混合菌種接種與接種比例對(duì)酶活的影響

1、混合菌種接種與接種量對(duì)酶活性 的影響,,,實(shí)驗(yàn)前言,纖維素是自然界中合成量最大的有機(jī)物之一，約占植物秸稈的30%～50%，但是利用率較低，核心問題是纖維素酶的活性低。纖維素酶是具有不用酶活性的酶復(fù)合物，主要包括外切纖維素酶（C1酶）、內(nèi)切纖維素酶（Cx酶），β-葡萄糖苷酶（CB酶）。當(dāng)3中酶的活性比例適當(dāng)，就能完成對(duì)纖維素的降解。已知綠色木霉和黑曲霉的上述3種作用于纖維素的位點(diǎn)不同，對(duì)其降解

2、程度也不同。用混合發(fā)酵可充分發(fā)揮各酶之間的協(xié)同作用，提高酶活性從而提高對(duì)纖維素的利用率。,菌種簡(jiǎn)介,黑曲霉：絲孢綱，絲孢目，叢梗孢科，曲霉屬真菌 廣泛分布?？缮a(chǎn)淀粉酶、酸性蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶、檸檬酸、葡糖酸和沒食子酸等，是重要的發(fā)酵工業(yè)菌種。生長適溫37℃，最低相對(duì)濕度為88%，能引致水分較高的糧食霉變和其他工業(yè)器材的霉變。 綠色木霉：絲孢綱、絲孢目，粘孢菌類，是一種普遍存在的真菌?？僧a(chǎn)生纖維素酶、幾丁

3、質(zhì)酶、木聚糖酶等，是產(chǎn)纖維素酶活性最高的菌株之一。濕度生長適溫為20－28℃，營養(yǎng)生長的相對(duì)濕度要求92%以上。,實(shí)驗(yàn)流程介紹,實(shí)驗(yàn)思路 實(shí)驗(yàn)步驟 Step 1 Step 2

4、 Step 3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理 列表法 作圖法預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 分析討論,,,,,,,,,,,Logo,控制變量法：本實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證與探究混合菌種

5、的接種與接種比例對(duì)酶活性的影響，其他所有無關(guān)變量（例如:溫度，濕度和培養(yǎng)時(shí)間）都應(yīng)相同且適宜。,實(shí)驗(yàn)思路,1,設(shè)置對(duì)照法：一是將綠色木霉，黑曲霉單菌株發(fā)酵的酶活性與混合菌株發(fā)酵的酶活性進(jìn)行比較；而是在保持接種菌株總量一定的前提下，改變各組分所比例，設(shè)置多個(gè)對(duì)照組相互對(duì)照。,2,做圖法：將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用圖像表示出來，令實(shí)驗(yàn)結(jié)果更清楚明白，便于得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論。,3,Logo,,CONTAIN,實(shí)驗(yàn)步驟,Step 2：菌種孢子的培養(yǎng),

6、Step 3：粗酶液的制備與酶活性的測(cè)定,Step 1:培養(yǎng)基的配置與菌種孢子懸濁液的制取,,,,Step 1:,培養(yǎng)基的配置：?斜面培養(yǎng)基（馬鈴薯，葡萄糖，瓊脂，水等）?固體發(fā)酵培養(yǎng)基（稻草秸稈粉，水等）孢子懸濁液的制?。涸?個(gè)斜面培養(yǎng)基上分別在適宜條件下培養(yǎng)綠色木霉與黑曲霉菌株2天，并制得一定且相同濃度的孢子懸濁液。,黑曲霉的孢子,孢子頭狀如"菊花",綠色木霉的孢子,Logo,,CONTAIN,實(shí)驗(yàn)步驟,S

7、tep 2：菌種孢子的培養(yǎng),Step 3：粗酶液的制備與酶活性的測(cè)定,Step 1:培養(yǎng)基的配置與菌種孢子懸濁液的制取,,,,Step 2:,菌種孢子的培養(yǎng)：?取等體積兩種霉菌的孢子培養(yǎng)液V分別接種于2個(gè)相同的固體培養(yǎng)基中?使混合孢子培養(yǎng)液的體積也為V，改變綠色木霉與黑曲霉孢子培養(yǎng)液的比例為1：9，2：8，3：7，4：6，5：5，6：4,7：3,8：2,9：1 ，分別接種于9個(gè)相同的固體培養(yǎng)基中?將上述11個(gè)培養(yǎng)基置于相同且適宜的

8、環(huán)境中培養(yǎng)3天，每天翻曲一次,PICTURES,綠色木霉,PICTURES,黑曲霉,Logo,,CONTAIN,實(shí)驗(yàn)步驟,Step 2：菌種孢子的培養(yǎng),Step 3：粗酶液的制備與酶活性的測(cè)定,Step 1:培養(yǎng)基的配置與菌種孢子懸濁液的制取,,,,Step 3：,粗酶液的制備：在固體發(fā)酵產(chǎn)物中加入6倍的檸檬酸緩沖液，經(jīng)過搖床，離心，過濾，靜置后，其上清液即為粗酶液，放于4‘C冰箱保存?zhèn)溆妹富钚缘臏y(cè)定：采用一定的方法對(duì)11組粗酶

9、液進(jìn)行CMC 酶活性測(cè)定，F(xiàn)PA酶活性測(cè)定，β-葡萄糖苷酶活性測(cè)定，繪制表格，記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（具體方法可以參考《時(shí)珍國醫(yī)國藥》2010年第21卷第12期3330至3331頁）,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理,1：?jiǎn)尉昱c混合菌株酶活性的比較——柱狀圖法 以菌株種類為橫坐標(biāo)，酶活性為縱坐標(biāo)；觀察比較不同菌株同類酶的圖柱高度判斷其酶活性的大小 2：混合菌株接種比例對(duì)酶活性的影響——折線圖法以酶比為橫坐標(biāo)，酶活性為縱坐標(biāo)；觀察折線走向判斷各種酶的活