第四章 動物檢疫技術(shù)

1、流行病學調(diào)查,動物檢疫技術(shù),臨診檢疫技術(shù),病理學檢查技術(shù),病料的采集,病原學檢查技術(shù),免疫學檢查技術(shù),內(nèi)容提要,,第一節(jié) 流行病學調(diào)查,概念：俗稱疫情調(diào)查，是對動物群體中疫病發(fā)生和流行的情況以及有關(guān)因素進行調(diào)查了解。,可通過詢問、現(xiàn)場查看、實驗室檢查、查驗資料等多種方式，全面掌握相關(guān)資料,主要目的：監(jiān)測疫情動態(tài)和突發(fā)疫情診斷，科學制定防控對策,,,（一）日常調(diào)查：在動物群體未爆發(fā)疫情時開展的調(diào)查工作，以了解和掌握某區(qū)域、某時間內(nèi)動物疫情

2、動態(tài)。,一、調(diào)查的分類和內(nèi)容,如：某地區(qū)綿羊寄生蟲區(qū)系分布調(diào)查，意在了解綿羊寄生蟲感染情況，并證實當?shù)卮嬖诘募纳x蟲種，針對性的采取驅(qū)蟲措施。,主動調(diào)查、預先設定方案、確定專題和范圍,畜禽保健的重要工作,1.普查,對某區(qū)域或某特定動物群體中全部動物進行的調(diào)查， 如每年春季或秋季進行牛結(jié)核病和布氏桿菌病的普查；在多雨年份的秋季對全部奶牛進行肝片吸蟲病的檢查。,2.抽樣調(diào)查,是從全部研究對象中隨機抽選一部分動物個體或群體（即樣本）進行調(diào)查，

3、并據(jù)此對該區(qū)域疫情作出估計和推斷。以少窺多，是經(jīng)常應用的調(diào)查方法。,,,（二）暴發(fā)（應急）調(diào)查,應急調(diào)查——是指動物群體突發(fā)某種疫病時所開展的調(diào)查。 這種調(diào)查時被動調(diào)查，是必須進行的工作，其目的是診斷疫情和查明原因。 目的：了解疫病流行全過程以及與流行有關(guān)的因素，獲取相關(guān)疫病的第一手感性材料，并對材料進行統(tǒng)計、分析，做出診斷性推理。 暴發(fā)調(diào)查是診斷性調(diào)查和病因調(diào)查。,應急調(diào)查的內(nèi)容：本次發(fā)病情況調(diào)查、病史調(diào)查、養(yǎng)殖場基本

4、情況調(diào)查和環(huán)境因素調(diào)查。,重點：要查明疫病在蓄間、時間和空間的分布情況，即調(diào)查發(fā)病畜群的情況、發(fā)生的時間和發(fā)生的地區(qū)，初步得出診斷印象，提出防控對策。,調(diào)查過程,二、調(diào)查方式和方法,1.詢問調(diào)查：最簡單、最重要的方法。了解發(fā)病經(jīng)過、 病史、飼養(yǎng)管理、防疫、生產(chǎn)性能等因素。 2.現(xiàn)場觀察：根據(jù)可能的疫病傾向，有重點的實地檢查。

5、 如：疑似胃腸道消化系統(tǒng)時，應側(cè)重注意觀 察飼料品質(zhì)、水源衛(wèi)生、糞便形狀和尸體等； 疑似呼吸系統(tǒng)疾病時，應注意觀察畜舍環(huán)境 衛(wèi)生、飼養(yǎng)密度、通風換氣等情況。 3.查驗有關(guān)資料：查驗養(yǎng)殖

6、檔案、用藥記錄、畜禽標識等。,4.實驗室檢查：采取病料送實驗室檢查，以發(fā)現(xiàn)病原、確定動物群體免疫水平或有關(guān)病因因素。確定傳染源或傳播媒介。5.生物統(tǒng)計：在疫情調(diào)查時可以應用生物統(tǒng)計學的方法，統(tǒng)計、整理和分析收集到的各種數(shù)據(jù)如發(fā)病數(shù)、死亡數(shù)、屠宰量及預防接種頭數(shù)等，進一步比較，總結(jié)得出相應結(jié)論。,三.流行病學調(diào)查常用的數(shù)、率、比,數(shù)：即數(shù)量，指絕對數(shù)。在疫情調(diào)查過程中，常用一些具體數(shù)據(jù)來描述疫情現(xiàn)狀，如存欄數(shù)、發(fā)病數(shù)、死亡數(shù)等。

7、 率：指一定時間、范圍及群體內(nèi)，事件發(fā)生的頻率。如發(fā)病率、致死率、患病率等。常用百分率來表示。 比：是表示事件發(fā)生過程中，兩個變數(shù)之間的對比。常用倍數(shù)或百分數(shù)表示，與率不同的是分母不包括分子。注意：比和率。,,,1.發(fā)病率：在一定時間內(nèi),某動物群體中某病的發(fā)病動物數(shù)占該群體動物總數(shù)的百分率。,,,常用的率、比,2.感染率：所有畜禽感染數(shù)量，包括隱性感染畜禽，占所有被檢查的畜禽總數(shù)的百分比。調(diào)查統(tǒng)計感染率能客觀反映動物群體被病原污染情

8、況，特別是在發(fā)生某些慢性疫?。ㄈ缃Y(jié)核、布病等）時，做感染率調(diào)查統(tǒng)計對疫病凈化有實際意義。,3.患病率：在一定時間內(nèi),某動物群體中某病的患病動物數(shù)占該群體動物總數(shù)的百分率。,患病率和發(fā)病率的區(qū)別：發(fā)病率的分子包括某病新病例正在發(fā)病的數(shù)、已經(jīng)死亡數(shù)及痊愈數(shù)。患病率的分子只含正在患病的數(shù)量，不包括死亡數(shù)及痊愈數(shù)。,4.死亡率：在一定時間內(nèi),某動物群體中因某病死亡的動物數(shù)占該群體動物總數(shù)的百分率。,5.病死率(致死率)：在一定時間內(nèi),某動

9、物群體中因某病死亡的動物數(shù)占該病患病動物總數(shù)的百分率。,,,,,6.死亡比：在一定時間內(nèi),某動物群體中因某病死亡的動物數(shù)與因其他病而死亡的動物總數(shù)之比。,死亡比=因某病死亡動物數(shù)/因其他病死亡動物總數(shù),7.發(fā)病比：指某時期某動物群體內(nèi)，因患某病而死亡的動物數(shù)與因其他病而死亡的動物總數(shù)之比。發(fā)病比=某病動物數(shù)/因其他病死亡動物總數(shù),練習題：1.2007年某養(yǎng)豬場爆發(fā)了豬高致病性藍耳病，全場15000頭瘦肉型仔豬發(fā)病11000頭，其

10、中因該病死亡9500頭。請你分別計算出該養(yǎng)豬場2007年豬高致病性藍耳病的發(fā)病率、死亡率、致死率各是多少？,第二節(jié) 臨診檢疫技術(shù),臨診檢疫是動物檢疫最基本的方法。利用人的感官或借助簡單的器械如聽診器、體溫計，對動物群體或個體進行視診、觸診、叩診、聽診和體溫測定。,群體檢疫——是指對待檢動物群體進行的現(xiàn)場檢疫。 目的：從群體中挑出患病動物和可疑患病動物， 以便進一步做個體檢疫。 (一)群體檢疫的組織 1.群

11、體劃分 同場、同圈(舍)，或同一產(chǎn)地來源的，劃為一群。 同車、同船、同機運輸?shù)膭潪橐蝗骸?小動物如禽、兔還可按籠、箱劃群。 在畜群過大時,要適當分群,以利于檢查。,一、群體檢疫,,,2.檢疫順序 大群→小群；幼年→成年；種用畜群→其它用途的；健康→染病畜群3.檢疫時間 放牧的：跟群檢疫.舍飼的：飼喂時檢疫。反芻動物：飼后安靜時檢疫.乳牛：擠乳時檢疫.產(chǎn)地和口岸隔離檢疫：按規(guī)定在規(guī)定時間完成必檢項目。,(

12、二)群體檢疫的方法和內(nèi)容,1.靜態(tài)觀察,靜態(tài)觀察是在動物安靜休息,完全保持自然狀態(tài)下,觀察其站立、睡臥姿勢；精神狀態(tài)；營養(yǎng)程度和呼吸、反芻等基本生理活動現(xiàn)象。注意有無異常站立、睡臥姿勢,有無咳嗽、喘息、呻吟、流涎、嗜睡、孤立一隅等反常現(xiàn)象。,2.動態(tài)觀察,經(jīng)靜態(tài)觀察之后,將被檢動物驅(qū)趕起來,觀察其自然活動和驅(qū)趕活動。重點看起立、運動的姿勢與步態(tài)；精神狀態(tài)。注意有無不愿起立,不能起立或起立困難以及跛行、步態(tài)蹣跚、轉(zhuǎn)圈、共濟失調(diào)、曲背弓腰

13、、離群掉隊及運動后咳嗽、喘氣等病態(tài)。,3.飲食觀察,目的在于檢查動物的食欲和口腔疾病?？梢杂^察動物自然采食飲水動作,亦可有意少給食物看其搶食行為。從中發(fā)現(xiàn)不食不飲、少食少飲、吞咽困難和退槽、嘔吐、流涎等可疑患病動物。,通過以上群體檢疫,從大群動物中挑揀出有病態(tài)的動物,隔離后進一步進行個體檢疫。,,,個體檢疫——是對群體檢疫時檢出的可疑病態(tài)動物進行詳細和系統(tǒng)的臨診檢查。 若群體檢疫沒有發(fā)現(xiàn)病態(tài)動物,亦應抽查5%～20％的動物作個

14、體檢疫。若抽查發(fā)現(xiàn)檢疫對象,再抽檢10％,必要時對全群動物逐一進行復查。,二、個體檢疫,,,(一)視診 1.看精神狀態(tài):健康動物靜止時安靜,雙眼有神，行動時靈活,動作協(xié)調(diào)，對各種外界刺激敏感。 患病動物常常表現(xiàn)為精神興奮或抑郁。 精神興奮：呼吸心跳加快，外界刺激反應強烈，如刨地掙韁、嚎叫反抗、亂沖亂撞，攻擊人畜，多見于腦膜炎。 精神抑郁：沉郁、離群呆立、頭低耳耷、閉目縮頸、反應遲鈍。,二、個體檢疫,個體檢疫的方法和內(nèi)

15、容如下:,2.檢查被毛和皮膚,被毛檢查：健康畜禽的被毛整齊柔順，潔凈而有光澤；不健康畜禽毛不潔，粗亂無光澤，容易脫落。如患有慢性消耗性疾病(如結(jié)核病)或外寄生蟲病《如癬)時，被毛粗長、變脆、易脫落。皮膚檢查：健康畜禽的皮膚溫濕度、彈性、顏色正常且無其他病變。患病畜禽因疾病不同可能出現(xiàn)皮膚發(fā)紺、出血、壞死、痂皮、痘疹、水皰、脫毛等。如亞急性豬丹毒，皮膚出現(xiàn)圓形、方形、菱形有熱感的紅色疹塊，指壓褪色。,冠、肉髯檢查：健康雞的冠、肉髯呈紅色

16、，表面光滑潔凈。呈蒼白顏色是貧血的表現(xiàn)； 呈藍紫顏色是敗血癥表現(xiàn)，如雞新城疫和 禽霍亂；表面有結(jié)痂、豆樣凸起時，多見于雞痘或皮膚型馬立克氏病。,營養(yǎng)狀態(tài)檢查:★ 營養(yǎng)狀況：肌肉的豐滿度、皮下脂肪的蓄積量★ 營養(yǎng)良好：肌肉豐滿,皮下脂肪肥厚,被毛平順光亮,軀體輪廓豐圓?！餇I養(yǎng)不良：消瘦，被毛蓬亂無光，骨骼表露、被毛狀況三方面觀察明顯。,3.檢查姿態(tài)步態(tài)：健康動物姿態(tài)自然，步態(tài)穩(wěn)健、靈活、協(xié)調(diào)?；疾游锿憩F(xiàn)出一

17、些異常的姿態(tài)與步態(tài)：如跛行、轉(zhuǎn)圈、木馬狀、伏臥不起、頭頸扭轉(zhuǎn)、角弓反張、癱瘓、抽搐、站立不穩(wěn)、犬坐姿勢、兩耳下垂等。4.看呼吸情況：健康動物呼吸動作勻稱，呈胸腹式呼吸，呼吸次數(shù)正常。如果動物呼吸急促或微弱、腹式呼吸、張口伸舌、前肢外展、呼吸伴有咳嗽或其他異常音響，則為患病的標志。,5.檢查可視黏膜：一般檢查眼結(jié)膜，家禽檢査口腔黏膜和泄殖腔黏膜。觀察黏膜顏色、黏膜其他病變和天然孔分泌物性狀。健康動物眼結(jié)膜：豬、羊為粉紅色；水牛鮮紅色；黃

18、牛、乳牛馬淡紅色；雞口腔黏膜灰紅色。 患病動物可視黏膜可能有蒼白、潮紅、出血、發(fā)紺或黃染，亦或有潰瘍、炎性腫脹等情況。如眼結(jié)膜潮紅伴有眼眵增多可提示熱性疾?。簧n白見于各型貧血和慢性消耗性疾病，如馬傳染性貧血、寄生蟲??；口腔黏膜有水皰或爛斑，提示口蹄疫或豬傳染性水皰病。,6.檢查排泄動作及排泄物：動物在健康情況下，排泄動作及排泄物性狀因其種類不同呈現(xiàn)一定的特征。如果排泄動作不正常；排泄物性狀異常如血便、少尿等，都是異常信號 說明動

19、物在患某些疾病。一般講，動物便秘多見于各種熱性疾病如豬瘟、豬丹毒；腹瀉多見于胃腸道的疾病如仔豬副傷寒、大腸桿菌病等：草食動物的血尿多見于原蟲病或泌尿生殖道出血。7.反芻及逆嘔檢查：,(二)觸診,⑴耳根、角根、鼻端、四肢末端 ⑵體表皮膚 ⑶體表淋巴結(jié) ⑷嗉囊,通過手的觸壓來感知和判斷被檢動物體表局部組織變化情況。通過觸診初步了解動物體表的皮溫、彈性、軟硬度、敏感度以及淺表淋巴結(jié)的性狀。,(三)聽診,⑴叫聲：判別動物異常聲音

20、⑵咳嗽：判別動物呼吸器官病變。干咳：見于上呼吸道炎癥(咽喉炎、慢性支氣管炎)；濕咳：見于支氣管和肺部炎癥（3）聽心音、呼吸音和胃腸音,利用聽覺來判斷被檢動物身體各部位發(fā)出的聲音是否正常。,(四) “三數(shù)”檢查,體溫檢查：早晨溫度較低,午后略高,波動范圍在0.5℃～1℃之間。 ★常根據(jù)體溫升高程度,判斷動物發(fā)熱程度,進而推測疫病的嚴重性和可疑疫病范圍。 ★體溫升高程度分為：微熱(體溫升高1℃)；中等熱(體溫升高2℃)；高熱

21、(體溫升高3℃)；最高熱(體溫升高3℃以上)。脈搏檢查：呼吸數(shù)檢查：,,個體檢疫,,群體檢疫,群檢正?！闄z5%-20%,,群檢異常→個體檢查,動態(tài)觀察,,靜態(tài)觀察,食態(tài)觀察,,臨床檢疫,臨床檢疫—小結(jié),,★站立平穩(wěn),不斷走動拱食,并發(fā)出“吭吭”聲。對外界刺激敏感,遇人接近表現(xiàn)警惕性凝視。睡臥常取側(cè)臥,四肢伸展,頭側(cè)地，呼吸均勻；爬臥時后腿屈于腹下。排泄物正常。體溫正常。被毛整齊光亮。 ★起立敏捷,行動靈活,走跑時搖頭擺尾或

22、上卷尾。遇驅(qū)趕,隨群前進,不斷發(fā)出叫聲。 ★餓時叫喚,飲喂時搶食,大口吞咽有響聲且響聲清脆,全身鬃毛隨吞食而顫動。,三、各種動物臨診檢疫特點,(一)豬的臨診檢疫特點,1.健康豬,,,健康豬,,,健康豬,,,健康豬,,,★精神萎靡,離群獨立,全身顫抖或頭頸歪斜。蜷臥,不愿起立。被毛粗亂無光,鼻盤干燥,眼有分泌物,肷窩凹陷。行動遲緩,步態(tài)踉蹌,跛行或出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。 ★食欲下降,懶于上槽,或只吃幾口就退槽,有些只聞而不食,亦

23、有的食欲廢絕。排泄物異常。多有體溫異常。,2.病 豬,,,病 豬,,,病 豬,,,病 豬,,,病 豬,,,病 豬,,,病 豬,,,★站立平穩(wěn),神態(tài)安靜。睡臥時常呈膝臥姿勢,四肢彎曲。全身被毛平整有光澤,鼻鏡濕潤,眼、嘴及肛門周圍干凈。反芻有力，正常噯氣，呼吸平穩(wěn)。肉用牛垂肉高度發(fā)育；乳用牛乳房清潔,泌乳正常。排泄物、體溫正常 ★健康牛走起路來精力充沛,腰背靈活,四肢有力,搖耳甩尾,自由自在。 ★飲食中爭搶飼料,咀嚼有

24、力,采食時間長,采食量大。放牧中喜采食高草,常甩頭用力扯斷。運動后飲水不咳嗽。,(二)牛的臨診檢疫特點,1.健康牛,健康牛,,,★ 精神沉郁,頭頸低伸,拱背彎腰或有異常體態(tài)。睡臥時四肢伸開,橫臥或曲頸側(cè)臥,嗜睡,久臥不起或起立困難。被毛粗亂。反芻遲緩或停止。排泄物異常。體溫、呼吸多異常。 ★運動時常跛行掉隊或不愿行走。飲食時表現(xiàn)厭食或不食,或采食緩慢,咀嚼無力。出現(xiàn)運動后飲水咳嗽。,2.病 牛,,,病 牛,頭，背，肩皮

25、表大量結(jié)節(jié),,病 牛,,,★站立平穩(wěn),乖順。被毛整潔。呼吸平穩(wěn)。常于飽腹后合群臥地休息，反芻。遇炎熱相互把頭藏于對方腹下避暑。 ★走起路來精神活潑,合群不掉隊；放牧中雖很分散,但不離群。山羊活潑機敏,喜攀登,善跳躍,好爭斗,尤其是羔羊和幼齡羊。 ★飼喂時互相爭食，放牧時常邊走邊吃草,邊走邊排糞，排泄物正常。食后肷窩臌起。,(三)羊的臨診檢疫特點,1.健康羊,都安山羊—公羊,都安山羊—,健康羊,隆林山羊—,健康羊,健康羊

26、,,,★精神萎靡不振,常獨臥一隅,遇人接近不起不走。不反芻。排泄物異常。呼吸異常。被毛粗亂,脫毛,皮膚干裂。行走搖擺,或出現(xiàn)異常運動,異常姿勢。 ★食欲不振或停食,食后肷窩仍下陷。山羊喜臥懶動，多有體溫異常。,2.病羊,,,(四)家禽的臨診檢疫特點,1.健康家禽,★神態(tài)活潑,反應敏銳。站立時伸頸昂首翹尾，且常高收一肢，目光伶俐，時常側(cè)視。臥時頭疊放在翅內(nèi)。冠、髯紅潤,羽絨豐滿光亮,排列勻稱?？诒菨崈?，呼吸正常，排泄物正

27、常。體溫正常。 ★平養(yǎng)雞行動敏捷，步態(tài)穩(wěn)?。圾?、鵝陸地行走穩(wěn)健，水中游牧自如,放牧時不掉隊。 ★健康家禽啄食連續(xù)，食欲旺盛，食量大，嗉囊飽滿。,,,,,,,2.病家禽,精神萎靡,縮頸垂翅,閉目似睡。 冠、髯蒼白或紫黑，喙、蹼色澤變暗。 有的頭頸部腫脹，眼、鼻等天然孔有異常分泌物。 羽絨蓬亂無光。 行動遲緩,跛行或有肢翅麻痹及其它神經(jīng)癥狀。 食欲減退或廢絕,嗉囊空虛。 排泄物異常。 多有體溫異常。

28、,,,,,,,,,●細檢查尸體體表特征及天然孔有無異常，以排除炭疽等惡性傳染病?！窕继烤也〉膭游锛捌涫w，禁止剖檢?！袢魬岩蓜游锼烙谔烤?，先采取耳尖血液涂片鏡檢，排除炭疽后方可剖檢。,第三節(jié) 病理學檢查技術(shù),一、病理剖檢檢查技術(shù),(一)對動物尸體剖檢的要求,1.剖檢前檢查,第三節(jié) 病理學檢查技術(shù),一、病理剖檢檢查技術(shù),(一)對動物尸體剖檢的要求,1.剖檢前檢查,2.剖檢時間,3.剖檢地點,4.剖檢數(shù)量,5.剖檢術(shù)式,6.安全防護,剖

29、檢進行的越早越好，最好在白天進行剖檢。,病理解剖室或；在野外或其它檢疫現(xiàn)場剖檢時，應選地勢高燥并遠離居民區(qū)、畜舍及交通要道的地方進行。,家禽：5只以上；大中動物至少剖檢3頭。,工作人員的安全防護工作；防止環(huán)境污染。常用的消毒液有：1%～2%硼酸、0.1%新潔爾滅、5%碘酊、70%酒精等,第三節(jié) 病理學檢查技術(shù),一、病理剖檢檢查技術(shù),(一)對動物尸體剖檢的要求,(二)外部檢查,1.檢查尸體變化:尸僵、尸斑、尸腐、血液凝固2

30、.檢查營養(yǎng)狀況3.檢查可視黏膜4.體表的檢查,(三)內(nèi)部檢查,1.皮下檢查 ：皮下脂肪性狀、色澤。2.體腔剖檢：檢查胸腔、腹腔液體的數(shù)量、性狀；觀察胸膜、腹膜、心包膜的色澤。3.內(nèi)臟器官的檢查: 檢查各器官大小，形態(tài)，色澤、有無出血、黏連、腫大、壞死、包囊等。4.口腔、鼻腔和頸部器官的檢查 ：看呼吸道有無感染等。,(四)剖檢記錄,1.基本情況：種類、性別、年齡、癥狀、死亡時間、剖檢地點等。 2.病理變化：外部及內(nèi)臟器官的眼

31、觀病變。3.剖檢診斷：診斷病名和死亡原因,第四節(jié) 病料的采集,采集原則,供病原學檢查材料的采集、處理,供病理組織檢查材料的采集、處理,供血清學檢查材料的采集、處理,檢疫材料的包裝和運送,,內(nèi)容提要,,,一、采集原則,(一)適時采集 根據(jù)檢疫要求，嚴格規(guī)定采集時間。若檢疫病原，發(fā)熱或典型癥狀時采集；若制備血清，空腹采血；患病動物死后立即采血。,(二)典型采樣 典型采樣要求樣品具有代表性。,⑴選擇典型動物,即未經(jīng)藥物治療、病狀典

32、型的動物，這對細菌性傳染病的檢查尤其重要。,⑵選擇典型材料,①采集病原體可能在其中含量最高的材料。 ②在采取病料前，對動物可能患某種疫病作出初步診斷，側(cè)重采集該病原體常侵害的部位。,采集有病變的組織、器官或病變最明顯、最典型的部位。供病理組織切片的樣品，應連帶部分健康組織。淋巴結(jié)、心、肝、脾、肺、腎，不論有無病變，一般均應采取。,,,動物群體發(fā)病，至少采取5頭(只)動物的病料。 每一種樣品應有足夠的數(shù)量,除確保本次實驗用

33、量外,以備必要的復檢用。,(三)合理采樣,(四)無菌采樣,樣品采集全過程應無菌操作，尤其是供微生物學檢查和血清學實驗的樣品。 采樣部位、采樣用具、盛放樣品的容器均需滅菌處理。,(五)安全采樣,在采樣過程中，采樣人員要注意安全，防止感染；同時防止病原擴散而造成環(huán)境污染。,采集前的準備,對采集人員的要求：具備相應專業(yè)知識水平 應用器械及其消毒：采集病料用具：外科刀、采血管、剪刀、鑷子等盛放病料容器：試管、病料袋等包裝用具：鐵盒

34、、塑料罐等。消毒：煮沸、火焰、高壓蒸汽滅菌 藥品：生理鹽水、新潔爾滅、碘酊、酒精等。 防護用品：防護服、乳膠手套、口罩等。 記錄材料：送檢單、記號筆、記錄本等。,二、供病原學檢查材料的采集、處理,(一)供微生物學檢查材料的采集、處理,1.血液,采血部位：頸靜脈或尾靜脈或耳靜脈；家禽從翅靜脈或心臟。死亡動物從右心房采血。采血量：10ml(大、中動物)；3～5ml(小動物和家禽)全血抗凝：EDTA—Na2、枸櫞酸鈉、肝素。枸櫞

35、酸鈉不宜用于病毒血樣。10ml血液+4%枸櫞酸鈉溶液1ml或0.1%肝素1ml或EDTA—Na215～20㎎。 病毒樣品：1ml血樣=青霉素+鏈霉素各500～1000IU，以抑制血源性或在采血過程中污染的細菌。,,,2.分泌物和滲出液,⑴口腔、鼻腔、喉氣管、泄殖腔及陰道分泌物：用滅菌的棉球蘸取。⑵咽食道分泌物：采前禁食12h，食道探子刮取。⑶乳汁：清洗乳房并消毒→棄去最初擠出的幾把乳汁→擠出的10～20ml乳汁。⑷尿液：

36、排尿時采集或用導尿管采取，常取30～50ml。⑸水泡液、水腫液、關(guān)節(jié)囊液，胸腹腔滲出液：用注射器抽取，至少采取1ml。⑹膿汁：已破口的膿皰，用棉球蘸取；未破口的用注射器吸取。過于濃稠不好抽取時，可切開膿皰，用棉球蘸取。,3.淋巴結(jié)、內(nèi)臟器官、肌肉,⑴淋巴結(jié)：淋巴結(jié)連帶周圍脂肪整體采集。⑵內(nèi)臟器官和肌肉：取病變最明顯的部位。注意:采集的淋巴結(jié)、內(nèi)臟器官、肌肉分別置于滅菌容器。,4.水泡皮,先用清水清洗病變部，再剪取新鮮水泡皮3～

37、5g放入滅菌小瓶。,棉拭子插入泄殖腔或氣管輕輕擦拭旋轉(zhuǎn)，粘上分泌物即可。,8.拭子樣品,用不透水塑料袋包緊，裝入木箱送檢。,7.流產(chǎn)胎兒、家禽及其它小動物尸體,6.長骨及肋骨,整根采集，不要損傷其兩端，用5%石炭酸水容液浸透的紗布或麻袋片包裹；,5.腸管,選取要采集的腸管至少6cm，兩端結(jié)扎，剪斷，置滅菌玻璃容器或塑料袋中。,,分泌物和滲出液采集→放入滅菌容器→密封→外貼標簽→冷藏→送檢。病毒性病料的保存:含抗生素的PH7.2～7.

38、4磷酸鹽緩沖液、50％甘油磷酸鹽緩沖液、50％甘油生理鹽水.細菌性病料的保存:30％甘油磷酸鹽緩沖液、30％甘油生理鹽水、滅菌液體石蠟。 液體材料(血液、膽汁、分泌物)涂片:滅菌接種環(huán)取一滴→載玻片中央均勻涂布成適當大小的薄層→自然干燥→包扎固定→送檢組織器官涂片:無菌方法剪取新鮮切面,在玻片上壓印(觸片)或涂抹成一薄層→自然干燥→包扎固定→送檢。,材料保存與送檢,,,1.血液:多從耳靜脈采集，立即制成涂片標本。2.陰道分泌物:

39、用棉拭子擦拭采取3.糞便:直腸采集或采集新排出的糞便。4.被寄生蟲寄生的組織、器官:組織、器官常連帶寄生蟲一并采集，放入5％～10％福爾馬林溶液中。5.皮膚刮下物 螨病病料:在病變皮膚和健康皮膚交界處采集。,(二)供寄生蟲檢查材料的采集、處理,,,1.血液:多從耳靜脈采集，立即制成涂片標本。2.陰道分泌物:用棉拭子擦拭采取3.糞便:直腸采集或采集新排出的糞便。4.被寄生蟲寄生的組織、器官:5.皮膚刮下物6.寄生蟲⑴

40、體表寄生蟲:用手或鑷子捏取或把附有蟲體的羽毛剪下→70％酒精、甘油酒精或5％福爾馬林容液中。⑵體內(nèi)寄生蟲:小型線蟲→用毛筆將蟲體挑出→ 生理鹽水洗凈→70％酒精、甘油酒精或巴氏夜固定。⑶大型蠕蟲像蛔蟲、棘頭蟲、絳蟲用5％～10％福爾馬林溶液固定。,(二)供寄生蟲檢查材料的采集、處理,,,(一)血清1.采血:一次采血量大中動物每頭不少于10ml；家禽不少于3ml；2.制備血清:自然析出或離心分離血清。3.血清保存:制備的血清若能

41、在一周內(nèi)檢測，4℃冷藏。若需保存較長時間，-30℃凍結(jié)。(二)抗原 抗原材料的采集、處理方法同微生物學檢查材料的采集和處理。,三、供血清學檢查材料的采集、處理,,,(一)選材應選擇病變部位與健康部位交界處的組織作為檢材。較重要的病變要多取幾塊,以展示病變的發(fā)展過程。若同一器官有不同的病變,分別采取。(二)采集 供切片時用的組織塊大小為1.5cm×1.5cm×0.5cm.(三)固定 1.供石

42、蠟切片用的組織塊切好后,用清水輕輕沖洗血污,立即浸入固定液中。但胃腸、膽囊、膀胱等組織不要用水沖洗。,四、供病理組織學檢查材料的采集、處理,,,,,2.常用的固定液有10%福爾馬林溶液、95%酒精、鮑因氏液(Bouni氏液)等,用量應是病料體積的5～10倍。固定時間通常為12～24h。 3.若需長期保存,經(jīng)12～24h固定以后更換一次固定液。 4.固定時在容器底部墊以脫脂棉,以防組織粘底而固定不良。若有幾個病例的組織

43、固定在同一容器時,應把每一病例的組織塊用紗布包好,附上標簽再投入固定液中。 5.供快速冰凍切片檢查用的組織常不經(jīng)固定,采樣后盡快送檢。如當天不能送出或檢查,必須凍結(jié)保存,以免組織腐敗和自溶。,,五、檢疫材料的包裝和運送,(一)包裝,1.包裝容器,直接包裝檢疫材料的容器可選擇玻璃或塑料制品.運輸時的外包裝常用木箱、保溫瓶、保溫箱.所有容器必須完整無損,密封性能良好,清潔無污染.供病原學檢查的容器,清洗后經(jīng)干熱滅菌或高壓滅

44、菌并烘干.塑料制品耐高壓的高壓滅菌,不耐高壓的紫外線消毒或熏蒸消毒.,標簽:樣品名稱、動物種類、采集時間、采集地點、樣品編號等內(nèi)容。,3.貼標簽,一種材料一個容器。不可將多種病料或多頭家畜的病料混裝在一起。一個容器裝量不能過滿。液體樣品不能超過總?cè)萘康?0％。裝入樣品的容器必須加塞、加蓋。塞子和蓋子用膠布封固。液體病料在膠布外還需用溶化石蠟加封。選用塑料袋作容器，需用兩層包裝，分別用線結(jié)扎袋口，防止液體露出或水進入袋中。,2.包

45、裝,,(二)運送,1.供病毒學檢查的樣品,置于保溫容器(保溫瓶或保溫箱)中運輸。血液樣品要單獨存放在保溫瓶中,不能和其它樣品混合。對冷藏樣品,若能在4h內(nèi)送到實驗室,在保溫瓶中加入冰塊或冰袋,冷藏運輸;否則,先將樣品進行冷凍處理。對凍結(jié)的樣品,必須在24h內(nèi)冷藏送到實驗室。若在24h內(nèi)不能送到實驗室,要冷凍運輸,即在運輸過程中樣品的環(huán)境溫度應保持在-20℃以下。各種樣品到達實驗室后,若暫時不進行實驗,則應在-70℃或-70℃以下保

46、存。不要反復凍融。,經(jīng)冷藏處理的血清，在24h內(nèi)能送到實驗室，冷藏運送；否則，先將血清冷凍。經(jīng)冷凍處理的血清，在保溫箱內(nèi)加大量冰袋運送，在48h內(nèi)到達實驗室。,4.玻片標本和病理組織學樣品:常溫運送。,3.血清樣品,經(jīng)冷藏的材料并在24h內(nèi)能送到，以冷藏運輸或常溫運輸，否則必須冷藏運輸。,2.供細菌學和寄生蟲學檢查的樣品,,每一份樣品或每一批樣品均要有采樣單。采樣單一式三。第一聯(lián),采樣單位保存；第二聯(lián),跟隨樣品；第三聯(lián),由被采樣單

47、位保存。,(三)填寫采樣單,五、檢疫材料的包裝和運送,(一)包裝:,1.包裝容器,2.包裝,3.貼標簽,,,(二)運送,1.供病毒學檢查的樣品,2.供細菌學和寄生蟲學檢查的樣品,3.血清樣品,4.玻片標本和病理組織學樣品:常溫運送。,,,附: 樣單式樣,第五節(jié) 病原學檢查技術(shù),一、細菌性傳染病病原檢查,(一)顯微鏡檢查法,1.病料處理,將病料涂成薄而均勻的涂片→室溫下自然干燥→若為細菌培養(yǎng)物涂片火焰固定 常

48、用的染色方法有：革蘭氏染色法、美藍染色法、瑞氏染色法和姬姆薩染色法,2.顯微鏡檢查,染色水洗后的涂片標本→吸水紙吸干(切勿磨擦)或在酒精燈火焰的遠端烘干→滴加香柏油→用油浸鏡觀察細菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)和染色特性。,(二)培養(yǎng)檢查法,1.固體培養(yǎng)基上菌落性狀的檢查,其菌落的大小、形狀、色澤、表面性狀、透明度、邊緣性狀等因菌種而異。因此，菌落特征是鑒別細菌的重要依據(jù)。,2.液體培養(yǎng)基上液體性狀的觀察,細菌在液體培養(yǎng)基中生長可使液體出現(xiàn)混濁、沉淀

49、、液面形成菌膜以及液體變色、產(chǎn)氣等現(xiàn)象。,(三)生化試驗,★生化實驗是利用生物化學的方法，檢測細菌在人工培養(yǎng)繁殖過程中所產(chǎn)生的某種新陳代謝產(chǎn)物是否存在,是一種定性檢測。 ★常用的生化反應有糖發(fā)酵試驗、靛基質(zhì)試驗、V-P試驗、甲基紅試驗、硫化氫試驗.,(四)動物試驗,最常用的實驗動物有：小鼠、大鼠、豚鼠和家兔。,二、病毒性傳染病病原檢查,(一)病毒分離培養(yǎng),1.樣品處理 2.病毒分離培養(yǎng),⑴雞胚接種,痘病毒:絨毛尿囊膜接種,用

50、9～12日齡雞胚；雞新城疫病毒:絨毛尿囊腔接種,用9～10日齡雞胚；流行性乙型腦炎病毒:卵黃囊內(nèi)接種,用6～8日齡雞胚.,⑶動物接種,⑵動物組織培養(yǎng),在病毒分離培養(yǎng)中廣泛采用的是細胞培養(yǎng)技術(shù)。單層細胞培養(yǎng)使細胞在器皿的表面生長出一層或數(shù)層細胞，常用于病毒的分離繁殖。懸浮細胞培養(yǎng)是把細胞懸浮在營養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，這中方法可連續(xù)進行，因而用于疫苗生產(chǎn)。,二、病毒性傳染病病原檢查,(一)病毒分離培養(yǎng),（樣品處理、病毒分離培養(yǎng)）,(二)病

51、毒檢查方法,1.包涵體檢查,2.病毒培養(yǎng)性狀觀察,狂犬病、偽狂犬病、犬瘟熱病毒病毒的包涵體。,3.病毒形態(tài)學觀察,有直接電鏡觀察和免疫電鏡技術(shù)。,4.病毒核酸檢測,最常用的檢測方法是聚合酶鏈式反應。,三、寄生蟲病病原檢查,(一)蟲卵檢查法,1.直接涂片鏡檢：2.飽和鹽水漂浮:3.水洗沉淀,(二)蟲體檢查法,1.蠕蟲蟲體檢查法,2.蜘蛛昆蟲蟲體檢查法,3.原蟲蟲體檢查法,,,四、PCR技術(shù)簡介,(一)PCR技術(shù)的主要用途,聚合酶鏈式反

52、應(PCR)：將生物材料中微量的目的DNA片段在體外擴增上百萬倍，從而獲得大量特異性核酸。目前,PCR技術(shù)已廣泛應用于病原微生物的微量檢測、突變基因篩選、法醫(yī)學鑒定等與生命有關(guān)的各個領(lǐng)域。在動物檢疫中,它主要用于微量樣品和不完整病原的檢測，尤其適用于個體極小、難于觀察且難于人工培養(yǎng)的病毒的檢測。,,,過去用常規(guī)檢測技術(shù)幾天甚至幾周才能完成的試驗，用該技術(shù)幾個小時便可完成，這使禽流感等疫病的病原檢測技術(shù)獲得突破。并且該技術(shù)操作的每一步

53、都不需要活的病毒，不會造成病原對環(huán)境的污染，對防疫有重大意義。,(二)PCR技術(shù)的原理,1.PCR反應基本成分 2.反應原理,(三)PCR技術(shù)的基本步驟(四)特異性核酸的檢出,,,第六節(jié) 免疫學檢查技術(shù),一、血清學檢測技術(shù),血清學檢測技術(shù)是建立在抗原體特異性反應基礎(chǔ)之上的。利用抗原抗體中已知的任何一方去檢測未知的另一方，以達到檢疫目的。,(一)凝集試驗 顆粒性抗原（如紅細胞、細菌等）與含有抗體的血清混合，在有電解質(zhì)存在的條

54、件下，形成肉眼可見的凝集塊。,1.直接凝集反應,有玻片法和 試管法。主要用于疫病的快速診斷 布氏桿菌病和豬傳染性萎縮性鼻炎：平板凝集和試管凝集反應； 雞白痢、雞支原體?。喝桨迥磻?。,2.間接凝集反應,將可溶性抗原（或抗體）吸附于一種與免疫無關(guān)的載體顆粒表面，然后與相應的抗體（或抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，發(fā)生肉眼可見的特異性凝集反應。若以紅細胞為載體，叫間接血凝試驗，若以乳膠為載體，就叫乳膠凝集試驗。能檢

55、出少量抗體，其靈敏度比一般細菌凝集試驗高2—8倍。如口蹄疫、血吸蟲病等多種病毒性傳染病、寄生蟲病的診斷。,,,某些病毒能選擇性凝集某些動物的紅細胞，這種凝集紅細胞的現(xiàn)象稱為血凝(HA)。而在病毒懸液中加入特異性抗體作用一定時間,再加入紅細胞時,紅細胞的凝集被抑制(不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象),稱紅細胞凝集抑制反應(HI)。HA和HI廣泛應用在雞新城疫、禽流感、雞減蛋綜合癥等疫病的診斷檢測中。試驗在V型96孔微量反應板上進行。,3.血凝和血凝抑制

56、試驗,,,(二)沉淀試驗,1.環(huán)狀沉淀反應（阿司克里氏反應）反應在小試管中進行，當沉淀素血清與沉淀原發(fā)生特異性反應時，在兩液接觸處出現(xiàn)致密、清晰明顯的白環(huán)，即環(huán)狀沉淀試驗陽性。 常用于炭疽病的診斷和皮張?zhí)烤覚z疫。2.瓊脂擴散反應 反應在瓊脂凝膠中進行。 是馬傳染性貧血病、雞馬立克氏病、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性喉氣管炎及雞傳染性法氏囊病常用的診斷方法。,(三)標記抗體技術(shù),1.酶標記抗體技術(shù),★有免疫酶染色法和酶聯(lián)免疫

57、吸附試驗(ELISA)。 ★主要特點：簡便、快速、敏感、易于標準化、適合大批樣品檢測。 ★是豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸綜合癥、豬弓形蟲病、豬囊蟲病、豬旋毛蟲病以及牛白血病、禽白血病等疫病診斷的農(nóng)業(yè)行業(yè)標準方法。,2.熒光標記抗體技術(shù)又稱免疫熒光技術(shù)(IFT),根據(jù)抗原抗體結(jié)合的特異性和標記分子的敏感性而建立的診斷檢測技術(shù)，稱為標記抗體技術(shù)。,二、變態(tài)反應檢測技術(shù),主要應用于一些慢性傳染病的檢疫與監(jiān)測，尤其適合動物群體檢疫