細(xì)菌感染的檢查方法和防治原則

1、1,第七章 細(xì)菌感染的診斷與防治原則,Examination and strategy of prevention and therapy for bacterial infection,2,細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷主要包括：,細(xì)菌學(xué)診斷 ----以檢測(cè)致病菌及其抗原或代謝產(chǎn)物為目的血清學(xué)診斷 ----以檢測(cè)患者血清中特異性抗體為目的基因診斷 ----以檢測(cè)致病菌特異性DNA片段為目的,3

2、,第一節(jié) 細(xì)菌學(xué)診斷,,4,一、標(biāo)本的采集原則：,,無(wú)菌采集 嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免標(biāo)本被污染。標(biāo)本收集于無(wú)菌容器中，容器須先經(jīng)高壓滅菌、煮沸、干熱等物理方法滅菌，或用一次性無(wú)菌容器，而不能用消毒劑處理。,5,早期采集,采集時(shí)間最好是病程早期、急性期或癥狀典型時(shí)，且必須在抗菌藥物使用前，否則這份標(biāo)本在分離培養(yǎng)時(shí)要加入藥物拮抗劑。,6,取樣部位,不同疾病、不同時(shí)期取不同部位標(biāo)本 如流腦病人取CSF、血液或出血瘀斑；傷寒病人在病

3、程1～2周內(nèi)取血液，2～3周時(shí)取糞便。盡可能取病變明顯部位的材料 取局部病變標(biāo)本，不可使用消毒劑，必要時(shí)以無(wú)菌生理鹽水沖洗，拭干后取材。,7,糞標(biāo)本：自然排便采集糞便標(biāo)本時(shí)，取有膿血、粘液的糞便一小匙。液體糞便則取絮狀物，一般取1～3ml，直接裝入糞便容器或保存液或運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢。,8,痰標(biāo)本：采集標(biāo)本前應(yīng)用清水、冷開(kāi)水漱口有假牙者應(yīng)取下假牙。首先輕咳，咳出咽喉部的分泌物，棄去，再用力咳嗽，咳出肺部的痰液直接吐入無(wú)菌的容器中。

4、若懷疑結(jié)核感染找抗酸桿菌，應(yīng)收集24小時(shí)的痰液于清潔玻璃容器內(nèi)。若懷疑放線菌感染，應(yīng)讓病人留取含有顆粒的痰液，實(shí)驗(yàn)室查到硫磺顆粒且弱抗酸，可以考慮放線菌感染。,采集雙份血清,采集急性期及恢復(fù)期血清恢復(fù)期血清效價(jià)比急性期效價(jià)升高4倍或以上具有診斷意義。,9,10,,一般標(biāo)本采集后最好在2h內(nèi)送檢，大多細(xì)菌可4℃冷藏運(yùn)送、特殊（如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保溫立即送檢。糞便標(biāo)本中雜菌多，常置于甘油緩沖鹽水保存液中。,盡快送檢、冷藏運(yùn)送

5、,11,注意安全,烈性傳染病或病因不明患者臨床標(biāo)本的采集時(shí)應(yīng)做好防護(hù)工作。,12,1、直接涂片染色鏡檢 形態(tài)和染色性上有特征的致病菌，直接涂片鏡檢后有助于初步診斷。如：痰中查抗酸性桿菌，膿液中找G+葡萄串樣球菌等。,二、細(xì)菌學(xué)診斷方法,13,葡 萄 球 菌,霍 亂 弧 菌,14,結(jié)核分枝桿菌,A.結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)的鏡下形態(tài)(抗酸染色)B.結(jié)核分枝桿菌痰標(biāo)本直接涂片(抗酸染色),15,2、分離培養(yǎng)（isolation and

6、 cultivation）： 所有標(biāo)本原則上均應(yīng)作分離培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)后進(jìn)一步鑒定，根據(jù)不同要求選用不同培養(yǎng)基。 分離培養(yǎng)比直接涂片鏡檢陽(yáng)性率高，但需時(shí)較久；大多細(xì)菌16～24h，結(jié)核桿菌需4～8w。 分離培養(yǎng)是微生物學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。,16,分離培養(yǎng)　isolation and cultivation,分離培養(yǎng)是微生物學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術(shù)。（圖為普通孵箱）,17,厭

7、氧箱 厭氧袋,18,各種細(xì)菌所具有的酶不完全相同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力亦不一致，因而其代謝產(chǎn)物有別，藉此可對(duì)不同致病菌進(jìn)行鑒別（如腸道桿菌）。,3、生化試驗(yàn),糖發(fā)酵試驗(yàn),19,4、血清學(xué)試驗(yàn)：,含特異抗體的免疫血清＋未知純種細(xì)菌進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，可確定致病菌的種和型。常見(jiàn)有玻片凝集試驗(yàn)。,玻片凝集試驗(yàn),20,5、動(dòng)物試驗(yàn)：,主要用于分離、鑒定致病菌，測(cè)定菌株產(chǎn)毒性等。

8、 常用動(dòng)物：小鼠、豚鼠、家兔 接種途徑：皮內(nèi)、皮下、腹腔、肌肉、靜脈、腦內(nèi)等。,21,6、藥物敏感試驗(yàn),測(cè)定標(biāo)本中致病菌對(duì)藥物的敏感程度。對(duì)指導(dǎo)臨床用藥及控制感染有重要意義。常用紙碟法和試管稀釋法。,22,第二節(jié) 血清學(xué)診斷,采用已知的細(xì)菌或其特異性抗原，檢測(cè)患者血清或其他體液中有無(wú)相應(yīng)特異性抗體及其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。,23,在血清學(xué)診斷中，最好采取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本。 結(jié)果：

9、以抗體效價(jià)明顯高于正常人水平或患者恢復(fù)期抗體效價(jià)比急性期升高≥4倍方有意義。常用有凝集實(shí)驗(yàn)、沉淀實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、中和試驗(yàn)、ELISA等。優(yōu)點(diǎn)：快速、靈敏且不受抗生素等藥物影響。,24,肥達(dá)試驗(yàn),玻片凝集實(shí)驗(yàn),25,第三節(jié) 分子生物學(xué)診斷,PCR技術(shù) 核酸雜交技術(shù) DNA芯片技術(shù),26,細(xì)菌學(xué)診斷基本方法,27,,,第四節(jié) 細(xì)菌感染的特異性防治,,28,特異性免疫產(chǎn)生的方式,人工免疫 人工主動(dòng)免疫 疫苗、類毒素

10、 人工被動(dòng)免疫 抗毒素、丙球自然免疫 自然被動(dòng)免疫 胎盤、初乳 自然主動(dòng)免疫 患病、隱性感染人工免疫：采用人工方法將疫苗、類毒素等或含有某種特異性抗體、細(xì)胞免疫制劑等接種于人體，以增強(qiáng)宿主體的抗病能力。,29,一、人工主動(dòng)免疫,人為地將疫苗（vaccine）或類毒素接種于人體，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生特異性免疫力的一種防治微生物感染的措施。,30,常用制劑,疫苗 ----滅活疫

11、苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗、 核酸疫苗、重組活載體疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗和治療性疫苗。類毒素,31,1、滅活疫苗：,選用免疫原性強(qiáng)的細(xì)菌經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法殺死而成。如傷寒、百日咳、霍亂等滅活疫苗。 優(yōu)點(diǎn)：易于制備和保存。 缺點(diǎn)：接種劑量大；維持時(shí)間短；接種次數(shù)多；注射的局部和全身性副反應(yīng)較大；不產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答。,32,,2、減毒活疫苗：,用減毒或無(wú)毒力的活病原體制成；如BCG 優(yōu)點(diǎn)：只需接種一次、接種劑量較小、 副反應(yīng)

12、輕微或無(wú)、免疫效果好且持久、能同時(shí)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫；以自然途徑接種，有SIgA抗體的局部粘膜免疫形成。缺點(diǎn)：不易保存（冷藏且保存期短）、回復(fù)毒力的危險(xiǎn)性,33,,,,34,3.亞單位疫苗：,,用化學(xué)方法裂解和提取或通過(guò)基因工程產(chǎn)生的細(xì)菌保護(hù)性抗原組分制成的疫苗。如:腦膜炎球菌的莢膜多糖，乙肝疫苗等。,35,4、核酸疫苗／DNA疫苗／基因疫苗,將能編碼誘發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答的病原體基因片段和能在真核細(xì)胞表達(dá)的質(zhì)粒重組，直接注入宿主體

13、內(nèi)使其表達(dá)目的免疫原，進(jìn)而誘導(dǎo)出保護(hù)性抗體和細(xì)胞免疫的新型疫苗，如乙肝疫苗。 核酸疫苗的出現(xiàn)與發(fā)展是疫苗發(fā)展史上的第三次革命。,,36,,重組活載體疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗治療性疫苗等,37,類毒素： 外毒素經(jīng)0.3～0.4%甲醛作用3～4周后，毒性消失仍保持免疫原性的制品。如白百破三聯(lián)疫苗（DPT）是將白喉類毒素、百日咳死菌苗、破傷風(fēng)類毒素混合而成。,38,,二、

14、人工被動(dòng)免疫,給機(jī)體注射含特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細(xì)胞因子等制劑，使機(jī)體即刻獲得特異性免疫力的過(guò)程，以治療或緊急預(yù)防感染。,39,1、抗毒素：一般用細(xì)菌類毒素或外毒素多次免疫馬后采血，從血清中提取免疫球蛋白精制而成?？苟舅啬苤泻拖鄳?yīng)的外毒素，阻斷其毒性作用。例如用于白喉、破傷風(fēng)等疾病。 注射前需做皮膚試驗(yàn)。 應(yīng)早期、足量注射。,常用制劑,40,2、免疫球蛋白 ----丙種球蛋白、胎盤球蛋白

15、 （麻疹、甲肝、乙肝、脊髓灰質(zhì)炎等）3、抗菌免疫血清,41,區(qū)別要點(diǎn) 人工主動(dòng)免疫 人工被動(dòng)免疫免疫物質(zhì) 抗原 抗體或細(xì)胞因子免疫出現(xiàn)時(shí)間 慢，2～4周 快，立即免疫維持時(shí)間 長(zhǎng)，數(shù)月～數(shù)年 短，2～3周主要用途