micronucleusassay-首都醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

1、衛(wèi)生毒理與衛(wèi)生化學(xué)系2013.10.22,實習(xí)二 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗,（一）目的,學(xué)習(xí)和掌握小鼠骨髓多染紅細(xì)胞（PCE）微核測定方法。,（二）原理,微核（micronucleus）大小相當(dāng)于細(xì)胞直徑1/20 ~ 1/5，呈圓形或杏仁狀，其染色與細(xì)胞核一致，在間期細(xì)胞中可以出現(xiàn)一個或多個。,（二）原理,微核實驗可檢測化學(xué)毒物或物理因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的染色體完整性改變和染色體分離改變兩種遺傳學(xué)終點。凡能使染色體發(fā)生斷裂或使染色體和紡錘體

2、聯(lián)結(jié)損傷的化學(xué)物，都可用微核試驗來檢測。,（二）原理,有核細(xì)胞的胞質(zhì)少，微核與正常核葉及核的突起難以鑒別。嗜多染紅細(xì)胞的主核已排出，胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，姬姆薩染色呈灰藍(lán)色；成熟紅細(xì)胞（NCE）的核糖體已消失，被染成淡桔紅色。骨髓中嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量充足，微核容易辨認(rèn)，而且微核自發(fā)率低，因此，骨髓中嗜多染紅細(xì)胞成為微核試驗的首選細(xì)胞群。,（三）器材與試劑,器材： 手術(shù)刀、手術(shù)剪、無齒鑷、小型彎止血鉗、干凈紗布、帶橡皮頭吸管、晾片架、玻璃蠟筆

3、、玻璃染色缸、載玻片及推片、定時鐘、帶油鏡頭顯微鏡、細(xì)胞計數(shù)器試劑：甲醇（分析純）、甘油（分析純）、小牛血清、生理鹽水、Giemsa貯備液、磷酸鹽緩沖液（pH6.8）陽性對照物：環(huán)磷酰胺或絲裂霉素C,1.實驗動物與處理,動物選擇：常用大、小鼠染毒途徑：經(jīng)口、經(jīng)皮、經(jīng)呼吸道、注射染毒次數(shù)及取樣時間：劑量選擇：3~5個或更多劑量組,（四）操作步驟,2.骨髓微核觀察的步驟,骨髓制取↓涂片↓固定↓染色↓觀察與計數(shù),,,

4、正染紅細(xì)胞,,,嗜多染紅細(xì)胞及微核,,,,正染紅細(xì)胞,,嗜多染紅細(xì)胞及微核,,,,,,,染色太淺,（五）結(jié)果分析與評價,微核率指含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，以千分率（‰）表示 若一個嗜多染紅細(xì)胞中出現(xiàn)兩個或兩個以上微核，仍按一個有微核細(xì)胞計數(shù),（五）結(jié)果分析與評價,正常的PCE/NCE比值約為1（正常范圍0.6 ~ 1.2）；PCE/NCE＜0.1，陰性對照組和陽性對照組的微核發(fā)生率多種統(tǒng)計學(xué)方法（Poinsson分布、二項分布、x

5、2檢驗等）均有人應(yīng)用,（五）結(jié)果分析與評價,注意：本實驗的關(guān)鍵步驟是制作良好的骨髓涂片及優(yōu)質(zhì)的染色。,（六）試驗報告,受試物名稱、理化性狀、配制方法、所用溶劑動物種屬和品系、體重、數(shù)量、性別、來源（注明合格證號和動物級別）實驗動物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、室溫、相對濕度、實驗動物室合格證號劑量分組，染毒途徑和方式試驗方法：簡述操作步驟，所用統(tǒng)計學(xué)方法，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果：以列表方式報告受試物對動物骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率（表1）結(jié)論,