方法很多，根據(jù)動(dòng)物的種類數(shù)量和觀察時(shí)間長短等因素來選擇合適的標(biāo)記方法。

23、 　(一)掛牌法：將號(hào)碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不銹鋼的,它可長期使用不生銹)，將號(hào)碼按實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)烙在栓動(dòng)物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動(dòng)物頸部。該法適用于狗等大型動(dòng)物。,(二)打號(hào)法：用刺數(shù)鉗(又稱耳號(hào)鉗)將號(hào)碼打在動(dòng)物耳朵上。打號(hào)前用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵，用耳號(hào)鉗刺上號(hào)碼，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用于耳朵比較大的兔、狗等動(dòng)物。 (三)針刺法：用七號(hào)或八號(hào)針頭蘸取少量碳素墨水

24、，在耳部、前后肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標(biāo)記。該法適用于大小鼠、豚鼠等。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量少的情況下，也可用于兔、狗等動(dòng)物。,(四)化學(xué)藥品涂染動(dòng)物被毛法：,這種標(biāo)記方法在實(shí)驗(yàn)室最常使用，也很方便。使用的顏料一般有3-5%苦味酸溶液（黃），2%硝酸銀（棕黃色）溶液和0.5%中性品紅（紅色），龍膽紫溶液（紫色）等。標(biāo)記時(shí)用毛筆或棉簽蘸取上述溶液，在動(dòng)物體的不同部位涂上斑點(diǎn)，以示不同號(hào)碼。,,,編號(hào)的原則是：先左后右，從上到下

25、。一般把涂在左前腿上的計(jì)為1號(hào)，左側(cè)腹部計(jì)為2號(hào)，左后腿為3號(hào)，頭頂部計(jì)為4號(hào)，腰背部為5號(hào)，尾基部為6號(hào)，右前腿為7號(hào)，右側(cè)腰部為8號(hào)，右后腿計(jì)為9號(hào)。,若動(dòng)物編號(hào)超過10或更大數(shù)字時(shí)，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個(gè)數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)，這種交互使用可編到99號(hào)，假使把紅的記為十位數(shù)，黃色記為個(gè)位數(shù)，那么右后腿黃斑，頭頂紅斑，則表示是49號(hào)鼠，其余類推。,,染色法多用于實(shí)驗(yàn)周期較短，動(dòng)物數(shù)量不多的情況。這種方法標(biāo)

26、號(hào)簡單，動(dòng)物無疼痛和損傷.。但由于動(dòng)物之間互相摩擦、舔毛，尿、水浸漬被毛或脫毛，或因日久顏色自行消退等原因，不宜用于長期的實(shí)驗(yàn)。此法主要用于大、小鼠、豚鼠和白色家兔。,(五)打耳孔法 打耳孔法是用專用打孔機(jī)直接在動(dòng)物耳朵上打孔編號(hào),根據(jù)打在耳朵上的部位和孔數(shù)來區(qū)分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的方法。也可用剪刀在動(dòng)物耳廓上剪缺口的方法。進(jìn)行上述操作時(shí)，動(dòng)物要進(jìn)行局部麻醉，打孔后打孔部位要進(jìn)行消毒。,,(六)耳標(biāo)法 將帶有號(hào)碼

27、的金屬耳標(biāo)于耳根部刺透固定,動(dòng)物可永久性攜帶。,（七)電子芯片法 目前國際比較流行的永久性標(biāo)記法，在動(dòng)物的頸背部皮下埋入預(yù)先編好號(hào)碼的微型集成電路片，用特種讀取數(shù)據(jù)的裝置進(jìn)行鑒別，方便讀取。可同時(shí)讀出動(dòng)物的編號(hào)和體溫。,貓、狗、鼠、寵物貂、金龍魚、鮭魚、馬、兔子等,（八）紋身法：使用電動(dòng)加墨器在動(dòng)物耳內(nèi)側(cè)無血管的部位、前胸被毛較少的部位或尾上印上墨汁，可終身標(biāo)記。,二、分組 1. 分組的原則：動(dòng)物分組應(yīng)按隨機(jī)分配的原則

28、，使每只動(dòng)物都有同等機(jī)會(huì)被分配到各個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中去，以避免各組之間的差別，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，特別是進(jìn)行準(zhǔn)確的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，必須在隨機(jī)分組的基礎(chǔ)上進(jìn)行。 每組動(dòng)物數(shù)量應(yīng)按實(shí)驗(yàn)周期長短、實(shí)驗(yàn)類型及統(tǒng)計(jì)學(xué)要求而定。如果是慢性實(shí)驗(yàn)或需要定期處死動(dòng)物進(jìn)行檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)，就要求選較多的動(dòng)物，以補(bǔ)足動(dòng)物自然死亡和認(rèn)為處死所喪失的數(shù)量，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)有合乎統(tǒng)計(jì)學(xué)要求的動(dòng)物數(shù)量存在。,2. 建立對(duì)照組。分組時(shí)應(yīng)建立對(duì)照組。（1）自身對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)動(dòng)

29、物本身在實(shí)驗(yàn)處理前、后兩個(gè)階段的各項(xiàng)相關(guān)數(shù)據(jù)就分別是對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，此法可排除生物間的個(gè)體差異。（2）平行對(duì)照組：陽性對(duì)照組：給實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物使用已知有效的某種處理手段或藥物；陰性對(duì)照組：與實(shí)驗(yàn)組采用同樣的方法進(jìn)行處理，但并不采用實(shí)驗(yàn)所要求的藥物或手段（如假手術(shù)或注射生理鹽水）；空白對(duì)照組：不給任何處理。,第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉方法,為了保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安全，消除實(shí)驗(yàn)過程中所致的疼痛和不適感覺，滿足動(dòng)物福利的要求，確保實(shí)驗(yàn)

30、順利進(jìn)行就要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行麻醉。 麻醉：表示知覺/感覺喪失。感覺喪失可以是局部性的，即體現(xiàn)在身體的某個(gè)部位，也可以是全身性的，即體現(xiàn)為病人全身知覺喪失，無意識(shí)。,（一）動(dòng)物的麻醉方法:全身麻醉和局部麻醉1．全身麻醉 （1）吸入法　氣體吸入麻醉的優(yōu)點(diǎn)是：動(dòng)物進(jìn)入麻醉快，蘇醒快，容易控制麻醉深度，安全性好。動(dòng)物的發(fā)病率和死亡率低，動(dòng)物手術(shù)的成功率高。乙醚麻醉兔及大鼠、小鼠，將動(dòng)物放入玻璃麻醉箱內(nèi)，把裝有浸潤乙醚棉球的小燒杯放入麻醉

31、箱，不久動(dòng)物出現(xiàn)異常興奮，不停地掙扎，隨后排出大小便。漸漸地動(dòng)物由興奮轉(zhuǎn)為抑制，倒下不動(dòng)，呼吸變慢。,,在繼續(xù)給藥過程中,時(shí)常檢查角膜反射和瞳孔大小。,（2）腹腔和靜脈給藥麻醉法腹腔給藥麻醉多用于大小鼠和豚鼠，較大的動(dòng)物如兔、狗等則多用靜脈給藥進(jìn)行麻醉。缺點(diǎn)是劑量不易掌握，劑量過大會(huì)造成動(dòng)物麻醉過度死亡，劑量過小動(dòng)物不能進(jìn)入麻醉狀態(tài)或較慢。所以在腹腔和靜脈麻醉時(shí)，一定控制藥物的濃度和注射量。麻醉劑注射動(dòng)物后，必須經(jīng)肝贓代謝完后，動(dòng)物

32、才蘇醒，所以麻醉時(shí)間長，不能調(diào)節(jié)。在注射麻醉藥物時(shí)，先用麻醉藥總量的2/3，密切觀察動(dòng)物生命體征的變化，如已達(dá)到所需麻醉的程度，余下的麻醉藥則不用，避免麻醉過深抑制延腦呼吸中樞，導(dǎo)致動(dòng)物死亡。,2. 動(dòng)物局部麻醉方法：局部麻醉（local anaesthesia）是應(yīng)用局部麻醉藥暫時(shí)阻斷身體某一區(qū)域的神經(jīng)傳導(dǎo)而產(chǎn)生麻醉作用，簡稱局麻。局麻簡便易行，安全性大，能保持動(dòng)物清醒，對(duì)生理功能干擾小，并發(fā)癥少。適用于較表淺局限的中小型手術(shù)。

33、局部麻醉包括表面麻醉，局部侵潤麻醉，區(qū)域麻醉，神經(jīng)阻滯。,（二）、常用的麻醉藥1. 常用局部麻醉劑。普魯卡因，此藥毒性小，見效快，常用于局部浸潤麻醉，用時(shí)配成0.5％～1％溶液；利多卡因，此藥見效快，組織穿透性好，常用0.25％～0.5％溶液。2. 常用全身麻醉劑（1）乙醚：乙醚吸入法是最常用的麻醉方法，各種動(dòng)物都可應(yīng)用。乙醚麻醉的優(yōu)點(diǎn)多，如麻醉深度易于掌握，比較安全，而且麻醉后恢復(fù)比較快。,由于乙醚局部刺激作用大，可刺激上呼吸

34、道黏液分泌增加，通過神經(jīng)反射擾亂呼吸、血壓和心臟的活動(dòng)，并且容易引起窒息，在麻醉過程中要注意。需在麻醉前給予一定量的嗎啡和阿托品（基礎(chǔ)麻醉），通常在麻醉前20～30min，皮下注射鹽酸或硫酸嗎啡（每公斤體重5～10mg）及阿托品（每公斤體重0.1mg）。 其他：異氟烷、恩氟烷、地氟烷、七氟烷，氧化亞氮等。,（2）戊巴比妥鈉：此藥麻醉時(shí)間不很長，一次給藥的有效時(shí)間可延續(xù)3～5h，所以十分適合一般實(shí)驗(yàn)要求。給藥后對(duì)動(dòng)物循環(huán)和呼吸系

35、統(tǒng)無顯著抑制作用，藥品價(jià)格也很便宜。用時(shí)配成1％～３％生理鹽水溶液，必要時(shí)可加溫溶解，配好的藥液在常溫下放置1～2月不失藥效。戊巴比妥鈉是最常用的麻醉劑，有獸用、人獸共用的產(chǎn)品，使用時(shí)應(yīng)注意藥品質(zhì)量。,（3）硫噴妥鈉： 硫噴妥鈉為超速效巴比妥類藥物，為淡黃色粉末，有硫臭，易吸水，裝在安瓿中保存。其水溶液不穩(wěn)定，故必須臨時(shí)配制，常配濃度為1％～5％，在4℃冰箱中保存，在室溫中則只能保存24h。該藥麻醉誘導(dǎo)和蘇醒時(shí)間短，一次用

36、藥僅可維持0.5-1h。因此，一般用作為誘導(dǎo)麻醉或基礎(chǔ)麻醉。其副作用：對(duì)呼吸系統(tǒng)有明顯的抑制作用，不宜與嗎啡合用。,(4) 氨基甲酸乙酯(烏拉坦)： 氨基甲酸乙酯（urethane）又名烏拉坦、烏來糖。可導(dǎo)致較持久的淺麻醉，對(duì)呼吸無明顯影響。常用于免、貓、狗、蛙等動(dòng)物。氨基甲酸乙酯對(duì)兔的麻醉作用較強(qiáng)，是家兔急性實(shí)驗(yàn)常用的麻醉藥。對(duì)貓和狗則奏效較慢，誘發(fā)大鼠和兔產(chǎn)生腫瘤，需長期存活的慢性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最好不用它麻醉。 

37、60;  本藥易溶于水，使用時(shí)可配成20%～25%的溶液。優(yōu)點(diǎn)：價(jià)廉，使用簡便，安全范圍大，一次給藥可維持4-5h，且麻醉過程較平穩(wěn)，動(dòng)物無明顯掙扎現(xiàn)象。缺點(diǎn)：蘇醒慢，麻醉深度和使用劑量較難掌握。,麻醉成功標(biāo)志,角膜反射遲鈍或消失,,肢體肌肉松弛,疼痛反射消失,呼吸變深變慢,三、使用全身麻醉劑的注意事項(xiàng)1．麻醉劑用量。使用麻醉劑除參照一般標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)考慮個(gè)體對(duì)藥物的耐受性。一般說，衰弱和過胖的動(dòng)物，其單位體重所需劑量較小，

38、在使用麻醉劑過程中，隨時(shí)檢查動(dòng)物的反應(yīng)情況。2．動(dòng)物在麻醉期體溫容易下降，要采取保溫措施。保溫的方法有，電褥、臺(tái)燈照射等。3．靜脈注射必須緩慢，配制的藥液濃度要適中不可過高。同時(shí)觀察肌肉緊張、角膜反射和對(duì)皮膚夾捏的反應(yīng)。4．在寒冷冬季做慢性實(shí)驗(yàn)時(shí)，麻醉劑在注射前應(yīng)先加熱至動(dòng)物體溫水平。,,第四節(jié) 動(dòng)物除毛和給藥的方法,一、除毛方法1. 剪毛法。將動(dòng)物固定后，先用蘸有水的紗布把被毛浸濕，再用剪毛剪緊貼皮膚剪去被毛。給犬、羊等

39、動(dòng)物采血常用此法。2. 拔毛法。用拇指和食指拔去被毛的方法。在兔耳緣靜脈注射或尾靜脈注射時(shí)常用此法。,3. 剃毛法。剃毛法是用剃毛刀剃去動(dòng)物被毛的方法。如動(dòng)物被毛較長，先要用剪刀將其剪短，再用刷子蘸溫肥皂水將剃毛部位浸透，然后再用剃毛刀除毛。本法適用于暴露外科手術(shù)區(qū)。4. 脫毛法。脫毛是指用化學(xué)脫毛劑將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被毛脫去，適用于無菌手術(shù)的準(zhǔn)備以及觀察動(dòng)物皮膚血液循環(huán)和病理變化。方法：首先將被毛剪短，然后用棉球蘸取脫毛劑，在所需部位涂一

40、薄層，2～3min后用溫水洗去脫落的被毛，用紗布輕輕擦干備用，小心不要損傷皮膚。,常用的脫毛劑配方：（1）硫化鈉3g、肥皂粉1g、淀粉7g，加水適量調(diào)成糊狀。（2）硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、硼砂1g,加水75ml。（3）硫化鈉8g,溶于100ml水中以上三種配方適合于家兔、大鼠、小鼠等小動(dòng)物的脫毛。（4）硫化鈉10g、生石灰15g，溶于100ml水中，此配方適用于犬等大動(dòng)物的脫毛。純硫化鈉為無色結(jié)晶粉末。吸潮性強(qiáng)，易溶于

41、水。水溶液呈強(qiáng)堿性反應(yīng)。觸及皮膚和毛發(fā)時(shí)會(huì)造成灼傷，對(duì)皮膚和眼睛有腐蝕作用，故硫化鈉俗稱硫化堿 。受撞擊或急速加熱可發(fā)生爆炸。遇酸分解，放出劇毒的易燃?xì)怏w。該品在胃腸道中能分解出硫化氫，口服后能引起硫化氫中毒。,二、給藥方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，需將藥物通過一定的途徑給入到動(dòng)物體內(nèi)，才能觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)藥物的反應(yīng)。給藥的途徑和方法是多種多樣的，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類、敏感途徑和藥物類型等情況而定。注射給藥: 皮下、 皮內(nèi)、 肌肉、 腹

42、腔、 靜脈 ……經(jīng)口給藥: 口服 、灌胃呼吸給藥：粉塵 、氣霧皮膚給藥：涂抹其他方法：脊髓腔、腦內(nèi)、關(guān)節(jié)腔、直腸……,1. 注射給藥法（1）皮下注射：皮下注射較為簡單，一般選取背部皮下及后肢皮下。注射時(shí)用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入，把針尖輕輕向左右擺動(dòng)，容易擺動(dòng)則表明已刺入皮下，然后注射藥物，拔針時(shí)，輕按針孔片刻，以防藥液逸出。。,（2）皮內(nèi)注射：此法用于觀察皮膚血管的通透性變化或觀察皮內(nèi)反應(yīng)。方

43、法是：將動(dòng)物注射部位的毛剪去，消毒后，左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器細(xì)針頭，緊貼皮膚皮層刺入皮內(nèi)，然后使針頭向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液。注射后因局部皮膚缺血，在注射部位可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘，為防止藥液外溢，最好使用棉簽輕按片刻。,（3）肌肉注射：當(dāng)給動(dòng)物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)，常采用肌肉注射。肌肉注射一般選用肌肉發(fā)達(dá)、無大血管經(jīng)過的部位。如猴、狗、貓、兔可注入兩側(cè)臀部或

44、股部肌肉。大鼠、小鼠、豚鼠因其肌肉較小，不常作肌肉注射，如需肌注，可注射入大腿外側(cè)肌肉。用5～6號(hào)針頭注射，小鼠每腿不超過入0.1ml。為防止藥物進(jìn)人血管，注藥液之前要回抽針?biāo)?，如無回血?jiǎng)t可注藥，注射完畢后用手輕輕按摩注射部位，幫助藥物吸收。,（4）腹腔注射：先將動(dòng)物固定，腹部用酒精棉球擦拭消毒，然后在左或右側(cè)腹部將針頭刺入皮下，沿皮下向前推進(jìn)約0.5cm，再使針頭與皮膚呈45°角方向穿過腹肌刺入腹腔，此時(shí)有落空感，回抽無

45、腸液、尿液后，緩緩?fù)迫胨幰骸４朔ㄔ诖笮∈笫褂幂^多。,（5）靜脈注射：是將藥液直接注射于靜脈管內(nèi)，使其隨著血液分布全身，迅速發(fā)揮效用。1. 小鼠、大鼠的靜脈注射：常采用尾靜脈注射。鼠尾靜脈共有3根，左右兩側(cè)和背側(cè)各1根，兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，故常被采用。操作時(shí)，先將動(dòng)物固定在暴露尾部的固定器內(nèi)，用75％酒精棉球反復(fù)擦拭使血管擴(kuò)張，并可使表皮角質(zhì)軟化。,以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，注射時(shí)針頭盡量采取與尾部平行的角度進(jìn)針。開

46、始注射時(shí)宜少量緩注，如無阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，這時(shí)用左手指將針和尾一起固定起來，便可進(jìn)行注射。 如有白色皮丘出現(xiàn)，說明未穿刺入血管，應(yīng)重新向尾部方向移動(dòng)針頭再次穿刺。如需反復(fù)注射，盡量從尾的末端開始。一次的注射量為0.1～0.2ml/10g體重。,2. 兔的靜脈注射：一般采用外耳緣靜脈。將兔置固定盒內(nèi)或由助手固定好動(dòng)物，操作者將注射部位的毛拔去并用酒精棉輕輕擦拭耳部外緣，靜脈即明顯可見。先由耳尖部靜脈注射，若失

47、敗，再逐步向耳根移動(dòng)重新注射。注射完畢抽出針頭時(shí)，應(yīng)壓迫針孔，避免出血。,75%酒精消毒，手指輕彈兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近心端，拇指繃緊遠(yuǎn)心端。右手從靜脈的遠(yuǎn)端刺入血管，移動(dòng)拇指于針頭上固定，放開食指、中指，將藥液注入。,3. 豚鼠的靜脈注射： 耳緣靜脈注射、跖靜脈注射、舌下靜脈注射。,4. 犬的靜脈注射：前肢外側(cè)皮下頭靜脈：位于前腳爪的上方背側(cè)的正前位。后肢外側(cè)的小隱靜脈：位于后肢脛部下三分之一的外側(cè)淺

48、表皮下，由前側(cè)方向后行走。注射部位除毛后，在靜脈血管的近心端用橡皮帶扎緊，使血管充盈，從靜脈的遠(yuǎn)心端將注射針頭平行血管刺入，回抽注射器針?biāo)ǎ缬谢匮?，即可放開橡皮帶，將藥液緩緩注入。,幾種動(dòng)物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）,2. 經(jīng)口給藥法（1）口服法：把藥物放入飼料或溶于飲水中讓動(dòng)物自動(dòng)攝取。此法優(yōu)點(diǎn)在于簡單方便，缺點(diǎn)是不能保證劑量準(zhǔn)確。 一般適用于對(duì)動(dòng)物疾病的防治或某些藥物的毒性實(shí)驗(yàn)，制造某些與食物有關(guān)的人類疾病動(dòng)物模

49、型。,二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大鼠肝癌 ；黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌：每日飼料中含0.001～0.015ppm，混入飼料中喂6個(gè)月后，肝癌誘發(fā)率達(dá)80%。,（2）灌胃法：灌胃法是用灌胃器將所應(yīng)投給動(dòng)物的藥灌到動(dòng)物胃內(nèi)。灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構(gòu)成或直接采用灌胃管。灌胃針的尖端焊有一小圓金屬球，金屬球?yàn)橹锌盏?。焊金屬球的目的是防止針頭刺入氣管或損傷消化道。針頭金屬球端彎曲成20°左右的角度，以適應(yīng)口腔、食道的生理彎曲度走向。,

50、鼠類的灌胃法：用左手固定鼠，右手持灌胃器，將灌胃針從鼠的口腔插入，壓迫鼠的頭部，使口腔與食道成一直線，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食道，可感到輕微的阻力，此時(shí)可略改變一下灌胃針方向，以刺激引起吞咽動(dòng)作，順勢將藥液注入。 一般灌胃針插入小鼠食道深度為3～4cm，大鼠或豚鼠為4～6cm。常用灌胃量小鼠為0.2～1ml，大鼠1～4ml，豚鼠1～5ml。注意在插入以后如果針頭不在食管內(nèi)，則動(dòng)物劇烈掙扎，此時(shí)應(yīng)拔出重新操作。,一篇博士生

51、論文，講的是用中藥湯劑，治療裸鼠移植性腫瘤。具體方法為，每次 3ml灌胃，每天 3 次，10天后腫瘤體積減少，得出結(jié)論為治療有效。 成年小鼠一般體重 40g，胃容量0.8-1.5ml，一天的量為9ml。40kg人，每天得喝 9L 湯藥。 小鼠肯定痛苦不堪，迅速消瘦，腫瘤細(xì)胞較正常組織對(duì)營養(yǎng)的依賴更大，變小是肯定的，但不是湯藥的作用，是“饑餓療法”的結(jié)果。,,,家兔灌胃用開口器及灌胃器 一次灌胃量：80-10

52、0ml灌胃管：14號(hào)導(dǎo)尿管,,,犬灌胃方法一次灌胃量：200-250ml,豬灌胃方法,3. 其他途徑給藥方法（1）呼吸道給藥：粉塵型藥或噴霧使用的藥物或需要通過氣溶膠感染的方式進(jìn)行微生物感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要呼吸道給藥。如實(shí)驗(yàn)時(shí)給動(dòng)物做乙醚吸入麻醉、用鋸末煙霧制作慢性氣管炎動(dòng)物模型等，特別在毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較廣泛。,（2）皮膚給藥：為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如兔和豚鼠

53、常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定的藥液涂在皮膚上，觀察藥液經(jīng)皮膚吸收的反應(yīng)。,三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量的確定及計(jì)算方法 觀察一種藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的作用時(shí)，一個(gè)重要的問題就是給動(dòng)物用多大的劑量較合適。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動(dòng)物中毒致死。1、動(dòng)物給藥量的確定 （1） 先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一作為應(yīng)用劑量，一般可取1/10～1/

54、5。,（2）確定劑量后，如第一次用藥的作用不明顯，動(dòng)物也沒有中毒的表現(xiàn),可以加大劑量再次實(shí)驗(yàn)。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實(shí)驗(yàn)。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強(qiáng)。所以有條件時(shí)，最好同時(shí)用幾個(gè)劑量作實(shí)驗(yàn)，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強(qiáng)度之間毫無規(guī)律時(shí)，則更應(yīng)慎重分析。 （3）用大動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),為防止動(dòng)物中毒死亡,開始的劑量可采用鼠類的1/15～1/2

55、,以后可根據(jù)動(dòng)物的反應(yīng)調(diào)整劑量。,（4）確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)，要考慮動(dòng)物的年齡和體質(zhì)，一般來說確定的給藥劑量是成年動(dòng)物的劑量，如是幼齡動(dòng)物，劑量應(yīng)減少。 犬：＞6月 1份藥量 3～6月 1/2份 45日～89日 1/4份 20日～44日 1/8份 10～19日

56、 1/16份,,（5）確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同。 口服量 100 皮下注射量 30～50 肌肉注射量 20～30 靜脈注射量 25,,2、用藥量換算方法 (1) 人與動(dòng)物對(duì)同一藥物耐受性不同，一般動(dòng)物的耐受性要比人大，單位體重的用藥量動(dòng)物比人要高。必須將人的用藥量換算成動(dòng)物的用藥量。一般可按下列比例換算： 人用藥量

57、： 1 小鼠、大鼠： 25～50 兔、豚鼠： 15～20 狗、貓： 5～10 以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途徑為靜脈、皮下、腹腔注射，換算比例應(yīng)適當(dāng)減小些。,舉例：一個(gè)成年人按60kg體重，口服藥物需12ml；200g大鼠灌胃量為多少？

58、 12／60× 200／1000＝0.04ml 0.04 ×（25-50）=1-2ml,按動(dòng)物體表面積計(jì)算的方法: 人的體表面積跟體重有關(guān)系,動(dòng)物的體表面積也與體重有關(guān)系。動(dòng)物的用藥量可以通過體表面積進(jìn)行換算，Meeh-Rubner公式如下： A＝K×（W2／3／10000）　　　　 A＝體表面積， m2

59、 W=體重，ｇ　 　 　K=常數(shù)：　 小鼠、大鼠＝9.1, 豚鼠=9.8, 家兔=10.1, 貓=9.8, 犬 =11.2, 猴＝11.8, 人＝10.6,,,舉例: 試計(jì)算體重1.5kg家兔的體表面積？ A=10.1 ×(15002/3/10000） 計(jì)算得 A＝0.1324m2,舉例: 某藥物大

60、鼠灌胃的劑量為250mg/kg,試估計(jì)狗灌胃計(jì)量？ 一般大鼠的體重為200g ,狗體重按10kg： A大鼠 = 9.1 ×(200 2/3 /10000)=0.0311m2 A 狗 ＝11.2 ×(10000 2/3 /10000)=0.5198m2 大鼠250mg/kg的劑量換算成mg/ m2 : 250 ×200/1000/0.0311=1608mg/

61、m2 1608mg/m2 × 0.5198m2 =835.8 mg (10kg狗的灌胃量） 835.8 mg ／10kg＝84mg/kg ( 換算成mg/kg).,第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血法,實(shí)驗(yàn)研究中，經(jīng)常要采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量檢測、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)或生物化學(xué)分析，故必須掌握正確的采集血液的技術(shù)。采血方法的選擇，主要由實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮退柩考皠?dòng)物種類決定。,采血對(duì)機(jī)體的影響 血糖水平、皮質(zhì)類固醇

62、激素、催乳激素、腎上腺素、生長激素、胰島素、血管緊張肽酶原和血清酶類。 低于10％的血量喪失，動(dòng)物通常無明顯臨床癥狀；15-20％的血量喪失動(dòng)物出現(xiàn)動(dòng)脈壓和心血輸出量下降；血液進(jìn)一步喪失，則心輸出量、血壓和組織灌流量均下降，嚴(yán)重時(shí)發(fā)展為失血性休克，甚至威脅生命。 介入性采血對(duì)動(dòng)物的影響不僅是血容量的喪失，血液喪失的比率、采血位置和方法、技術(shù)人員的熟練程度、麻醉的種類、動(dòng)物的年齡和性別、動(dòng)物的營養(yǎng)和健康狀況均為重要因素。,采血量

63、 10％-10％規(guī)則，實(shí)際上，大多數(shù)動(dòng)物的血容量不到體重的10％； 一般單次采血量不高于全身血容量的10％，短期的反復(fù)采血（間隔24h)，每次采血量不宜超過全血量的1％，每周采血8％，其血紅蛋白需數(shù)周才能恢復(fù)至正常濃度。 200g大鼠，按7.4％，全血容量14.4ml，單次采血1.4ml是安全的，反復(fù)采血每次不宜超過0.14ml。,動(dòng)物采血量的確定,在一項(xiàng)猴動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，要求每次采血10ml/次，一周3次，連續(xù)3月。這

64、點(diǎn)血對(duì)人來說不算什么，對(duì)4kg的猴是不可以的。4kg的猴血量大致350ml，算一算就知道為什么不行了。,,施新遒主編 《醫(yī)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》,,,一、大鼠、小鼠的采血方法1.尾部采血尾側(cè)靜脈采血：大鼠，0.5-1ml 大鼠置固定器中-----以手指、橡膠繩或曲別針對(duì)位根部施壓-----采血部位消毒-----以空針刺入側(cè)面尾靜脈-----放開止血帶、血液流出（去除針頭的空針連接口讓血液自然流出可減少溶血----拔出針頭、紗

65、布止血,腹側(cè)尾動(dòng)脈采血：1－1.5ml 大鼠置固定器中或乙醚麻醉-----背側(cè)臥----- 用手壓住距尾尖5cm處至動(dòng)脈清晰可見-----在按壓手指前1-2cm處進(jìn)針-----采血后紗布按壓止血,尾靜脈切口采血：小鼠、大鼠，0.1-0.2ml 固定器固定，在距尾尖1cm處消毒后，以刀片在尾側(cè)面切口可取少量血液，通常輕壓即可止血。剪尾采血：固定器固定，將尾尖剪去約5mm，從尾根部向尾尖部按摩，血即從斷端流出。用此法每只鼠可

66、采血10余次。小鼠可每次采血約0.1ml，大鼠約0.4ml。需血量很少時(shí)常用本法，如做紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù) 、血紅蛋白測定、制作血涂片等可用此法。注意：以上方法在采血前以溫水加熱幾分鐘，均可促進(jìn)血液流出。,2. 眼眶后靜脈叢采血：穿刺采用毛細(xì)管。左手拇指及食指抓住鼠兩耳之間的皮膚使鼠固定，并輕輕壓迫頸部兩側(cè)，使眼球充分外突。右手持取血管，將其尖端插入內(nèi)眼角與眼球之間，刺入Tenon筋膜，然后由鼻側(cè)眼眶平行地對(duì)喉頭方向推進(jìn)，深約4-5mm，到

67、達(dá)后眼眶靜脈叢，血液自然進(jìn)入吸管內(nèi)。采血結(jié)束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。,用本法在短期內(nèi)可重復(fù)采血。小鼠一次可采血0.2～0.3ml，大鼠一次可采血0.5～1.0ml。,3. 頸(股)靜脈或頸(股)動(dòng)脈采血：鼠經(jīng)麻醉后，做頸靜脈或頸動(dòng)脈分離術(shù)，用注射器抽出所需血量；剪開腹股溝處皮膚，即可看到股靜脈，把此靜脈剪斷或用注射器采血即可，股動(dòng)脈較深需先剝離，再采血。,4. 摘眼球采血：用左手固定動(dòng)物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用鑷

68、子或止血鉗迅速摘除眼球，眼眶內(nèi)很快流出血液。5.心臟采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（開胸）或多次采血（不開胸）。,6.肝門靜脈、腹主動(dòng)脈采血最好先將動(dòng)物麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上，從腹正中線皮膚切開腹腔，使門靜脈或腹主動(dòng)脈清楚暴露，用注射器吸出血液。或用無齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動(dòng)脈近心端，用尖頭手術(shù)剪刀，剪斷動(dòng)脈，使血液噴入容器。,二、豚鼠采血方法1.耳緣剪口采血將耳消毒后，用銳器（刀或刀片）割破耳緣，在切口邊緣涂抹20%檸檬